1.广西中医药大学基础医学院 南宁 530200；2.广西中医药大学瑶医药学院 南宁 530001
摘要：目的：探讨酸枣仁汤对失眠模型大鼠神经递质释放及改善失眠机制研究。方法：小平台水环境法剥夺大鼠睡眠复制失眠动物模型，以右佐匹克隆为对照，将100只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和治疗组，造模结束后观察并检测各组大鼠的全身变化及神经递质含量变化情况。结果：空白组大鼠精神状态良好，活动灵活，反应敏捷，毛发有光泽，体重增加明显。模型组大鼠各项均减弱，治疗组及西药组大鼠精神状态、活动及反应情况不如空白组大鼠，体重增长较空白组慢。与空白组比较，模型组大鼠体重增加量、总睡眠时间、5-HT、IL-6、TNF-α明显降低（P<0.05）；与模型组比较，治疗组及西药组大鼠体重增加量、总睡眠时间、5-HT、IL-6、TNF-α含量升高明显（P<0.05）；治疗组及西药组间比较无统计学意义。结论：酸枣仁汤可较好改善失眠模型大鼠的全身症状和睡眠时间，有效控制大鼠体重减轻，其机制可能与其可调控神经递质水平有关。
关键词：失眠模型；酸枣仁汤；神经递质
Effects of Suanzaoren Decoction on changes of 5-HT、IL-6、TNF-αin Insomnia Model Rats
Zhang qi1，Zhang man2，Wu li1*，Zang zhiming1
（1.School of Basic Medical Sciences，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning，530200，China；
2.Faculty of Yao Medicine，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning，530001，China）
AbstractObjective To explore the hypnogenetic mechanism underlying regulation of neurotransmitter in insomnia model rats by suanzaoren decoction. Methods We established insomnia-stricken rat models using the Small Platform with Water Environment method. We divided 100 rats randomly into 4 groups，i.e. the blank group，model group，western medicine（dexzopiclone）group and treatment（suanzaoren decoction）group，and the changes in the whole body，and the content of neurotransmitter were observed. Results Rats in blank group were good in mental state，active，responsive，lustrous-hair，and their body weight increased significantly. Rats in model group were poor in all respects. As compared with rats in the blank group，rats in treatment group and western medicine group had poorer mental state，activity and responsiveness and their body weight increased more slowly；rats in the model group were significantly decreased in terms of weight gain，total sleep time，the content of 5-HT，IL-6 and TNF-α（P<0.05）. Rats in treatment group and western medicine group were markedly increased in terms of weight gain，total sleep time，the content of 5-HT，IL-6 and TNF-αto the those in Model Group（P<0.05）. No statistically differences were found between thetreatment group and western medicine group. Conclusion The Suanzaoren decoction is helpful in improving general symptom and sleep of insomnia-stricken rats and effective in controlling their body weight loss，which may be attributable to the neurotransmitter level regulation.
KeywordsInsomnia model；Suanzaoren decoction；neurotransmitter
随着我国社会不断发展，竞争日趋激烈，各种应激纷至沓来，失眠症发病率呈现逐年升高的趋势，且发病人群涉及各个年龄段[1]，已成为影响我国民众身心健康的主要疾患之一，因此，探求治疗失眠症的有效治疗方法与措施已成为现今研究的重点。酸枣仁汤治疗失眠症效果甚佳，其机制研究层出不穷，众所纷纭却尚未明确。本研究以小平台水环境法剥夺大鼠睡眠复制失眠动物模型，以右佐匹克隆为对照，探讨酸枣仁汤对失眠模型大鼠神经递质释放的影响，以期进一步明确其作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 100只健康成年SPF级SD大鼠，体重（180±20）g，雄性，由广西医科大学动物中心提供，生产许可证 SCXK（桂）20090002。
1.2 药物与试剂 酸枣仁汤：酸枣仁15g、茯苓6g、知母6g、川芎6g、甘草3g，由广西中医药大学第一附属医院制剂室煎制；右佐匹克隆，成都康弘药业，批号：国药准字H20100074。
