河北省保定市第一中心医院东院妇科 071000
【摘 要】目的：探讨转化生长因子、血管生成因子、基质金属蛋白酶-7与子宫内膜异位症的关联性的研究。方法：采用流式细胞检测技术对子宫内膜异位症患者的在位内膜和异位内膜的VEGF、TGF-β、MMP-7蛋白表达在子宫内膜异位症的发生和发展中的作用。结果：子宫内膜异位症患者在位内膜组织TGF-β、VEGF、MMP-7蛋白表达量与异位内膜组织蛋白表达量比较具有统计学差异p≤0.01结论：子宫内膜异位症患者异位内膜VEGF、TGF-β、MMP-7蛋白表达高于在位内膜，表明VEGF、TGF-β、MMP-7的异常表达可能与子宫内膜异位症有关联性。
【关键词】TGF-β；VEGF；MMP-7；子宫内膜异位症
子宫内膜异位症（EM）发病的关键是异位内膜的转移、种植、生长等有似肿瘤的生物学的行为[1]。逆流于盆腹腔的子宫内膜细胞导致发病其过程示通过黏附、侵袭和血管形成这样的“三部曲”完成。多种细胞因子都起到重要作用，本研究旨在探讨转化生长因子、血管生成因子、基质金属蛋白酶-7与子宫内膜异位症的关联性的研究。
1 资料与方法
1.1 研究对象
选取40例2009年12月-2011年6月在保定市第一中心医院妇科行腹腔镜及开腹手术行卵巢巧囊剥除的患者，其中20例同时行全子宫切除，术后标本均经病理学证实为卵巢巧克肿及正常子宫内膜。子宫内膜异位症的临床分期采用1985年美国生育协会修正后内异症分期评分法（r-AFS）进行，所有患者均为III–IV期。患者年龄25-55岁，平均年龄35.4±10.2岁。3个月内未服用过激素类药物。
1.2 实验设备：Epics-XL型流式细胞仪，美国Beckman-Coulter公司离心机。
1.3主要试剂
（1）小鼠抗人单克隆抗体MMP-7（2）兔抗人血管内皮生长因子单克隆抗体VEGF（3）兔抗人单克隆抗体TGF-β均购于美国NeoMarkers公司（4）FITC-IgG购于美国Santa Cruz公司
1.4 实验方法
1.4.1单细胞悬液样品的制备：将70%酒精固定的子宫内膜标本置于120目不锈钢网上，经300目尼龙网滤除细胞团块，收集滤下的细胞悬液。离心沉淀2分钟，弃去上清液。加入1ml PBS将细胞悬浮计数并调整细胞浓度为1×106/ml时，此悬液为单分散细胞悬液。
1.4.2细胞的免疫荧光标记：制备待检样本单细胞悬液，取1×106/ml个细胞加入流式试管中。分别加入1：50稀释的MMP-7（克隆号：1D2）、VEGF（克隆号：SP28）和TGF-β（克隆号：SC-146）轻轻混匀，室温避光反应1分钟，再加入二抗，轻轻混匀，室温避光反应15-20分钟，用300目尼龙网过滤细胞，2小时内上机检测。在对免疫荧光标记物测定时，设一抗或二抗的本底对照和阴性对照。
1.4.3流式细胞仪检测条件：采用美国Beckman-Coulter公司生产的Epics-XL型流式细胞仪，利用特殊核酸荧光染料（PI、EB、DAPI等）标记DNA，通过流式细胞仪检测激发的荧光。荧光强度与DNA的含量成量效关系，即DNA含量多少与荧光染料结合量成正比。
1.4.4分析方法：MMP-7、VEGF、TGF-β基因蛋白表达定量分析：按照荧光指数（FI）表示以上蛋白的相对含量，公式为：FI=
FI值≥1.0为阳性表达；FI≤1.0为阴性表达。
1.5数据处理：应用SPSS16软件进行统计分析。采用t检验方法。以P≤0.05作为差异有显著性。以P≤0.01作为差异有极显著性。
2 结 果
2.1 EM患者在位子宫内膜和异位组织TGF-β表达情况：子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜组织TGF-β蛋白表达值为1.01±0.30，异位组织TGF-β蛋白表达值为1.29±0.24，两组比较有意义（P=0.005），见表1。
3 讨 论.
子宫内膜异位症虽属良性疾病，但其浸润及复发等临床表现与恶性肿瘤的生物学行为相似，且有1%的内异症会发生恶变。目前比较同一的意见是用多因子的发病理论来解释其发病机制。
3.1 TGF-β在EM中的表达及意义：本研究采用流式细胞检测的方法检测EM患者在位与异位的子宫内膜上皮细胞的TGF-β的表达，结果显示，TGF-β在两组中表达量明显不同。EM患者异位内膜TGF-β的表达显著高于在位内膜。提示TGF-β在EM的发生发展中可能起到重要的作用。
3.2 VEGF在EM中的表达及意义：本研究发现异位症异位内膜中VEGF高表达，与在位内膜中的表达有显著差异。血管内皮生长因子属于PDGE家族，主要有垂体中滤泡星形细胞产生，能诱导血管生成[2]。本研究也显示VEGF在异位内膜中的表达增高，与VEGF诱导血管形成，从而促进子宫内膜异位症的发展有关。
3.3 MMP-7在EM中的表达及意义：关于MMP-7基因与子宫内膜异位症疾患关系的研究报道还很少。我们的实验结果显示MMP-7在子宫内膜异位症患者的在位内膜和异位内膜组织中表达有差异。表明MMP-7含量在EMs的组织发生中可能起到一定的作用。MMP-7在子宫内膜异位症的发生、浸润和转移等方面起一定的作用，VEGF作为在血管形成中具有关键作用及TGF-β在子宫内膜异位的过程中发挥重要作用。通过本实验的研究能够从VEGF、TGF-β、MMP-7这三个因子为突破口，进行关于子宫内膜异位症细胞因子的靶向治疗，为广大内膜异位症患者找到新的治疗方案。
4 结 论
采用流式细胞检测方法分析了子宫内膜异位症患者在位内膜和异位组织的VEGF、TGF-β、MMP-7表达，结果表明，子宫内膜异位症患者异位内膜VEGF、TGF-β、MMP-7蛋白表达高于在位内膜，表明VEGF、TGF-β、MMP-7的异常表达可能与子宫内膜异位症发展有关。
参考文献：
[1]仝佳丽，郎景和.子宫内膜异位症的在位内膜病变研究进展[J].现代妇产科进展，2010，19（6）：465-467.
[2]杨剑，陈景伟，赵静，等.子宫内膜异位症患者腹腔液中血管内皮生长因子，卵巢癌抗原水平的变化及临床意义[J].解放军医药杂志，2012，24（4）：14-17.
论文作者:董静,李亚,张涛,崔娜,张娜
论文发表刊物:《航空军医》2015年15期供稿
论文发表时间:2015/12/9
标签：内膜论文; 子宫论文; 异位症论文; 细胞论文; 患者论文; 异位论文; 子宫内膜论文; 《航空军医》2015年15期供稿论文;