中山大学附属第三医院 510630
[摘要]目的：通过使用反相HPLC法测定注射用氨苄西林钠的含量，为临床用药提供参考。方法：采用反相HPLC法以pH=4.5的醋酸盐为本次研究的缓冲液:以乙睛(80:20)为本次研究的流动相,检测波长则为254nm,用外标法测定含量。结果：氨苄西林钠在20-160μg/ml范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为99.89%。结论：采用此方法可以简单有效的测定注射用氨苄西林钠的含量，值得推广使用。
[关键词]反相色谱；测定；注射；氨苄西林钠；含量
注射用氨苄西林钠，主要成份为氨苄西林钠[1]。临床上适用于敏感菌所致的呼吸道感染、胃肠道感染、尿路感染、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎、败血症等疾病的治疗[2]。本次研究主要是通过使用反相HPLC法测定注射用氨苄西林钠的含量，为临床用药提供参考。方法如下所示。
1仪器与试剂
仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪、Agilent 色谱工作站、Agilent 1100可变波长检测器、C18反相色谱柱（4.6mm X 250mm,5μm )。氨苄西林三水合物对照品(中国药品制品检定所提供);注射用氨苄西林钠(山东鲁抗制药有限公司，20150911);6-氨基青霉烷酸（齐鲁制药有限公司，20150922);乙睛为色谱纯;其它试剂均为分析纯;水为去离子超纯水。
2试验方法
采用反相HPLC法以pH=4.5的醋酸盐为本次研究的缓冲液:以乙睛(80:20)为本次研究的流动相,检测波长则为254nm,用外标法测定含量。
3样品处理
3.1标准曲线的测定
精密称取氨苄西林是水合物对照品适量,用流动相配成2.0mg/ml的溶液.精密吸取此溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml ,分别置10ml容量瓶中.加流动相至刻度。分别取10微升注人Agilent 1100高效液相色谱仪中.以浓度(x)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,得到回归的直线方程。
3.2供试品溶液的制备
精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入流动相50mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量摇匀滤过取续滤液即得。
3.3精密度试验
精密吸取同一对照品溶液20μl，连续进样5次，分别测得峰面积结果，经过计算得到峰面积平均值为2791，RSD=0.5%。
3.4稳定性试验
精密吸取上述供试品溶液20μl，于2h、4h、6h、8h、10h后测定峰面积，结果峰面积几乎不变，表明供试品溶液至少在10h内稳定。
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3.5加样回收率试验
取已测知含量的样品(批号:20140201，含量为88.98%。)适量研细，分别取约1g，共6份，精密称定，分别精密加入对照品溶液(浓度为:0. 3957mg/mL) 5mI及甲醇45mI测定含量。
3.6重复性试验
精密量取同一样品5份，照上述操作，测得含量平均值为88.88%。 RSD为0.60%。n=5表明本法重复性好。
3.7样品的含量测定
精取药厂生产的5批样品适量,分别用流动相配成1.0mg/ml的溶液。另取氨苄西林三水合物对照品适量,用流动相配成1.0mg/ml的溶液。分别取10微升进行色谱分析,用外标法计算百分含量。
4测定结果
依照上述含量测定方法，测定注射用氨苄西林钠的含量，结果5批样品的含量分别为88.78%、88.98%、87.98%、89.08%、88.08%。分别放置2,4,8h后重复测定,其平均含量为88.65%,RSD为0.8%。说明氨苄西林在酸性流动相中稳定性良好。
5讨论
反相液相色谱柱效高、分离能力强、保留机理清楚，是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种，对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析，反相液相色谱正受到越来越多的关注[3].反相色谱法是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种液相色谱分离模式[4].反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离.在生物大分子分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液[5]，添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相.普通的反相色谱固定相和孔径大于300的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍，聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用[6].
本次研究主要是通过使用反相HPLC法测定注射用氨苄西林钠的含量，为临床用药提供参考。结果发现：氨苄西林钠在20-160μg/ml范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为99.89%。由此可见，采用此方法可以简单有效的测定注射用氨苄西林钠的含量，值得推广使用。
参考文献
[1]胡毅坚,吴春芬.高效液相色谱法测定复方地塞米松霜中2组分的含量[J].中
国药房，2006(20).
[2]张利斌,张晓庆,刘明忠.注射用氨节西林钠/氯哇西林钠与不同溶媒配伍稳定
性的研究[J]药学实践杂志, 2006(02).
[3]熊百莉,杨玉琴.注射用氯哇西林钠与利巴韦林注射液配伍的稳定性[J].中国
医院药学杂志，2009(11).
[4]苏蕊,刘磊.氨节西林钠氯哇西林钠含晕测定法研究[J].黑龙江科技信息，2010(09).
[5]刘浩,杨美成.HPLC法同时测定注射用氨节西林钠/氯哇西林钠的含量[J].中国抗生素杂志, 2006(01).
[6]谭泽慧,刘尧.注射用氨节西林钠/氯哇西林钠的含量测定[J].黑龙江医药，
2009(04).
论文作者:黄增键,廖小倩
论文发表刊物:《医师在线》2016年4月第7期
论文发表时间:2016/7/11
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