李厚怀[1]2001年在《小细胞肺癌病人外周静脉血中微转移的基因检测及其临床意义的研究》文中进行了进一步梳理建立高度灵敏的恶性肿瘤特异的或相关的基因检测方法，对恶性肿瘤的临床诊断具有重要意义。本研究利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，针对在小细胞肺癌细胞中高效表达的韩蛙皮素样肽(Bombesin-like peptides，BLP-P)受体神经调节肽B(NeuromedinB，NMB-R)基因的表达，在小细胞肺癌病人的外周血中进行了检测。结果表明，在22例小细胞肺癌病人的外周血中有18例(81.8％)检测到了NMB-R基因的表达，但在10个正常人的外周血中检测到2例为阳性。其中5例NMB-R基因阳性病人，经化疗后，跟踪复查有3例显示了阴性结果。本研究还对其检测灵敏度行了深入的研究，结果表明在10个癌细胞/10~7个正常单核细胞浓度时，NMB-R mRNA仍可被检测到。统计数据表明，在预后上外周血中NMB-R基因阳性病人的生存期明显比阴性病人短。 本研究认为这种检测方法有助于诊断小细胞肺癌病人肿瘤细胞的转移情况，并可以用来监测其微小残留病灶。
李厚怀[2]2002年在《小细胞肺癌病人外周静脉血中微转移的基因检测及其临床意义》文中研究指明目的 探讨能否在小细胞肺癌(SCLC)病人的外周血中检测到肿瘤特异或相关的基因及其临床意义。方法 收集小细胞肺癌病人的外周血样22份和正常健康人血样20份,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以在小细胞肺癌细胞中高表达神经调节肽B受体(NMB-R)基因作为靶基因对标本进行了检测。结果 检测阈值是10~(-6),在22例小细胞肺癌病人的外周血中有18例(81.8％)检测到了NMB-R基因的表达,而在20个正常人的外周血中仅检测到2例为阳性。其中5例NMB-R基因阳性病人,经化疗后,跟踪复查有3例显示了阴性结果。在预后上外周血中NMB-R基因阳性病人的生存期明显比阴性病人短。结论 用RT-PCR技术检测SCLC病人外周血中NMB-R mRNA是一种敏感且特异的方法,在诊断微转移、判断预后和评估疗效方面也是有益的。
吴文婷[3]2010年在《DNA损伤修复基因多态性与肺癌的遗传易感性及药物基因组学研究》文中研究指明第一部分DNA修复基因遗传变异与肺癌易感性研究第一节GTF2H1基因多态与肺癌遗传易感性研究肺癌已成为全球范围内发病率最高的癌症,80-90%肺癌的发生与吸烟有着重要的联系,但只有10-15%吸烟者会得肺癌,提示遗传因素、遗传多态性在肺癌的发生、发展中起到重要作用。DNA修复基因多态性作为个体损伤修复能力差异的分子遗传学基础,可能是肺癌的遗传易感因素。GTF2H1 (p62)蛋白在核苷酸切除修复(NER)通路中发挥重要作用,参与XPC-HR23B蛋白早期损伤识别,并招募核酸内切酶XPG到损伤部位完成酶切过程。此外,GTF2H1蛋白参与转录并调节多个基因转录激活。我们推测GTF2H1基因上的遗传变异可能单独或联合影响中国人群肺癌的遗传易感性。为了验证这一假设,我们在中国汉族人群的500例肺癌患者和517例年龄、性别与之相匹配的正常对照中,对GTF2H1基因上的6个单核苷酸多态(SNPs)位点进行了基因分型,探讨了GTF2H1基因的遗传多态对肺癌患病风险的影响。同时,为研究-79 C>T多态改变对GTF2H1基因的转录调控作用,我们构建了分别含有C和T等位基因的GTF2H1启动子区域的pGL3-Basic报告基因载体,进行了体外转录活性实验。我们发现,在显性模型下,3个SNP位点的突变基因型与野生型相比显着增加肺癌风险效应,rs3802967(校正OR=1.38；95%CI=1.04-1.82),rs4150606(校正OR=1.44；95%CI=1.08-1.92)和rs4150678(校正OR=1.37：95%CI=1.04-1.81)。rs3802967 C／T+T／T基因型在男性人群中风险性更加显着(P=0.002)。rs4150667显示出与肺癌的负相关,这一风险在隐性模型下更为显着(校正OR=0.59,95%CI=0.38-0.93)。