孙苏平[1]2002年在《小鼠骨髓移植后骨髓细胞回巢规律研究》文中研究指明目的与意义：采用异基因小鼠(C_(57)BL／6j，H-2K~b、BALB／c，H-2K~d)和同基因小鼠(BALB／c，H-2K~d)模型，观察不同方法骨髓细胞移植后小鼠体内移植细胞的回巢、生存情况，移植细胞回巢与趋化蛋白SDF-1表达的关系，探讨不同方法骨髓移植后移植细胞回巢的时间规律、移植细胞数对回巢及生存率的影响、趋化蛋白SDF-1在造血细胞回巢中的作用，为解决造血干细胞来源-脐带血广泛应用问题和提高临床骨髓移植成功率提供新的思路。本研究分为叁部分：1．骨髓移植后骨髓细胞回巢的时间规律①单次不同细胞数异基因骨髓细胞移植后不同时间点回巢效应观察实验设计：取受体鼠BALB／c白鼠96只，随机分为4组，每组24只。(60)~Co-γ射线全身致死性照射4小时后，分别按5×10~5、1×10~6、5×10~6、1×10~7不同细胞数移植供体C_(57)BL／6j黑鼠骨髓细胞。移植后24、48、72、96小时每组分别处死6只受体鼠，取外周血、骨髓细胞、脾细胞，分别检测(1)外周血(PBC)、骨髓细胞(BMC)、脾(SpC)细胞有核细胞计数；(2)流式细胞仪检测供体阳性细胞。动态观察单次移植后不同时间点的回巢情况。结果：不同时间点流式细胞仪检测外周血、骨髓、脾脏中的供体阳性细胞均以移植后第叁天最高，组间差异极显着(P＜0.01)。外周血、骨髓、脾叁者阳性细胞比例比较：第二天与第一天比，外周血升高，骨髓和脾均降低，第叁天叁者均升高，第四天再度降低。第一到第四天各组在骨髓中的平均回巢细胞数为0.625±0.241、0.245±0.147、0.346±0.131、0.227±0.094(1×10~6)差别有显着意义(P＜0.05)。与平均回巢细胞数相同，第一到第四天骨髓的平均回巢率为36.10±6.69、16.89±5.83、25.96±7.34、14.92±4.49(％)，显不一种高－低－高－低的趋势，差别亦有显着意义(P＜0.05)，提示移植细胞博士论文 中文摘要在骨髓内的回巢在时间上有其高峰阶段。与骨髓的平均回巢率相对应，脾中的回巢率也有高／－高／ 的趋势，差异亦有显着意义（尸仍．05 ）o但与骨髓回巢不同的是，脾的回巢在后两天有升高的趋势，提示脾与骨髓的回巢高峰可能在不同的时间段。 ②不同次数混合骨髓细胞移植后不同时间点回巢效应观察 实验设计：取受体鼠BALB八白鼠32只，随机分为1次移植、2次移植、3次移植、4次移植4组，每组8 ．q。供体鼠为 C。BL仔j黑鼠和BALB／C白鼠，每次移植细胞数为 2．5 X 10Y只，各组移植顺序如下： 时间点4一时24人时48刁时72刁时 1次组 C钉BL／6j 2次组BALB／C CrBL／6j 3次组 BALB／ BALB／ C盯BL／6j 4次组 BALB／C BALB／C BALB／C C盯BL／6j 时间点为‘℃旷Y射线全身致死性照射后。 各组分别在移植乙，BL爬j黑鼠骨髓细胞后24小时处死，取外周血、骨髓细胞、脾细胞，分别检测（时＋周血炉BC入骨髓细胞（BMCX脾GPC）细胞有核细胞计数；Q）流式细胞仪检测供体阳性细胞。目的在于比较每次骨髓移植后的回巢情况。 结果：不同次数混合骨髓细胞移植后每次检测都观察到较高的回巢阳性细胞，受体鼠体内供体阳性细胞比例以骨髓最高，且骨髓中阳性细胞比例以2次移植组最高，组间比较差别统计学意义非常显着（尸＜0．01人 脾回巢的阳性细胞比例I次移植组检测明显高于其他组。骨髓的回巢阳性细胞数和回巢率以2次移植组最高，脾的回巢阳性细胞数和回巢率以17k移植组最高，组间差异均有显着统计学意义（尸＜0．05人提示每次骨髓移植后都会有较高的回巢，并且有时间段上的高峰，且脾的回巢规律与骨髓不同。 ③不同移植次数异基因骨髓移植后不同时间点回巢舰律观察 实验设计：取受体鼠BALB八白鼠96只，随机分为1次移植、2次 2博士论文 中 文摘要移植、3次移植、4次移植 4组，每组 24 ．q。供体鼠为 C。召L仔j黑鼠，每次移植细胞数为 2．5 X 100／只。各组分别在不同时间点各处死 6 ／q，检测方法与内容同“②”，观察不同次数程序移植后不同时间点的回巢情况。各组移植与检测顺序如下“。石L局j为移植，6 ．q为检测，时间点为’℃O－Y射线全身致死性照射后＊ 时间点1次组2次组3次组4次组 4小时 乙，BL／6j C。，BL／6j C。，BL／6j C。，BL／6j 24小时 6 ／q C幻BL／6j C所BL／6j C引BL／6j 48小时 6只 6 ／q C奸BL／6j C肝BL／6j 72小时 6只 6 ／q 6只 C幻／hi 96＊时6只6只6只6只 120 ’J’时 6只 6只 6只 144＊时6只6只 168J时6只 结果：不同移植次数骨髓移植后不同时间点流式细胞仪检测受体鼠体内供体阳性细胞比例以以第二天和第五天较高，第七天最低，差异非常显着（尸＜o．01?
