罗欣 曹柳 刘龙 李广意
（湖南省长沙医学院；湖南长沙410000）
摘要 用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注模型后，随即机分为3组，即假手术正常组、缺血再灌注组、银杏叶提取物组。用TTC和FJB染色来检测脑梗死体积和神经元凋亡情况。7d后，与缺血再灌注组小鼠相比，可观察到银杏叶提取物组的小鼠的脑梗死体积减少，且神经行为学评分有一定的改善。
关键词：缺血再灌注；银杏叶提取物；细胞凋亡；
缺血再灌注损伤即恢复缺血的组织或细胞的血流后，造成更严重的损伤。在缺血再灌注损伤过程中，细胞凋亡参与其中[1]。有研究表明，银杏叶提取物可以抑制细胞凋亡[2]，降低脑缺血再灌注造成的脑损伤[3].
材料与方法
1.实验材料和方法
1.1药品与试剂
健康昆明小鼠由湖南期莱克景达实验动物有限公司提供，Fluoro-Jade B染液，TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）染液购自南京建成科技有限公司，银杏叶提取物购自Dr. Willmar Schwabe GmbH & Co.KG
1.2 实验动物分组及给药方法
分组：健康昆明小鼠60只，体质量为（28±5）g,雄性，随机分为3组。即正常组、模型对照组、银杏叶提取物组(5ml/kg)。进行神经行为学评分后分两部分：10只进行脑梗死体积的测定；10只进行FJB染色。
给药：造模2h后灌胃，灌胃量均为5ml/kg,2次/d，连续7d。模型对照组给予等体积生理盐水。
1.3动物模型制备过程
（1）制备鱼线：全长2cm的鱼线,在距一端0.7cm处做一标记（黑色），置于肝素盐水，备用。
（2）制备动物模型：在室温下，采用三溴乙醇和阿托品对小鼠进行腹腔麻醉。用镊子剥离右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）。假手术正常组完成。用弹性橡皮于CCA和 ECA主干的近心端阻断血流。在ECA近ECA处用银针扎一小口，插入备用鱼线,至轻微阻力时停止，用手术线扎紧，固定鱼线。脑缺血模型完成。鱼线插入深度约0.7cm。缺血处理1h，拔出鱼线，使血流恢复，完成缺血再灌注。术毕缝合颈部皮肤。
1.4造模成功指标
待小鼠麻醉清醒后，按五分制评分标准进行分级评分。1-3分者，造模成功，留用。0分或4分者，造模不成功，弃去，再另外进行补充。
1.5测定脑梗死率
7天后,处死动物，断头取脑，去除嗅球。先放入生理盐水中，后置入2%TTC溶液中，37度避光温浴30min。
1.6测定神经细胞凋亡情况
进行FJB染色，观察细胞凋亡情况。
2.结果
2.1 造模结果
神经功能缺损评分为1-3分的小鼠纳入统计分析。经TTC染色，发现呈苍白色为缺血部位，呈红色为正常部位。（图1）
2.3 FJB染色测定细胞凋亡
荧光显微镜下发出特异性绿色荧光即凋亡细胞。与模型组相比，术后灌胃银杏叶提取物组在海马区细胞凋亡数明显减少。（图2）
缺血性脑血管病具有较高的致残率和致死率，且发病率随着老龄化人口的增加呈上升趋势，这对患者产生严重的生存威胁[4]，故及时医治尤为重要。实验结果发现银杏叶提取物能减小小鼠的神经细胞梗死体积和细胞凋亡数，表明银杏叶提取物可能对海马神经元有保护作用，为临床用药提供理论依据。
1 张雯,宋俊科,杜寇华.缺血再灌注损伤与细胞凋亡信号转导通路.中国医学杂志,2015,50(7):565-569.
2刘鑫雨,郑咏秋.刘建勋.银杏叶有效成分抗脑缺血再灌注损伤作用的机制研究进展.世界中医药,2013,8(10):1142-1146.
3王淑梅.银杏二萜研究进展.河北医药,2015,37(9):1401-1404.
4赵海.中西医结合治疗缺血性脑血管病疗效分析[J].中医药信息,2011,12(5):12-13.
论文作者:罗欣,曹柳,刘龙,李广意
论文发表刊物:《医师在线》2016年2月第4期
论文发表时间:2016/6/12
标签：小鼠论文; 凋亡论文; 细胞论文; 银杏叶提取物论文; 模型论文; 损伤论文; 体积论文; 《医师在线》2016年2月第4期论文;