葛春喜[1]2002年在《白纹伊蚊对登革病毒细胞内免疫的研究》文中研究指明登革热是由登革病毒引起，经媒介伊蚊传播，在世界上流行最广泛的一种虫媒病毒性疾病。控制媒介伊蚊是防治DF最有效的方法，但传统上控制登革热媒介的措施存在许多局限性，转基因技术的出现为蚊媒疾病的防治提供了一个新的思路。本研究扩增和克隆登革病毒C基因和prM基因，构建了昆虫表达载体pBhspEGFP，将prM基因以3种不同表达形式重组入昆虫表达载体，Western Blot和荧光显微镜观察证明在白纹伊蚊C6／36细胞中成功表达了prM-EGFP融合蛋白。转染重组质粒后C6／36细胞表现出对登革病毒入侵的抵抗性，从而复制出C6／36细胞对登革病毒的细胞内免疫现象。发现无论是否表达prM蛋白，只要有prM基因转录可引起细胞内免疫现象；prM基因正义和反义转录形式均可诱导细胞内免疫；并探讨其形成机制可能是通过RNA干扰作用而产生。构建了以转座子piggyBac因子为基础的转基因载体pB[PUBnls EGFP-prM]，PCR和Southern Blot证明构建的转基因载体可以将EGFP-prM基因整合入在蚊虫基因组中。验证了转座子piggyBac因子、启动子polyubiquitin可以在白纹伊蚊中发挥作用，为进一步构建不传播登革病毒的转基因白纹伊蚊奠定了基础。
葛春喜, 黄炯烈, 陈观今, 吴瑜, 于洪枫[2]2003年在《登革病毒在白纹伊蚊细胞内免疫的研究》文中提出目的 研究白纹伊蚊对登革病毒产生细胞内免疫现象的分子机制。方法 扩增与克隆登革病毒NGC株的前膜蛋白基因prM ,将prM基因以 3种不同表达形式重组入昆虫表达载体pBh spEGFP ,以 3种重组质粒分别转染白纹伊蚊C6 36细胞 ,测定转染后的细胞对登革病毒感染的免疫效果。结果 构建了包含prM基因的 3种昆虫表达载体 ,Westernblot和荧光显微镜观察证明在C6 36细胞中成功表达了prM EGFP融合蛋白。MTT实验和空斑形成实验反映了C6 36细胞对登革病毒产生了细胞内免疫。结论 3种重组质粒均可诱导细胞内免疫现象 ,说明无论是否表达prM蛋白 ,只要有prM基因转录就可引起细胞内免疫现象 ;prM基因正义和反义转录形式均可诱导细胞内免疫 ;其形成机制可能是通过RNA干扰作用而产生。
参考文献：
[1]. 白纹伊蚊对登革病毒细胞内免疫的研究[D]. 葛春喜. 中山大学. 2002
[2]. 登革病毒在白纹伊蚊细胞内免疫的研究[J]. 葛春喜, 黄炯烈, 陈观今, 吴瑜, 于洪枫. 中华微生物学和免疫学杂志. 2003