孙苏平, 蔡建明, 项莺松, 赵芳, 黄定德[2]2001年在《不同细胞量异基因小鼠骨髓移植回巢规律的实验研究》文中进行了进一步梳理目的 探讨不同细胞量骨髓移植的回巢规律 ,进一步提高移植效果。方法 采用异基因小鼠模型进行不同细胞量骨髓移植 ,观察了不同细胞量组及其在不同时间点的回巢情况。结果 回巢的阳性细胞比例 :不同细胞量组之间的差别无统计学意义 ;不同时间点以第 3天最高 (P<0 0 1)。从外周血、骨髓、脾的供体阳性细胞和回巢率的变化中可看到供体细胞在受体体内有回巢 出巢 再回巢的现象。回巢率 :骨髓低细胞量组的回巢率高于高细胞量组 (P <0 0 1) ,不同时间点和脾各组间回巢率差异无显着性 ,脾各时间点回巢率差异具有显着性 (P <0 0 5 )。结论 在一定细胞量范围内低细胞量组的回巢率高于高细胞量组 ,一次性大量移植可能是一种浪费
孙苏平, 蔡建明, 项莺松, 黄定德, 赵芳[3]2003年在《小鼠骨髓程序移植时每次移植回巢的确证》文中研究指明目的 进一步证实骨髓程序移植时每次移植后都有移植细胞的回巢。方法 采用同种同基因 (H 2Kd) +同种异基因 (H 2Kb)小鼠骨髓细胞在不同时间点的混合程序移植模型 ,以及流式细胞仪检测每一次移植的异基因骨髓细胞的回巢情况。结果 程序移植时 ,每次异基因骨髓细胞移植后在骨髓内均有较高的H 2Kb 阳性细胞回巢 ,并以第 2次移植为最高 (P <0 0 1 )。H 2Kb 细胞在脾中的回巢随着移植次数的增加而减少 ,与在骨髓中的回巢规律不同。结论 程序移植可能是通过多次移植后的每一次回巢 ,充分利用了不断腾出的龛位 ,提高移植效果
孙苏平, 蔡建明, 项莺松, 黄定德, 赵芳[4]2003年在《异基因小鼠骨髓细胞程序移植后回巢的实验研究》文中指出目的 探讨骨髓程序移植后移植次数与移植细胞数对回巢的影响。方法 采用异基因小鼠骨髓移植模型及流式细胞术 ,观察不同次数异基因骨髓细胞程序移植后不同时间的回巢状况、不同细胞数异基因骨髓细胞程序移植与单次大剂量移植的回巢状况。结果 不同次数移植后各组不同时间阳性回巢细胞数与回巢率均以第 3次移植的检测值最高 ,在共同时间点第 4天时均以2次移植组最高 (P <0 0 5 ) ,提示移植后每天都会有回巢发生 ,但不同移植次数可能在时间上有不同的回巢高峰阶段。不同细胞数异基因骨髓细胞程序移植后 ,移植细胞数低的移植组与单次大细胞数组比较 ,回巢细胞数无明显差异 ,回巢率却远远高于后者 (P <0 0 1)。结果显示在一定剂量范围内多次小剂量移植的回巢效果可能等于或好于单次大剂量移植 ,且总剂量可能降低至 10 5。结论 单次大剂量移植会造成移植干细胞的浪费 ,在一定细胞量范围内改变移植次数有利于改善移植效果。
金玉晶[5]2010年在《针灸对环磷酰胺化疗小鼠骨髓组织中粘附分子ICAM-1、VCAM-1蛋白表达的研究》文中指出目的本课题采用健康雄性昆明种小鼠,每日1次腹腔注射环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX),共3次,造成化疗致骨髓抑制模型,通过观察针灸对CTX骨髓抑制小鼠骨髓组织中粘附分子ICAM-1、VCAM-1蛋白表达的调节,探讨针灸对CTX小鼠骨髓造血微环境的影响,从针灸改善CTX小鼠骨髓造血微环境的角度揭示其改善化疗后骨髓抑制,促进造血功能的恢复,提升外周血白细胞的作用机制。方法将7周龄健康雄性昆明种小鼠,称量后依据体重随机分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组4组。