单倍型分析显示单倍型“222212”(1代表常见等位基因,2代表罕见等位基因)显着增加肺癌患病风险性(P=0.03)。荧光素酶报告基因检测实验显示携带T-等位基因报告基因载体有更高的荧光素酶表达活性,提示-79C→T改变可能影响GTF2H1基因转录调控。因此,我们认为GTF2H1单核苷酸／单倍型多态可能与中国人群肺癌遗传易感性有关。第二节Rad52基因多态与肺癌遗传易感性和药物基因组学研究烟草等外源物质的暴露会造成双链断裂(DSBs).同源重组(HR)修复是真核生物双链断裂损伤修复的主要方式,对于维持哺乳动物细胞的基因组完整性十分重要。Rad52在同源重组早期结合到DSBs上,保护它免于外切核酸酶的攻击,并协助由Rad51介导的同源重组的发生,在肺癌发生过程中扮演重要角色。我们在中国汉族人群的500例肺癌患者和517例年龄、性别与之相匹配的正常对照中,对Rad52基因上的9个单核苷酸多态(SNPs)位点进行了基因分型,探讨了Rad52基因的遗传多态对肺癌患病风险的影响。同时,为研究3’UTR-104G>A多态改变对Rad52基因的表达水平调控作用,我们构建了分别含有G和A等位基因的Rad52 3'UTR区域的pGL3-Promoter报告基因质粒,进行了体外转录活性实验。并通过生物信息学软件预测和SPR实验进一步探讨了等位基因间表达差异的分子机理。单位点分析发现,Rad52基因3个位于调控区SNP rs10774474(P=0.002), rs11571378(P=1.647×10-5),rs1051669(P=0.002)在肺癌病例和对照组中的分布具有显着差异,经Bonferroni多重校正后,关联均仍具有显着性。全局显着性检验表明rs10774474-rs11571378构成的单倍型在病例组和对照组中的分布频率存在显着差异(P=0.007),10000次置换检验后,关联仍显着。单倍型‘12’(顺序为rs10774474-rs11571378,1代表常见等位基因,2代表罕见等位基因)具有风险效应。对rs1051669(104G>A)多态功能研究表明：rs1051669-A报告载体荧光素酶报告基因相对活性下降。运用DINAMelt软件预测发现,G等位基因自由能更低,其可能通过形成更稳定的局部二级结构来稳定mRNA增强报告基因的表达。同时,SPR实验显示,突变型A-等位基因RNA与胞质抽提物调控因子结合能力更强。提示104G→A改变可能增强Rad52基因与负调控因子的结合而降低Rad52基因表达水平。以上结果提示Rad52基因单核苷酸多态可能与中国人群肺癌遗传易感性有关,在肺癌发生过程中发挥重要作用。第二部分非小细胞肺癌铂类药物化疗药物基因组学研究第一节XPD基因与非小细胞肺癌铂类药物化疗关联分析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)约占肺癌的80%,其中2／3的患者在确诊时已处于晚期(Ⅲ或Ⅳ期),失去了手术机会。铂类药物(顺铂、卡铂)是目前治疗晚期NSCLC的主要化学药物。铂进入细胞后,与DNA结合形成铂-DNA加合物,导致DNA链间交联或链内交联,引起细胞死亡。DNA损伤修复能力的差异可能是决定铂类药物疗效的重要因素。XPD在机体核苷酸切除修复(NER)中扮演重要角色,拥有5’-3’DNA解旋酶活性,行使NER以及基础转录过程中DNA结链作用。我们推测,XPD基因遗传多态可能影响DNA损伤的修复移除能力,而导致个体间疗效差异。鉴于此,我们观察了445例接受铂类为主化疗的NSCLC患者治疗后情况,采用MassARRAY时间飞行质谱生物芯片系统检测XPD基因叁个潜在功能位点(p.Arg156Arg, p.Asp312Asn, p.Asp711Asp)遗传多态,以探讨该基因单核苷酸多态与NSCLC患者对铂类药物化疗疗效,毒副反应及预后的关系。非条件logistic回归分析发现,XPD基因p.Arg156Arg位点纯合突变A／A基因型显着增加患者发生3-4度血液毒性风险性,进一步分析发现,该遗传多态与3-4度白细胞毒性显着相关(趋势检验P=0.007),经Bonferroni多重校正后,关联均具有显着性。