朱晓丽
浙江兴达安全科技有限公司 311200
摘要：目的：对自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的应用效果进行探究。方法：选择酒店室内和室外以及万级实验室作为研究对象，分别使用自然沉降法与撞击法来获得三个环境中空气细菌总数情况，对测定结果进行对比分析。结果：空气细菌总数的自然沉降发和撞击法测定结果存在正的线性相关关系，在测定灵敏度上，撞击法优于自然沉降法（P＜0.05），差异有统计学意义。结论：撞击法具有较高的灵敏度，能够较为准确的反映空气中细菌含量情况，但当采样时间较长时，其准确度会下降。
关键词：自然沉降法；撞击法；空气细菌总数；应用效果比较
随着人们保护意识的不断增强，对空气环境的质量提出了更高的要求，细菌等空气微生物的危害得到人们的充分重视，加强空气细菌的检测，对于提高控制质量水平十分重要[1]。本文就对分别选择了酒店室内和室外以及公司无菌实验室空气环境为研究对象，探讨自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的效果，以提高空气细菌检测工作水平，现报道如下：
1材料和方法
1.1实验材料仪器准备，空气微生物采样器，型号TYK-6型；营养琼脂培养基，批号20131125-00；培养皿，直径9cm。
1.2空气环境采样对象：某酒店室内和室外以及公司万级实验室。
1.3空气细菌总数测定方法
1.3.1自然沉降法测定
1.3.1.1根据现场大小，选择3~5个采样点（室内面积不足50m2，设置3个采样点；50m2以上的设置5个采样点；采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。
）采样高度为1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m，避开通风口、通风道等。
1.3.1.2将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，分别自然暴露在空气中，时间为5min和10min，盖上皿盖，采样完成。
1.3.1.3将平板倒置放入35℃~37℃恒温培养箱中，培养48h后取出，进行菌落计数[4]。
1.3.2撞击法采样测定
1.3.2.1根据现场大小，选择采样点（室内面积不足50m2，设置1个采样点；50m2~200m2的设置2个采样点，200m2以上的设置3~5个采样点；采样点按均匀布点原则布置，室内1个采样点的设置在中央，2个采样点的设置在室内对称点上，3个采样点设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。）采样高度为1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m，避开通风口、通风道等。
1.3.2.2使用TYK-6型空气微生物采样器，分别采集5min、10min空气细菌样本，采样器参数设定为28.3L/min，并将采样后的平皿倒置于37℃恒温箱中培养48h小时[4]。
1.3.3空气采样质量控制，为确保采样结果的准确性与可比性，需要对采样质量采取必要的控制措施，具体包括以下几方面：
1.3.3.1保证采样条件的一致，两种检测方法必须保证室内面积的一致、采样高度的一致以及采样点位置的一致，才能保证采样样品的可靠性。
1.3.3.2测量玻璃平皿的面积，随机抽取本试验中所使用的玻璃平皿，对其内直径进行测量，并计算平皿的平均面积和实际面积。
1.3.3.3校正自然沉降法测定数据，自然沉降法测定的细菌总数，对其误差进行校正时，要以玻璃器皿平均面积与标准面积的比例作为基础。
1.3.3.4消除检测仪器的误差干扰 在使用撞击法采样时，要保证不同采样点空气微生物采样器所处高度、所在平面的相同，并对采样时间进行控制。
1.4空气细菌总数计算，空气细菌总数测定值表示单位是cfu/?，也就是每立方米内菌落数量多少。
1.4.1自然沉降法细菌总数计算方法，空气菌落总数=所有平皿菌落数量×5000/（平皿面积×平皿暴露时间）。
1.4.2撞击法细菌总数计算方法，空气菌落总数=所有平皿菌落数量×1000/（微生物采样器速率×采样时间）。
1.5统计学处理 使用统计学软件SPSS18.0对本组研究数据进行分析和处理，P＜0.05表示差异显著，有统计学意义。
2结果
2.1两种检测方法的相关性比较