空白组小鼠腹腔注入同体积的生理盐水,剩余3组小鼠按照100mg/kg/d用药量,腹腔注射CTX溶液(按照小鼠体重0.02ml/g用药量,浓度为5mg/ml),停药后4h模型即成。在造模后4h相同时间,针刺组、艾灸组小鼠分别选取“大椎”、“膈俞”、“肾俞”、“足叁里”给予针刺和艾灸治疗,空白组、模型组陪同固定,连续在每天相同时间内治疗。同时分别在造模前、造模后及治疗3天、5天后割尾取血,检测外周血白细胞。在治疗3天、5天后,分别处死一批小鼠,取出股骨,用4%多聚甲醛固定标本,石蜡包埋,4μm厚切片。用免疫组化法观察骨髓组织中粘附分子ICAM-1、VCAM-1蛋白的表达。数据分析采用SPSS13.0 for Windows统计分析软件。结果1针灸能够提升化疗小鼠外周血白细胞。造模后,与正常组相比,模型组、针刺组、艾灸组小鼠外周血白细胞均降低,有显着差异(P<0.05),说明造模成功;治疗3天后,与模型组相比,针刺组、艾灸组有所升高,无显着性差异(P>0.05),针刺组较艾灸组升高,无显着性差异(P>0.05);治疗5天后针刺组、艾灸组小鼠外周血白细胞持续升高,针刺组与空白组、模型组相比有显着差异(P<0.05),艾灸组也升高,但与针刺组相比,无显着性差异(P>0.05)。2治疗3天后,针刺组、艾灸组小鼠骨髓组织中粘附分子ICAM-1蛋白表达均上升,与模型组比有显着差异(P<0.05),艾灸组高于针刺组,无显着性差异(P>0.05);治疗5天后,针刺组、艾灸组ICAM-1均升高,与模型组相比,均有显着性差异(P<0.05),与针刺组相比,艾灸组高于针刺组,无显着性差异(P﹥0.05)。3治疗3天后,与模型组比,针刺组、艾灸组小鼠骨髓组织中粘附分子VCAM-1蛋白表达均上升,无显着性差异(P﹥0.05),艾灸组高于针刺组但无显着性差异(P﹥0.05);治疗5天后,针刺组、艾灸组VCAM-1均升高,与模型组相比,无显着性差异(P﹥0.05),艾灸组高于针刺组但无显着性差异(P﹥0.05)。结论1针灸可以改善化疗后骨髓抑制,促进造血功能的恢复,升高外周血白细胞,其作用随着治疗次数的增加呈现一定的规律性。结合前期导师组的研究成果,针灸可以提升外周血白细胞,疗效是确切的。2 CTX可以使小鼠骨髓组织中粘附分子ICAM-1表达下降,针刺、艾灸可以促进CTX小鼠骨髓组织中粘附分子ICAM-1表达,利于造血细胞与组织之间的粘附和信息交换,增强造血细胞对细胞因子的敏感性,参与机体造血的调控,修复骨髓造血微环境的损伤,进而提升外周血白细胞。3 CTX可以使小鼠骨髓组织中粘附分子VCAM-1表达下降,针刺,艾灸能够促进CTX小鼠骨髓组织中粘附分子VCAM-1表达,促进造血细胞与基质细胞形成聚集体,以利于造血细胞增殖分化,提升外周血白细胞。
吴建秋, 金志军, 项莺松, 杨云纺, 杨如俊[6]2000年在《硫酸葡聚糖预处理方案在脐血移植中应用的初步研究》文中提出目的 :进一步了解脐血造血细胞回巢潜能及硫酸葡聚糖 (DS)的动员作用机制。 方法 :重症联合免疫缺陷小鼠经亚致死剂量γ射线照射或 DS预处理后 ,进行经冻存后的人脐血移植 ,利用人粒 -单系祖细胞培养及流式细胞术 ,检测植入小鼠骨髓、脾脏等器官中的人源性细胞。 结果 :与未预处理组相比 ,DS或照射预处理组移植受体鼠内人源 CD45 + ,CD34+ 及CD19+细胞植入水平明显提高 ;DS预处理组植入水平虽较照射预处理组差 ,但毒性较低 ,小鼠存活率高达 10 0 %。 结论 :DS是一种安全、有效的预处理方案 ;DS对造血干细胞既有动员作用又有促进龛位腾出以供移植干细胞回巢的作用。