1.3 实验方法
1.3.1 实验分组将100只大鼠适应性喂养1周后随机分为四组，即空白对照组（简称空白组）、失眠模型对照组（简称模型组）、右佐匹克隆组（简称西药组）及酸枣仁汤组（简称治疗组），每组各25只，采用小平台水环境法剥夺大鼠睡眠复制失眠动物模型[2]，而后进行相应的标本采集。
1.3.2 给药处理模型组与空白组均予以20ml/kg体积的蒸饱水灌胃，右佐匹克隆按照0.100mg/kg标准灌服，治疗组按照10 ml/kg体积灌胃，每日早8：00开始灌胃。
1.3.3 观察指标
全身情况观察：观察各组大鼠自由活动、体重、睡眠时间以及一般情况；
神经递质含量变化：采用免疫组化法检测各组大鼠血清中5-HT、IL-6、TNF-α含量。
1.3.4 统计学 应用SPSS21.0软件进行统计分析，所得计量资料均采用均数和标准差（ ）表示。多组间均数的比较采用one-way ANOVA；两组间的比较采用Student'sttest，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1各组大鼠一般状态的观察
空白组大鼠精神状态良好，活动机灵，反应敏捷，毛发有光泽，体重明显增加；模型组大鼠精神亢奋，毛硬粗糙、毛竖起无光泽，易激惹，饮食量明显减少、饮水明显增多，消瘦；治疗组及西药组大鼠精神状态、活动及反应情况不如空白组大鼠，体重增长较空白组慢。
2.2各组大鼠体重及睡眠时间比较
如表1所示，与空白组相比，模型组大鼠体重增加量、总睡眠时间明显降低，睡眠潜伏期延长（P<0.05）。与模型组相比，治疗组及西药组大鼠体重增加量、总睡眠时间升高明显，睡眠潜伏期缩短（P<0.05）；治疗组及西药组比较没有统计学意义。
表1 各组大鼠体重及睡眠时间比较（ ，n=25）
注：▲表示与空白组比较，P<0.05；△表示与模型组比较，P<0.05
3讨论
据相关统计学数据显示：我国人群中约有95%出现一过性失眠，而罹患失眠症的人群约4.4%～11.7%，且发病呈现逐年增加的趋势[1]，目前临床对其治疗多采用镇静安眠类西药，但此类药物疗效不确切，且副作用较为明显，容易导致患者出现成瘾性，戒断反应较为显著[3]，给患者的生活与工作带来较大程度的影响，因此，探索其有效的防治措施或是解决途径之一。
中医将失眠归因为邪热扰心、心失所养、阴血不足所致[4]，本研究所选酸枣仁汤，具有养血补肝、宁心安神等功效[5]。研究显示[6-8]，酸枣仁汤改善失眠症状具有极佳的效果，但其机制研究层出不穷，众所纷纭却尚未明确。本研究不同于郭杰[7]、林腊梅[8]等学者检测Glu、GABA及IL-1β等主要神经递质，通过建立大鼠失眠模型，观察并检测各组大鼠精神状态，神经递质5-HT、IL-6及TNF-α含量变化情况并加以酸枣仁汤予以干预，结果发现与空白组相比，模型组大鼠精神状态，活动、反应能力，毛发光泽及体重均减弱且总睡眠时间、5-HT、IL-6、TNF-α明显降低，而治疗组及西药组大鼠以上指标情况虽不如空白组，但明显高于模型组（P<0.05）；且治疗组及西药组间比较无统计学意义。
5-HT 是较为公认的参与睡眠—觉醒机制的经典神经递质，被誉为脑内的“致眠因子”[9]，对睡眠的发生和维持起着重要作用，其机制可能与觉醒期间5-HT释放增加，促使某些脑区合成睡眠因子，以定时的瀑布式方式作用于睡眠的执行机构，引发NREM睡眠有关[10]。TNF-α 是激活的单核巨噬细胞及脂肪细胞分泌的一种细胞因子，与其他细胞因子在不同组织中直接或间接地影响着体内葡萄糖代谢[11]，而IL-6除了通过旁分泌发挥局部作用外，还通过血液循环而发挥作用，从而可较好的控制炎症反应，发挥增强食欲，控制体重降低的作用[12]。
综上所述，酸枣仁汤可较好改善失眠模型大鼠的全身症状和睡眠时间，有效控制大鼠体重减轻，推测其改善失眠模型症状的作用机制可能与调控并改善体内能量代谢、控制炎症反应等神经递质的释放有关，但具体机制仍需进一步深入研究。
参考文献：
[1] 贾玉，贾跃进，郑晓琳. 中医对失眠认识的探讨及展望[J]. 中华中医药杂志，2015，（01）：163-166.
[2] 游秋云，王平，田代志.等.老年肝郁失眠证候大鼠模型的建立和评价[J].中国实验方剂杂志，2013，19（2）：222-225.
[3] 桑穆惠，顾锡镇. 中医治疗失眠的研究现状[J]. 四川中医，2012，（07）：149-151.
[4] 周立美. 基于中医思维科学方法的失眠症的理论和临床研究[D].中国中医科学院，2013.
[5] 张晓双，孙建宁，白黎明. 酸枣仁汤对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响及机制研究[J]. 中药药理与临床，2014，（04）：8-11.
[6] 张林挺. 酸枣仁汤对虚劳失眠大鼠干预机理的研究[D].广州中医药大学，2009.
[7] 郭杰，尹晓刚. 酸枣仁汤对老年失眠模型大鼠学习记忆能力及脑内神经递质含量的影响[J]. 中国药房，2016，（22）：3085-3087.
[8] 林腊梅. 酸枣仁汤对肝血虚失眠模型大鼠神经递质的影响[D].湖北中医药大学，2014.
[9] 封倩，冯来会，杨新年.加味酸枣仁汤对慢性应激抑郁模型大鼠脑组织单胺类神经递质NE、DA及5- HT影响的实验研究[J].中医学报，2012，27（5）：581-582.
[10] 北京医学院基础部针麻原理研究组生理组．中枢神经递质概论[M]．北京：北京科学出版社，1997：132．
[11] 田旭升，胡妮娜，宋琳等.酸枣仁汤对抑郁症模型大鼠海马TNF-α、IL-1β及c-fos表达的影响实验研究[J].中医药学报，2013，41（2）：44-46.
[12] 荣霏，温晓飒，马文领. 慢性睡眠剥夺对大鼠学习记忆功能及海马、下丘脑多巴胺含量和D1受体表达的影响[J].第二军医大学学报，2012，33（9）：959-964.
注：项目资助：广西中医药民族医药传承创新课题（GZLC16-24）；广西中医药民族医药自筹经费科研课题，GZZC15-14；2016年度广西壮族自治区中青年教师基础能力提升项目（KY2016YB214）*通讯作者：武丽，197304，博士，副教授，情志病症的中医药防治研究
论文作者:张齐1,张曼2,武丽1*（通讯作者）,臧知明1
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第5期
论文发表时间:2017/6/25
标签：大鼠论文; 模型论文; 酸枣仁论文; 空白论文; 西药论文; 体重论文; 神经论文; 《中国误诊学杂志》2017年第5期论文;