在本组研究中，以5min为标准，自然沉降法和撞击法测定的空气细菌总数之间，存在着明显的线性正相关关系（r=0.683，P＜0.05）。
2.2两种检测方法的测定效果比较
在本组研究当中，在取样5min钟时，统计所有样品数据，分别得到三处检测地点的空气细菌总数测定平均值，比较可知，撞击法比自然沉降法的测定结果更为灵敏（P＜0.05），具有统计学意义，详细结果见表1。
表1：采样5min两种检测方法测定结果平均值比较（cfu/?）
3讨论
3.1空气中细菌总数测定监测目标 有关研究表明，空气中细菌等微生物的危险程度，会与带菌颗粒物的大小成反向相关的关系，也就是说，带菌颗粒越小，其危害程度越大[2]。通常而言，当带菌颗粒直径在50?m以上时，基本不会被吸入人体之内；当带菌颗粒直径在10?m-50?m之间时，虽然会被人体吸入，但会呼吸道所阻挡；当带菌颗粒直径小于10um，大于5?m时，其会被停留在气管和支气管中；只有直径＜5?m的带菌颗粒，才会随空气深入到人体的肺部器官，引起相应的呼吸系统疾病，危害人体的身体健康。因此，在测定空气中细菌总数时，主要监测的是空气中直径在5?m以下的带菌颗粒。
3.2自然沉降法和撞击法灵敏度比较 （1）两种检测方法的工作原理：自然沉降法的采样原理是：在地心引力作用下，空气中悬浮的带菌颗粒会随时间延长逐渐沉降，降落在自然沉降法采样使用的平皿琼脂培养基表面上。撞击法的采样原理为：采用撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37℃、48h培养后，计算出每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。[5]（2）根据两种检测方法的工作原理可知，自然沉降法会受空气流动、采集时间等各种因素影响，而撞击法受空气变化影响较小，相对而言，撞击法采样的灵敏度更高，也是当前空气采样的首选方法。
在本组研究当中，三种环境下空气细菌总数测定的平均值，撞击法都远远高于自然沉降法，进一步证明了撞击法灵敏性优于自然沉降法。
3.3自然沉降法与撞击法的误差分析
3.3.1自然沉降法的误差自然沉降法测定结果误差的主要影响因素是平皿的表面积。根据相关规定要求，空气细菌采集当中使用的平皿，其直径误差需要在2mm以内，按照《室内空气质量标准》（GB/T18883-2002）的规定，平皿的标准直径为9cm，当平皿直径误差超出规定时，由于平皿表面积的变化，其检验结果会发生一定程度的增大或减小，导致误差产生，影响最终测定计算的结果[3]。
3.3.2撞击法的误差（1）在撞击法检测当中，其误差与平皿直径基本无关，当时如果平皿直径过小，比如直径小于空气微生物采样器喷嘴的7cm直径，就可能有部分气流不再平皿范围内，给测定结果造成干扰。（2）撞击法的误差主要与测定时间有关，在本组研究当中，当采样时间超过10min时，受喷嘴气流影响，平皿的琼脂表面出现了凹陷，即使后续空气全部与平皿表面撞击，也无法证明空气中的带菌微粒全部被琼脂所吸附，其测定结果也就存在着不确定性，无法作为实验结果使用。同时，根据相关研究表明，当撞击法采样的时间超过一定值时，采样的空气体积会变大，导致平面琼脂表面的湿润状态受到影响，对细菌的黏附效果降低，干扰最终的集菌效果，使测定的结果出现误差。
综上所述，在空气细菌总数的测定当中，撞击法比自然沉降法具有更高的灵敏性，不会受空气环境变化的干扰。但在使用撞击法测定空气细菌总数的过程中，要合理的控制采样时间，保证测定结果的准确性。
参考文献：
[1]王亚霞，魏兰芬，潘协商，刘亚新，过相钗，李霞，张琼.撞击法与沉降法采样对洁净手术室空气细菌总数检测结果比较[J].中国消毒学杂志，2014，03：291-292.
[2]阎传海，葛嘉妮，尹群.撞击法测定空气中落菌数的不确定度评估[J].广东化工，2012，13：135-136.
[3]靳桂明，张帆，董玉梅，周凤玲.应用撞击法与沉降法对空气监测效果的比较[J].中华医院感染学杂志，2010，21：3273-3275.
[4]GB/T18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物，2014.12.01
[5]GB/T18883-2002 室内空气质量标准 附录B 室内空气中细菌总数检验方法
论文作者:朱晓丽
论文发表刊物:《基层建设》2015年16期供稿
论文发表时间:2015/12/18
标签：空气论文; 细菌论文; 自然论文; 总数论文; 直径论文; 误差论文; 琼脂论文; 《基层建设》2015年16期供稿论文;