吴建秋, 杨云纺, 金志军, 蔡建明, 杨如俊[7]2000年在《人脐血分次移植重症联合免疫缺陷小鼠的实验研究》文中研究表明目的 探讨提高脐血移植效果的新方法 ,进一步了解脐血造血干细胞体内生长特性。方法 以经亚致死剂量γ射线照射后的重症联合免疫缺陷小鼠为动物模型 ,进行冻存人脐血的分次移植。利用人粒 单系祖细胞培养及流式细胞仪 ,检测植入小鼠骨髓等器官中人源性细胞。结果与一次移植相比 ,分次移植相同细胞数时 ,小鼠骨髓中人CD45 +、CD34+细胞水平明显提高 ;分次移植细胞数降低到 2 0 %时 ,其造血及部分免疫功能恢复到相近水平。结论 脐血分次移植提高了干细胞的植入率 ,为临床成人脐血移植提供了一条新思路
陈振强[8]2006年在《大鼠骨髓干细胞的培养、诱导分化为骨骼肌治疗骨骼肌缺损的动物模型的实验研究》文中研究表明[目的] 验证大鼠骨髓干细胞(MSCs)体外培养的方法及其生物学特性，研究MSCs的多项分化潜能以及其在体外定向诱导分化为骨髂肌细胞，设计一组动物模型，分别将诱导后、未诱导的MSCs、阳性对照细胞注射到动物模型体内，研究MSCs在体内的诱导分化情况及其最终的形态变化；从而，找到肌肉缺损最佳的修复方法，为临床治疗开拓广阔的前景。 [方法] 首先培养大鼠骨髓干细胞(MSCs)、大鼠骨骼肌细胞(Mb，主要用于阳性对照)，将体外培养的MSCs第叁代用5—氮杂胞苷诱联合MyoD、TGF-β1、IGF-1导分化，用免疫组织化学方法鉴定诱导后的细胞。制做动物模型：取16只10周龄的Wistar大鼠，在其左后小腿胫前肌中部注射无水乙醇0.2ml，使其胫前肌中部变性坏死。右后小腿胫前肌中部注射无菌生理盐水0.2ml。将16只大鼠模型随机分成四组，第一组阴性对照，只注射培养基；第二组实验组，注射MSCs；第叁组实验组，注射诱导后的MSCs；第四组阳性对照组，注射Mb。分别将第叁代细胞、诱导后的细胞用BrdU标记，然后收集等待注射。动物模型建立4h后，就可以注射。注射部位双小腿胫前肌中部。在注射细胞后的第3d、6d、9d和12d分别取材进行形态观察和免疫学检查； [结果] 大鼠MSCs体外培养生长良好，形态不规则，流式细胞仪检测绝大部分细胞处于G1期(79.4％)，免疫组化检测CD44阳性，而CD34阴性。大鼠Mb体外培养生长良好，形态规则，流式细胞仪检测绝大部分细胞处于G1期(79.8％)，免疫组化检测Desmine，Myosin均阳性。经诱导后MSCs，形态多
谭玉波[9]2006年在《脐血造血干细胞移植NOD/SCID小鼠后人免疫功能重建的研究》文中研究说明目的 探讨脐血来源造血干细胞植入NOD／SCID小鼠所需条件，建立hu-SRC-NOD／SCID模型并检测植入后嵌和体内重建造血和免疫的水平，以期为今后应用该模型发展疫苗、药物等相关研究奠定基础。 方法 分离分选脐血MNC、CD34~+细胞，通过尾静脉分别移植各组经照射(~(60)Co，300cGy)或未照射的NOD／SCID小鼠。移植4～10周后流式细胞术分别检测小鼠外周血、骨髓、胸腺人CD45、CD19、CD3抗原的表达；移植6周后提取部分小鼠骨髓、胸腺RNA，RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因，并用基因扫描进行T细胞克隆性分析；10周后RT-PCR检测外周血、骨髓人MHC-β_2 m及Rag2基因表达：NOD／SCID小鼠PBMNC及胸腺、骨髓、脾细胞反复冻融处理去除免疫反应性和增殖能力后与脐血MNC共培养2～3周经RT-PCR和基因扫描分析脐血T细胞克隆性。 