张坦[1]2001年在《反义丝裂素活化蛋白激酶核苷酸对血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原基因表达的影响》文中进行了进一步梳理血管平滑肌细胞（VSMC）增殖在冠状动脉粥样硬化的发生发展中起重要作用。丝裂素活化蛋激酶（MAPK）是细胞增长有关信号刺激细胞增殖、分化的胞内信息传递的交汇点。MAPK的活化，可刺激血管平滑肌细胞增生。增殖细胞核抗原（PCNA）是判断细胞增殖状态的直接的、可靠的指标。反义核苷酸可选择性抑制某些特定基因的表达，从而阻断与这些基因有关的病理过程的发展。反义丝裂MAPK核苷酸对血管平滑肌细胞增殖是否有抑制作用目前尚无定论，本文旨在探讨反义MAPK核苷酸对VSMCPCNA基因表达的影响，了解其是否存在体外阻断VSMC的增殖的作用，为反义MAPK核苷酸在临床的应用提供理论依据。目 的:观察反义MAPK核苷酸对VSMC的PCNA基因mRNA表达的影响，了解其是否具有抑制VSMC增生的作用。<WP=4> 方 法：(1)建立体外培养的大鼠主动脉VSMC模型，用免疫荧光染色方法进行细胞鉴定。(2) 用反义MAPK核苷酸对VSMCJ进行干预培养，应用Northern Blot杂交技术，检测PCNA基因mRNA表达情况，观察反义MAPK核苷酸对VSMC增殖的抑制作用。 结 果：0.8(mol/L的反义MAPK核苷酸预72小时后，血管平滑肌细胞的PCNA基因mRNA表达较对照组（20%FBS）明显减少，二者mRNA含量灰度测定值有显着差异。结 论：（1）反义MAPK寡核苷酸可明显减少体外培养的大鼠VSMC PCNAmRNA的表达，从而抑制其增殖。（2）有力地支持了MAPK是生长分裂信号通路交汇点的观点。
李德[2]2004年在《腺病毒介导BTEB2反义RNA抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生的实验研究》文中提出研究背景和目的:经皮冠状动脉介入治疗(PCI)已成为目前治疗冠心病的重要手段,但无论是经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)还是支架植入术都存在术后冠脉再狭窄(RS)的问题。RS的发生机制尚未完全明确,动物实验及临床研究资料表明,新生内膜增生是各种PCI术后RS的共同特征。内皮损伤后,在多种生长因子和细胞因子的作用下,中膜血管平滑肌细胞(VSMC)在短时间内发生表型转化和增殖(损伤后1天)并向内膜迁移(4～7天),内膜VSMC进一步增殖导致新生内膜形成及增生。因此,VSMC增殖是RS的主要病理机制的观点目前已得到公认。基本转录元件结合蛋白2(BTEB2)是一种锌指转录因子,它与基因启动子中GC序列结合,从而调节基因的表达。BTEB2在胚胎期动脉及内皮损伤动脉中去分化的VSMC中高效表达,在成年动脉及正常VSMC中无表达。生长剌激(生长因子、佛波酯、AngII等)可诱导其在VSMC中大量表达。现有的文献提示BTEB2可能在VSMC的增殖的过程中起重要作用,它可激活增殖相关基因(PDGF、CDK4、TGF-β、c-jun),并参与VSMC表型转化的调控。因此,以BTEB2为目标的干预性研究可能为再狭窄防治开辟新的途径。本研究拟通过腺病毒介导BTEB2反义RNA在培养VSMC中表达,抑制BTEB2蛋白表达,了解BTEB2反义RNA对体外培养VSMC增殖及其相关基因表达的影响;用反义BTEB2腺病毒载体转染球囊损伤后的大鼠颈动脉,于在体水平探讨BTEB2反义RNA对VSMC增殖及新生内膜增生的影响。研究方法:采用Ⅰ型胶原酶消化法进行大鼠主动脉VSMC原代培养;从对数生长期的VSMC原代大鼠VSMC提取总RNA,用RT-PCR技术扩增得到BTEB2 cDNA片段;采用位置特异性重组方法构建携带大鼠反义BTEB2基因的腺病毒载体Ad.ASBTEB2,通过293细胞扩增,纯化制取高滴度重组腺病毒。