单倍型／二倍型分析显示,单倍型‘CG’的携带者发生白细胞毒性的风险显着降低,经过10,000次置换检验后,关联均具有显着性。在诺维本联合顺铂用药人群中,XPD p.Arg156Arg突变基因型A／A显着增加铂类药物敏感性(P=0.003),血液毒性风险性(P=0.012),白细胞毒性风险性(P=0.003)。XPD p.Asp312Asn, p.Asp711Asp多态与肺癌患者总生存期显着相关(log-rank P分别为0.006,0.006)。XPD p.Asp312Asn多态在ⅢB期人群中与预后关联更加显着(log-rank,P=7.25×10-5)。本研究首次发现,XPD基因遗传多态与晚期肺癌患者铂类药物化疗后的血液毒性,总生存期显着相关。XPD p.Arg156Arg, p.Asp312Asn, p.Asp711Asp单核苷酸多态性有可能作为检测指标来预测铂类药物的不良反应和预后风险,成为指导该类药物的个体化用药的依据。第二节中国人群晚期非小细胞肺癌铂类为主化疗药物基因组学研究铂类耐药由多种因素引起,包括药物解毒增加；DNA损伤修复能力增强；细胞耐受性增加等。核苷酸切除修复(NER)主要修复各种大片段DNA损伤造成的DNA双螺旋扭曲,如链内交联,同源重组(HR)修复链间交联(ICL),错配修复(MMR)对药物所致的加合物的识别及处理产生一种前凋亡信号。此外,叶酸代谢,炎症因子等因素均与铂类耐药相关。本部分研究收集445例以铂类药物为主化疗NSCLC患者血样及其临床资料,采用候选通路策略,选择了以上通路XPC, XPF, XPG, MLH1, MSH2, MTHFR, XRCC3, lig4, Rad52, IL-1a, IL-1 b等11个关键基因的17个SNP位点,通过基因多态与化疗近期疗效、不良反应及远期生存期的关联分析,寻找与NSCLC患者对铂类药物敏感性相关的基因及其多态位点。单位点分析表明,MTHFR rs1801131与化疗敏感性相关。接受诺维本联合铂类用药亚组人群分层分析发现Rad52 rs1051669 A/A基因型增加化疗疗效敏感性。7个基因上的9个SNP多态与不良反应显着相关。False discovery rate多重校正后,IL-1 b rs16944 (-511 C>T), rs1143627 (-31T>C)与3-4度白细胞毒性和3-4度粒细胞毒性关联仍具有显着性。分层分析显示,rs16944与3-4度白细胞毒性相关性在非吸烟人群中更显着(校正OR=5.10,95%CI=2.31-11.19,P=5.41×10-5)；其与3-4度粒细胞减少相关性在非吸烟者(校正OR=16.38,95%CI=5.88-45.61,P=8.84x10-8),女性(校正OR=12.87,95%CI=3.70-44.76,P=5.92×10-5)亚组人群中更显着。进一步基因-环境交互分析表明,IL-1b rs16944基因型,rsl143627基因型与吸烟状态、性别因素在对白细胞减少、粒细胞减少发生的影响中呈现显着的交互作用。在粒细胞减少不良反应中,rs16944基因型-吸烟,rs16944基因型-性别交互作用P值分别为0.001,0.007。携带XPC rs222800 T/T基因型个体生存期低于携带C/C+C/T基因型个体(MST,14个月v18个月),携带Rad52 rs1051669 A/A基因型个体生存期低于携带野生型G/G+A/G个体(MST,7个月v 18个月),差别具有统计学意义。本研究首次从整体上探索了DNA损伤修复通路,叶酸代谢通路及炎症通路基因多态和肺癌化疗疗效,不良反应及总生存期的关系。发现8个基因上的10个SNP位点可能影响中国人群晚期NSCLC患者对以铂类为主化疗方案药物敏感性和安全性,在进行多重检验校正后,发现2个位点的基因型效应仍表现显着。2个SNP位点与非小细胞肺癌患者预后相关。以上结果提示它们和NSCLC含铂化疗潜在的生物学联系,为提高NSCLC患者化疗敏感性、延长生存期和减轻毒副作用,建立个体化治疗提供依据。