结果 经免疫磁珠分选可获得足量CD34~+细胞，纯度80～95％；NOD／SCID小鼠照射后移植脐血CD34~+细胞或MNC组较未照射小鼠移植脐血CD34~+细胞有更高的植入率，分别为75％、50％、17％；在移植脐血CD34~+细胞及MNC照射组的小鼠外周血、骨髓中，经流式细胞术检测到一定水平的人CD45、CD19、CD3抗原表达，前者表达水平更高；移植脐血CD34~+细胞的照射组经RT-PCR可在外周血和骨髓中检测到人MHC-β_2m基因表达，在骨髓中检测到Rag2基因表达；移植脐血
卢锡林, 姚晓黎, 冯善伟, 于美娟, 陈松林[10]2008年在《骨髓间充质干细胞移植后在mdx鼠体内的分布研究》文中认为目的:研究骨髓间质干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)后体内各主要器官的分布状况。方法:取第5代SD大鼠骨髓间质干细胞,应用[3H]-TdR标记后以2×107cells/只细胞尾静脉移植到经7Gyγ射线预处理后的7-9周龄mdx鼠体内,分别于移植后24h、48h、4周、8周和16周测定血液、肺、肝、骨髓、骨骼肌及心肌的放射性分布计数。结果:经7Gyγ射线放疗预处理的mdx鼠,在尾静脉移植骨髓干细胞后,24h肺的放射性分布计数最高,为36.70±3.04;48h肝的放射性分布计数最高,为36.74±3.28;骨髓分布计数随移植时间延长增多,2周时达到高峰,计数为38.43±4.99,以后逐渐下降,但4月时仍明显高于其它组织器官,计数为13.45±1.37;骨骼肌、心肌的放射性分布计数随移植时间延长明显增高,16周时分别达到4.79±0.94和9.55±1.53。结论:在MSCs移植后早期,MSCs主要分布于肺、肝等血流丰富的器官,随移植时间延长逐渐归巢到骨髓定居,2周时达到高峰,此后逐渐向损伤器官如骨骼肌、心肌等定向迁移,并且随时间延长分布增加,从而为MSCs定居于肌组织并且分化为肌细胞提供了证据。
参考文献：
[1]. 小鼠骨髓移植后骨髓细胞回巢规律研究[D]. 孙苏平. 第二军医大学. 2002
[2]. 不同细胞量异基因小鼠骨髓移植回巢规律的实验研究[J]. 孙苏平, 蔡建明, 项莺松, 赵芳, 黄定德. 中华放射医学与防护杂志. 2001
[3]. 小鼠骨髓程序移植时每次移植回巢的确证[J]. 孙苏平, 蔡建明, 项莺松, 黄定德, 赵芳. 中华放射医学与防护杂志. 2003
[4]. 异基因小鼠骨髓细胞程序移植后回巢的实验研究[J]. 孙苏平, 蔡建明, 项莺松, 黄定德, 赵芳. 中华放射医学与防护杂志. 2003
[5]. 针灸对环磷酰胺化疗小鼠骨髓组织中粘附分子ICAM-1、VCAM-1蛋白表达的研究[D]. 金玉晶. 河南中医学院. 2010
[6]. 硫酸葡聚糖预处理方案在脐血移植中应用的初步研究[J]. 吴建秋, 金志军, 项莺松, 杨云纺, 杨如俊. 第二军医大学学报. 2000
[7]. 人脐血分次移植重症联合免疫缺陷小鼠的实验研究[J]. 吴建秋, 杨云纺, 金志军, 蔡建明, 杨如俊. 中华放射医学与防护杂志. 2000
[8]. 大鼠骨髓干细胞的培养、诱导分化为骨骼肌治疗骨骼肌缺损的动物模型的实验研究[D]. 陈振强. 山东大学. 2006
[9]. 脐血造血干细胞移植NOD/SCID小鼠后人免疫功能重建的研究[D]. 谭玉波. 暨南大学. 2006
[10]. 骨髓间充质干细胞移植后在mdx鼠体内的分布研究[J]. 卢锡林, 姚晓黎, 冯善伟, 于美娟, 陈松林. 中国病理生理杂志. 2008