Ad.ASBTEB2转染培养VSMC后,用RT-PCR检测BTEB2反义RNA的表达;以蛋白质免疫印迹、免疫细胞化学及RT-PCR等技术检测分析BTEB2反义RNA对BTEB2、VSMC增殖相关基因(PCNA、AT1R、PDGF-BB)和表型标志基因(SMαA和SMemb)的蛋白及其mRNA表达的影响;用四唑盐(MTT)比色试验及流式细胞仪等方法检测BTEB2反义<WP=11>RNA对血清诱导的VSMV增殖的影响。建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,用Ad.ASBTEB2转染球囊损伤后的大鼠颈动脉,1～3周后进行病理切片,检测BTEB2反义RNA对新生内膜增生的影响;采用免疫组化技术检测BTEB2在新生内膜中的表达;用伊文氏蓝染色检测BTEB2反义RNA对损伤动脉内皮修复的影响。研究结果:①用位置特异性重组技术成功构建了携带携带大鼠反义BTEB2基因的腺病毒载体Ad.ASBTEB2,其滴度约5×1010pfu/ml;②在VSMC转染重组腺病毒Ad.ASBTEB2后各时相点,经RT-PCR均可检测到BTEB2反义RNA的表达;③与未转染组和Ad.LacZ组比较,Ad.ASBTEB2组各时相点的mRNA和蛋白表达明显减少(p<0.01);④MTT试验显示,在不同MOI组Ad.ASBTEB2组吸光度值均较未转染组和Ad.LacZ组显着降低(p<0.01),而且吸光度值降低的趋势随着MOI的增加而更加明显;⑤通过流式细胞仪检测VSMC增殖周期发现,转染Ad.ASBTEB2后可显着增加G0/G1期细胞(p<0.01)及减少S期和G2/M期细胞比例(p<0.01)。⑥免疫细胞化学检测结果显示,转染Ad.ASBTEB2可显着抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖相关基因PCNA、AT1R、PDGF-BB的蛋白表达;⑦免疫细胞化学及RT-PCR检测发现,Ad.ASBTEB2转染显着抑制VSMC去分化型标志基因SMemb蛋白及mRNA表达(p<0.01),并逆转血清诱导的分化型标志基因SMαA蛋白及mRNA的表达下调(p<0.01);⑧球囊损伤颈动脉内膜被伊文氏蓝染成明显的深蓝色,表明内皮损伤效果明显;损伤后1周新生内膜开始形成,2周以后新生内膜明显向管腔内增生造成明显的管腔狭窄;⑨在正常动脉VSMC中,通过免疫组织化学检测未见到BTEB2的表达;未转染组和Ad.LacZ组在球囊损伤后7和14天可检测到明显的BTEB2表达,损伤后21天BTEB2表达明显减少;在各时相点Ad.ASBTEB2组BTEB2表达均显着低于未转染组和Ad.LacZ组(p<0.01);⑩重组腺病毒对损伤动脉中层VSMC的转染效率约12%～30%;损伤后3周,与未转染组和Ad.LacZ组相比,Ad.ASBTEB2组的I/M明显降低(0.77±0.07 vs 1.63±0.36,1.81±0.21, p<0.01);损伤后3周Ad.ASBTEB2组的伊文氏蓝内膜蓝染百分比显着低于未转染组和Ad.LacZ组(p<0.01)。研究结论:①本实验构建的腺病毒载体Ad.ASBTEB2可介导BTEB2反义RNA在原代培养VSMC及球囊损伤的大鼠颈动脉中的表达;②Ad.ASBTEB2转染可抑制VSMC血清诱导的BTEB2过度表达及VSMC增殖;③Ad.ASBTEB2转染可抑制内皮损伤引起的大鼠颈动脉新生内膜增生,促进损伤内皮的修复。