张宏伟[4]2005年在《非小细胞肺癌侵袭和转移的分子生物学研究》文中研究指明第一部分: VEGF和ICAM-1在非小细胞肺癌的表达与侵袭、转移和预后之间关系的研究 目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和细胞粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)在非小细胞肺癌组织中表达及其与肺癌侵袭转移和预后的关系,探讨它们在非小细胞肺癌发生、发展过程中的分子生物学作用,以及检测此两项指标对临床的指导意义。 方法:采用免疫组化S-P法检测86例非小细胞肺癌组织中的VEGF和ICAM-1的表达水平,并结合术后临床资料和随访资料分析。用x~2检验分析比较两组间差别,用Kaplan-Meier生存曲线计算术后生存时间,Log Rank检测比较组间生存时间的差别。 结果:(1)86例非小细胞肺癌组织中,VEGF表达率为65%(56/86);其中鳞癌63%(30/48),腺癌68%(26/38),二者无显着性差异(x~2=0.33,P>0.05)。淋巴结转移组VEGF表达高于淋巴结无转移组(78%vs47%,x~2=8.73,P<0.01)。Ⅰ期VEGF表达率为47%(16/34),Ⅱ期73%(30/41),Ⅲ期91%(10/11),Ⅰ期和Ⅱ期差别显着(x~2=5.34,0.01<P<0.05),Ⅱ期和Ⅲ期差别无意义(x~2=0.70,P>0.05)。术后转移组VEGF表达率高于无转移组(90%vs41%,x~2=23.24,P<0.01)。VEGF阳性表达患者术后转移率高于阴性患者术后转移率(57%vs33%,x~2=4.43,0.01<P<0.05)。VEGF阳性表达的患者5年生存率低于VEGF阴性表达患者(6.77%vs59.03%,P=0.0001)。(2)86例非小细胞肺
温开镇[5]2006年在《实时荧光定量PCR检测肺癌患者血浆循环DNA及其临床意义》文中研究说明目的：定量检测肺癌患者血浆循环DNA并探讨其临床应用价值。 方法：收集86例肺癌、40例肺部良性疾病及97例健康志愿者的血浆样本，以“微量基因组DNA抽提试剂盒”抽提血浆DNA，以实时荧光定量PCR检测各组血浆循环DNA含量，并作受试者工作特征曲线。 结果：肺癌组、肺部良性疾病组和健康对照组血浆循环DNA中位数分别为19.85ng／ml、4.65ng／ml和3.2ng／ml，肺癌组血浆循环DNA明显高于健康对照组及肺部良性疾病组，差异有显着性(P=0.000)；Ⅰ期肺癌患者血浆循环DNA中位数达14.7ng／ml，是肺部良性疾病组的3倍多，是健康对照组的4倍多，叁组间差异有统计学意义(P=0.003)。所作受试者工作特征曲线下面积为0.879(95％可信区间为0.830～0.928)：以≤10.75ng／ml作为临界值，血浆循环DNA对肺癌的敏感性为82.6％，特异性为84.7％。血浆循环DNA浓度与肺癌患者临床分期、肿瘤大小和血清CYFRA21-1密切相关(P=0.028，P=0.027，P=0.006)，而与病理类型、肿瘤类型、组织学分级及外周血白细胞数无明显相关性(P=0.786，P=0.658，P=0.772，P=0.068)。肺癌患者术后血浆循环DNA水平明显低于术前(P=0.001)，当肺癌复发时血浆循环DNA水平又升高，与术前比较无明显变化(P=0.893)。 结论：血浆循环DNA定量检测可以作为肺癌筛查与早诊、随访观察疗效和监测复发的指标。
参考文献：
[1]. 小细胞肺癌病人外周静脉血中微转移的基因检测及其临床意义的研究[D]. 李厚怀. 苏州大学. 2001
[2]. 小细胞肺癌病人外周静脉血中微转移的基因检测及其临床意义[J]. 李厚怀. 疑难病杂志. 2002
[3]. DNA损伤修复基因多态性与肺癌的遗传易感性及药物基因组学研究[D]. 吴文婷. 复旦大学. 2010
[4]. 非小细胞肺癌侵袭和转移的分子生物学研究[D]. 张宏伟. 山东大学. 2005
[5]. 实时荧光定量PCR检测肺癌患者血浆循环DNA及其临床意义[D]. 温开镇. 福建医科大学. 2006
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