（山东省烟台市食品药品检验检测中心 山东 烟台 264000）
【摘要】 目的: 建立七味消食丸含量测定方法。方法: 以高效液相色谱法测定其君药山楂中熊果酸含量。结果:熊果酸进样量在0.044352～1.33056μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=1.000),平均加样回收率99.48%(RSD=1.11%)。结论:本方法简便准确、稳定可靠、重现性好,可用于本品的质量控制。
【中图分类号】R283 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）21-0361-02
七味消食丸是由山楂（炒）、鸡内金（炒）、党参9、山药等中药制成的复方制剂，健脾消食，用于小儿厌食、消化不良等症。为控制本品质量采用高效液相色谱(HPLC) 法测定方中山楂有效成分熊果酸含量。
1.仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC-20AT高效液相色谱仪；岛津AEL-160电子天平；梅特勒AB265-S电子天平；液相色谱柱：Waters Symmetryshield TM RP18，5μm，4.6×250mm；Agela Venusil XBP C18(L)，5μm，250×4.6mm；Agilent Eclipse Plus C18，5μm，250×4.6mm；JAC-500N 型超声波振荡器（功率250W 频率40kHz）（济宁市奥波超声电器有限公司）。
1.2 试药
七味消食丸（批准文号：鲁药制ZBZ1200，烟台市中医院制剂室自制)，对熊果酸对照品来源于中国食品药品检定研究院（批号110753-200413），试剂甲醇为色谱纯，水为Millipore制备的纯化水，其它鉴别用试剂均为分析纯。
2.含量测定
2.1 色谱条件
色谱条件与系统适用性试验 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；以甲醇-0.05%醋酸溶液（88∶12）为流动相；检测波长为215nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。
2.2 制备对照品溶液
精密称取熊果酸对照品10mg置50ml量瓶内再加50%甲醇溶解稀释至刻度摇匀，再精密量取10ml置100ml量瓶中加50%甲醇，溶解稀释至刻度，摇匀得浓度为0.02mg/ml的对照品溶液。
2.3 制备供试品溶液
取本品适量研细，取约5g精密称定置具塞锥形瓶中，加100ml乙醚密塞，用功率500W，频率40kHz的超声处理30分钟取出，放冷摇均匀，滤过的滤渣要用乙醚洗2次，每次25ml，合并挥干乙醚液，用甲醇溶解残渣并转移到10ml量瓶内，将甲醇加到刻度并摇匀，滤过后取续滤液，即得。
2.4 缺山楂药材的阴性样品溶液制备
按照处方比例和制法制成缺山楂药材的阴性样品。取阴性样品5g，按照“2.3”项下的方法制成阴性样品溶液。
2.5 系统适应性试验
分别精密吸取“2.2”、“2.3”、“2.4”项下的溶液10μl，按“2.1”项下的色谱条件进样，记录色谱，详见图3。
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图4 HPLC色谱图
A: 熊果酸对照品 B：供试品 C：阴性样品
由图4可知，供试品溶液中熊果酸与邻峰分离良好(R>1.5) , 阴性对照品对熊果酸的测定无干扰。
2.6 线性关系考察
分别精密吸取浓度为0.044352mg/ml的熊果酸对照品溶液各1μl、2μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入液相色谱仪，测定各自的峰面积积分值。横坐标为熊果酸对照品的进样量，纵坐标为峰面积积分值，进行线性回归，得到回归方程y=339.29x-515.76，相关系数r=1.0000。试验结果表明熊果酸进样量在0.044352～1.33056μg之间，与峰面积积分值呈现良好线性关系。
2.7 精密度的试验
精密的吸取熊果酸的对照品溶液（0.044352mg/ml）10μl，注入液相色谱仪，连续6次进样测峰面积积分值。结果峰面积的积分值的RSD=0.47%。
2.8 重复性试验
取本品适量（批号：1105503），供试品溶液的制备可照2.4项制备供试品溶液的方法，平行制备6份。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。结果平均含量为0.1095mg/粒(RSD=0.57%)。
2.9 稳定性试验
取本品适量（批号：1105503），照4.4项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。每隔5小时进样一次，每次10μl，测定熊果酸的峰面积积分值，共考察25小时，以观察供试品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。试验结果表明供试品溶液在25小时内稳定性良好，能够满足测定需要。结果峰面积积分值的RSD=0.43%，表明其在25h内稳定性良好。
2.2.10加样回收率试验
取本品适量研细，取约5g精密称定置具塞锥形瓶中，加100ml乙醚密塞，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟取出放冷，摇匀滤过，滤渣用乙醚洗涤2次，每次25ml，合并乙醚液挥干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，
供试品溶液制备：取已测含量的本品适量（批号：20140311，熊果酸含量0.11mg/g）混匀研细，取约2.5g精密称定置具塞锥形瓶中加乙醚100ml密塞，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟取出放冷，摇均匀后过滤，用乙醚洗涤2次滤渣，每次25ml，合并挥干乙醚液，精密加熊果酸对照品溶液（浓度：0.044352mg/ml）5ml及甲醇5ml摇匀滤过，取续滤液，即得。平行制备6份。精密吸取供试品、对照品溶液10μl注入液相色谱仪，测定计算。结果见表20。
表1 加样回收率考察结果
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3.讨论
3.1 本试验比较了不同色谱柱，供试品溶液(批号20140311)取同一份，测定分别用三种品牌色谱柱A:Agilent XDB-C18 5um 4.6mm×150mm、B:依利特 Hypersil BDS-C18 5um 4.6mm×250mm、C：Kormasil C18 15um4.6mm×150mm，含量的结果没有明显差异，RSD=0.07%。
3.2 本实验采用了最大吸收波长215nm
流动相也分别选择以甲醇-0.05%醋酸溶液（88∶12）为流动相、甲醇-0.05%醋酸溶液（50∶50）、甲醇-0.1%醋酸溶液（88∶12）进行了选择；提取方法选用超声处理60分钟和超声处理30分钟进行了选择；加热回流提取分别进行了2小时、1小时、30分钟进行试验选择；提取溶剂分别用乙醚、石油醚进行了选择，最后采用此方法进行试验。
3.3 由表2可以看出，本品样品含量较稳定(0.11mg/g)，因此本标准对方中的熊果酸进行含量测定是非常必要的，能够更加有效的控制制剂质量。
【参考文献】
[1]崔洪泉，蒋秀芳等.高效液相色谱法测定山楂药材中齐墩果酸和熊果[J].临床合理用药杂志，2011，7（7）：109-110.
论文作者:王军栋,李俊强
论文发表刊物:《医药前沿》2016年7月第21期
论文发表时间:2016/8/3
标签：溶液论文; 果酸论文; 精密论文; 色谱论文; 乙醚论文; 甲醇论文; 本品论文; 《医药前沿》2016年7月第21期论文;