姜广建[3]2004年在《hrg-1基因表达与功能研究》文中认为高血压是环境因素和遗传因素相互作用所引起的多基因疾病。血管活性肽及其受体、生长因子和细胞因子及其受体、细胞信号转导蛋白、细胞周期调控蛋白等都与高血压的发生有关，这些能影响血压的基因称为高血压相关基因。高血压相关基因（hypertension-related gene, hrg-1）是用差异显示技术对SHR和WKY大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell, VSMC）cDNA文库进行筛选时分离得到的一个与VSMC增殖相关的新基因，因其在SHR VSMC中表达活性降低而得名。后来发现，该基因不仅在VSMC中表达，在心、肾、脑、肺、肝、白细胞等不同组织中也有广泛分布。虽有研究揭示，转染hrg-1蛋白能抑制Raf（Raf-1）和丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）活性，下调抗细胞凋亡基因（bcl-2）和增殖细胞核抗原（PCNA）基因表达及抑制细胞增殖。但目前关于hrg-1基因表达产物影响VSMC增殖、迁移、分化的机制尚不清楚，其亚细胞定位及在胚胎发育中的作用也未见报道。本研究课题从细胞、蛋白和分子水平上探讨hrg-1在VSMC 再分化及信号转导过程、卵分裂和早期胚胎发育中的作用及其对VSMC增殖、迁移、细胞周期相关蛋白和细胞周期进程的影响。1 hrg-1在VSMC再分化过程中的表达及功能研究为研究hrg-1表达与VSMC再分化的关系及其在细胞生物学行为调节方面的作用，本部分实验采用血清饥饿培养和全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, atRA)诱导方法使处于增殖状态的去分化型VSMC再分化，观察细胞再分化过程中hrg-1基因表达活性与VSMC表型标志基因(SM22α、SM α-actin)表达、细胞形态特征及生物学行为之间的关系。实验结果如下：1.1 atRA诱导去分化型（合成型）VSMC 24 h后，分化型（收缩型）VSMC标志基因SM22α表达活性明显增加，48 h达高峰，达对照细胞的2.5倍，至72 h仍维持在较高水平上；另一个分化型VSMC标志基因SM α-actin表达活性在atRA诱导24 h后达对照的2倍，且随着时间的延长，表达活<WP=5>性持续增加。形态学观察结果显示，传代培养的去分化型VSMCs 呈上皮样形状，被atRA诱导分化的细胞呈长梭形。在血清饥饿培养的VSMCs，其表型标志基因表达和细胞形态学变化与atRA诱导分化的细胞相一致。结果提示，血清饥饿和atRA诱导均可使VSMCs从合成型向收缩型转化，即发生再分化。1.2 VSMCs经血清饥饿培养24 h 或常规培养的VSMCs 被atRA处理24 h后，hrg-1基因表达活性显着升高，其mRNA水平分别是对照细胞的2.38和2.05倍，至72 h, 其表达仍维持在较高水平上。用 Western印迹检出的HRG-1含量变化与用RT-PCR检出的mRNA含量变化相一致。免疫细胞化学染色结果显示，血清饥饿培养24 h的细胞，其胞质内HRG-1阳性染色颗粒与对照组相比明显增多。表明VSMC再分化过程中HRG-1表达活性增加。1.3 以HRG-1抗体和蛋白A-Sepharose对VSMCs裂解液进行免疫沉淀后，用SM α-actin（细胞骨架微丝的主要成分）抗体进行蛋白印迹的实验结果表明，在VSMCs经血清饥饿诱导分化后，HRG-1抗体沉淀HRG-1的同时也使SM α-actin发生沉淀，即免疫沉淀物中出现明显的SM α-actin的条带，随着血清饥饿时间的延长，条带趋于加深。用HRG-1和SM α-actin抗体对VSMCs进行免疫双荧光染色后，激光共聚焦显微镜下观察发现，在血清饥饿培养24 h 的VSMCs中，HRG-1和SM α-actin在细胞同一区域共定位。表明血清饥饿不仅可诱导HRG-1和SM α-actin表达，而且，HRG-1在胞质中以与SM α-actin相互缔合的方式存在。1.4 用携带hrg-1全长cDNA的pcD2-hrg-1真核表达质粒转染VSMCs，经400 μg/ml G418筛选后, 刮去玻片一侧的细胞，将玻片置于含10% NCS的M199培养基中，继续孵育24 h后检测细胞迁移活性，结果显示hrg-1过表达使VSMCs迁移能力受到显着抑制。 上述结果提示，血清饥饿和维甲酸诱导均可使VSMCs从合成型向收缩型转化，即发生再分化。VSMCs再分化过程中HRG-1表达活性增加，HRG-1主要在胞质中以与SM α-actin相互缔合的方式存在，并且在调节VSMC迁移活性方面发挥一定作用。2 hrg-1基因对VSMC周期蛋白E（cyclin E）和P27蛋白表达及细胞增殖的影响<WP=6>hrg-1作为高血压相关基因被克隆，既往研究发现心钠素（ANF）、降钙素基因相关肽（CGRP）和肾上腺髓质素（AM）等抑制VSMC增殖的血管活性肽均可上调hrg-1基因表达，由此提示，HRG-1可能是VSMC增殖的负调控因子，但其抑制细胞增殖的作用机制目前尚不清楚。细胞周期调节蛋白是细胞周期进程的调控因子，对细胞增殖的调节发挥重要的作用。HRG-1抑制VSMC增殖是否与调节细胞周期调节蛋白表达活性有关目前尚不明了。本部分实验采用pcD2-hrg-1真核表达质粒转染体外培养的VSMCs，观察该基因过表达对cyclin E和P27表达及细胞增殖的影响，探讨HRG-1抑制VSMC增殖与细胞周期蛋白表达和细胞周期进程之间的关系。结果如下：2.1 转染pcD2-hrg-1真核表达质粒后，与转染绿色荧光蛋白（pEGFP-C2）的对照细胞相比，细胞生长速率明显减慢，在转染24、48、72 h后，细胞增殖速率分别被抑制14.8%、37.8%、35.4%；相反，在转染hrg-1反义RNA表达载体的细胞，其生长速率明显加快，转染48 、72 h后，增殖速率分别增加33.6%、28.7%。2.2
佚名[4]2001年在《《解放军医学杂志》2001年第26卷主题词索引》文中研究表明(按汉语拼音字母顺序排列 )Ａ阿霉素 ｐ38信号途径与胃癌细胞阿霉素耐药相关 (王雨田等 ) 2 6(1 ) :2 4阿霉素肾病 阿霉素肾病组织环孢素亲合素基因的表达 (夏正坤等 )2 6(1 1 ) :840阿莫西林 快速崩解阿莫西林片的人体相对生物利
佚名[5]2003年在《《解放军医学杂志》2003年(第28卷)主题词索引 (按汉语拼音字母顺序排列)》文中认为数字和字母9 顺维甲酸 9 顺维甲酸对肺鳞癌细胞生长、分化及凋亡的作用 (张世国等 ) 2 8(1) :731 型人免疫缺陷病毒 中国汉族人SDF1 β编码区新多态性位点初步研究 (刘明旭等 ) 2 8(4 ) :30 5Caspase 1 Caspa
刘颖格[6]2002年在《反义c-myc寡核苷酸、反义c-myc真核表达载体和反义c-myc重组腺病毒载体在大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用》文中进行了进一步梳理多种因素参与了哮喘气道炎症，包括各种抗原、炎症介质及细胞因子等。在气道炎症发生的同时伴有气道重塑(airway remodelling)的进行，因此，气道重塑是哮喘发生的早期病理变化之一。气道重塑包括气道上皮的增厚及脱落、上皮下胶原沉积、ASMC的增生肥大以及粘膜下血管的重新分布和塑形。其中ASMC的增生和肥大是参与气道重塑的主要因素之一。ASMC增生与支气管反应性增高及不可逆气流阻塞关系密切，抑制ASMC增殖对哮喘治疗有积极作用。 炎症介质及细胞因子对ASMC的刺激要经过不同途径的信号转导，将细胞外信号传递到细胞内，启动或抑制各种基因的表达，最终启动细胞周期。原癌基因是细胞内信号转导的最后共同通道，抑制原癌基因的表达可抑制ASMC的增殖与分化。 反义核酸可干扰基因产物的表达，是基因治疗的有效方法。已有研究表明反义c-myc寡核苷酸可抑制血管平滑肌、血管内皮及肝细胞增殖，抑制c-Myc及PCNA的表达。利用腺病毒载体将反义蛋白激酶-C导入ASMC可抑制细胞增殖。静脉注射反义IL-5寡核苷酸可抑制抗原诱导的气道嗜酸性粒 第四军医大学博士学位论文 细胞浸润，同时降低气道反应性。为观察反义C－p C对ASMC增殖的影响， 本研究如下： 一、反义C－刀wC寡核旮酸对大鼠ASMC增殖的影响 合成反义C－my C寡核昔酸，利用阳离子脂质体将反义C－以w寡核昔酸导 入大鼠ASMC，MTT法测定细胞生长，RTICR检测c－pc mRNA的表达， 免疫组织化学染色检测C－MyC的表达。结果表明反义C－m丁C寡核昔酸可抑制 大V’””增殖，且这种抑制作用可持续到反义c－mxc寡核昔酸作用后第六 天。反义C－川飞C寡核昔酸的这种抑制作用具有剂量依赖性，随剂量的增大， 抑制作用明显增强。反义c－mxc寡核昔酸可降低ASMC c－mxc mRNA的转录 并抑制 ASMC C－MyC蛋白的表达。 二、反义C－＊C寡核旮酸抑制大鼠ASMC增殖与细胞凋亡的关系 将反义C－m吵C寡核昔酸导入大鼠ASMC，反义C－p C寡核昔酸可抑制大 鼠ASMC增殖，通过细胞染色观察凋亡小体的形成，流式细胞技术检测凋 亡峰的出现，细胞总DNA琼脂糖电泳检测凋亡特有电泳图谱，免疫组织化 学染色显示凋亡相关基因产物Bax及BclZ的表达。结果显示反义c－叮K寡 核昔酸导入大鼠ASMC后72 h无凋亡小体形成，流式细胞技术没有检测到 凋亡峰的出现，没有观察到典型的梯状凋亡图谱，免疫组织化学染色显示凋 亡相关基因产物Bax及Bcl2在各组表达无明显差异。反义c－m丁c寡核苦酸 抑制大鼠ASMC增殖与细胞凋亡无关。 叁、反义C－刀wC真核表达载体的构建与大鼠ASMC增殖 克隆大鼠正义、反义C－my C片段，并构建大鼠反义及正义C－m吵C真核表 达载体，将所得载体导人大鼠ASMC，MTT法测定其对细胞生长的影响， 流式细胞技术观察反义及正义C－my C真核表达载体对细胞周期的影响，免疫 组织化学染色检测C－MyC的表达。结果显示反义C－p C真核表达载体可抑制 大鼠ASMC增殖，延长细胞S期并抑制C－MyC的表达。 四、反义C－＊C重组腺病毒载体的构建与大鼠ASMC增殖 6 第四军医大学博士学位论文 构建大鼠反义及正义 C－m丁C细菌质粒，并将所得细菌质粒及腺病毒 EI缺夫质粒导入293细胞系，经共转染得到正义及反义重组腺病毒载体。MTT法检测重组腺病毒载体对大鼠ASMC增殖的抑制作用，免疫组织化学染色检测重组腺病毒载体对C－MyC蛋白的表达。结果显示反义C－m少C重组腺病毒载体可抑制大鼠ASMC增殖，抑制c－Myc的表达。
佚名[7]2004年在《中华医学杂志2004年第84卷主题词索引》文中研究说明(以汉语拼音为序)A阿司匹林 阿司匹林降低缺血性脑血管病患者血浆溶血磷脂酸水平(姚存姗,伍期专,唐朝枢等)(22):19261928埃希氏菌属 新CMY型头孢菌素酶在大肠埃希菌中的流行(管希周,刘又宁,罗燕平等)(22):18721875癌,非小细胞肺
参考文献：
[1]. 反义丝裂素活化蛋白激酶核苷酸对血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原基因表达的影响[D]. 张坦. 青岛大学. 2001
[2]. 腺病毒介导BTEB2反义RNA抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生的实验研究[D]. 李德. 第叁军医大学. 2004
[3]. hrg-1基因表达与功能研究[D]. 姜广建. 河北医科大学. 2004
[4]. 《解放军医学杂志》2001年第26卷主题词索引[J]. 佚名. 解放军医学杂志. 2001
[5]. 《解放军医学杂志》2003年(第28卷)主题词索引 (按汉语拼音字母顺序排列)[J]. 佚名. 解放军医学杂志. 2003
[6]. 反义c-myc寡核苷酸、反义c-myc真核表达载体和反义c-myc重组腺病毒载体在大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用[D]. 刘颖格. 第四军医大学. 2002
[7]. 中华医学杂志2004年第84卷主题词索引[J]. 佚名. 中华医学杂志. 2004
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