【摘 要】目的：探讨 HLA-DRB1 等位基因与乳腺癌遗传易感性及临床特征的相关性，为寻找乳腺癌的遗传易感基因、解释其临床特征的差异提供线索。方法：选取新疆医科大学附属肿瘤医院198例乳腺癌患者（维吾尔族98例、汉族100例）为病例组，23 0例体检健康者（维吾尔族、汉族各115例）为对照组，并收集其临床资料。结果：HLA-DRB1 *01 和 HLA-DRB1*16 在两组间的分布频率存在差异；分层分析：维吾尔族病例组中 HLA-DRB1*01基因频率较高，汉族病例组中HLA-DRB1*15 和 HLA-DRB1*16 基因频率均较低。亚型分析：维吾尔族中，HLA-DRB1*01：02的基因频率在病例组高于对照组；汉族中，HLA-DRB1*15：01和 HLA-DRB1*16：02的基因频率在病例组均低于对照组。乳腺癌遗传易感性有关的HLA-DRB1 等位基因与患者年龄、病理分期、免疫组化、分子分型及危 险组分级等因素无相关性（P＞0.05）。结论：HLA-DRB1*01：02 是维吾尔族乳腺癌的“易感”基因型，HLA-DRB1*15：01和 HLA-DRB1*16：02 是汉族乳腺癌的“保护” 基因型。乳腺癌遗传易感性有关的 HLA-DRB1等位基因型与其临床特征无关。
【关键词】HLA-DRB1等位基因；乳腺癌；遗传；易感性；临床特征
从乳腺癌不同分子分型的角度，分析HLA-DRB1基因的分布频率特点尚未见报道。故这项研究采用聚合酶链反应-序列特异性引物（polymerase chain reactio n-sequence specific primers，PCR-SSP）和毛细管电泳测序（capillary electrophoresis se quencing，CE）技术对不同民族之间 HLA-DRB1等位基因进行分型，并分析乳腺癌临床特征与HLA-DRB1 基因的相关性，旨在探寻新疆地区乳腺癌遗传易感预警信号，分析两民族乳腺癌遗传背景的差异所在，为明确 HLA-DRB1基因多态性在乳腺癌发生，乃至预后中的作用及其可能的作用机制提供参考依据[1]。
1 一般资料与方法
1.1研究对象
纳入2016年01月01日至 2017年07月31日新疆医科大学附属肿瘤医院收治的、病理组织学确诊的乳腺癌患者198例（维吾尔族98例，汉族100例），无血缘关系的体检健康者230例（维吾尔族115例，汉族115例）。
1.2 实验流程
1.2.1 血液采集
研究对象均从肘静脉抽取3mL的血液，经乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，后置于－80℃冰箱，用于DNA提取和HLA-DRB1等位基因的分型。
1.2.2DNA提取
用DNA提取试剂盒（TIANamp Genomic DNAKit，北京天根生物技术有限公司），从冻存（－80℃）的全血中提取DNA。
1.2.3PCR扩增及鉴定
每个样本DRB1位点同时进行 16 个独立的 PCR 反应，每个反应管中均含有相应等位基因的特异性引物和内参对照引物。以不加模板的 PCR 体系为阴性对照。PCR 反应条件：反应总体积25μL，含有DRB1混合物1.4μL、Platinum? TaqDNA 聚合酶 0.1μL、模板 DNA1μL，最后加ddH20 补至25μL。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆扩增参数：95℃预变性2min，然后 95℃变性20s；63℃退火20s；72℃延伸40s，35个循环后72℃终末延伸5min。扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定，并用 3730XL型DNA 测序仪（上海 Invitrogen 生物公司纯化）进行测序[2]。
2 结果
HLA-DRB1*01和HLA-DRB1*16在两组间的分布频率存在差异（χ2=10.589，P=0.013，OR=3.377；χ2 =12.408，P=0.006，OR=0.354）；分层分析：维吾尔族病例组中 HLA-DRB1*01基因频率较高（χ2=10.180，P=0.026，OR=4.551），汉族病例组中HLA-DRB1*15和 HLA-DRB1*16基因频率均较低（χ2=9.562，P=0.026，OR=0.481；χ2=9.463，P=0.039，OR=0.135）。亚型分析：维吾尔族中，HLA-DRB1*01：02 的基因频率在病例组高于对照组（χ2=6.805，P=0.028，OR=3.038）；汉族中，HLA-DRB1*15：01 和 HLA-DRB1*16：02 的基因频率在病例组均低于对照组（χ2=9.535，P=0.006，OR=0.454；χ2=9.463，P=0.006，OR=0.135）。乳腺癌遗传易感性有关的 HLA-DRB1等位基因与患者年龄、病理分期、免疫组化、分子分型及危险组分级等因素无相关性（P＞0.05）。
3 讨论
HLA与多种肿瘤的遗传易感性存在联系，且差异性较大，它一直是肿瘤免疫研究的热点。例如对肝癌的研究：许多学者从基因的角度来论证病毒性肝炎与肝癌的因果关系：Aikawa T 认为HLA-DRB1*04：05会促使日本丙肝患者肝癌的发生，HLA-DRB1*09：01则会抑制；而 Pradat 通过随访发现携带基因HLA-DRB1*12：01-3 的丙肝患者更易发生肝癌；最近，Jin YJ 等通过检测468例慢性乙肝患者（接受过拉米夫定治疗12月以上）的 HLA-DRB1等位基因，观察到 HLA-DRB1*14：0101 与慢性乙型肝炎患者肝癌发展的风险增加有关系。对宫颈癌的研究：HLA-DRB1*03 在新疆妇女宫颈癌中表达频率低，而在英国妇女宫颈癌表达频率高。胡燕采用 PCR-SSP 技 术对温州 166 例宫颈癌标本进行基因检测，发现携带基因 HLA-DRB1*04，09 的年 轻妇女（≤35 岁）发生宫颈癌的风险较低，这与 Alaez-Verson 在墨西哥宫颈癌人群的研究结论恰好相反。对胃癌的研究：高长明发现 HLA-DRB1*08，02 与江苏汉族人患胃癌存在联系；林军认为 HLA-DRB1*09：01，12是湖北汉族人患胃腺癌的易感基因；李昭辉的研究则提示HLA-DRB1*01 和 HLA-DRB1*04增加山东临朐地区胃癌发生的风险。对鼻咽癌的研究：Hildesheim 发现中国人特有的一个单倍型基因HLA-A*3 303-B*5801/2-DRBl*0301-DQB1*0201/2-DPB1*0401与鼻咽癌有显著关联。此后，曾学辉和 Machulla HK等多位学者相继证实了 HLA-DRB1*03 与 NPC 的正相关性。然而卢亮在广东 NPC 人群中并未发现HLA-DRB1*03基因频率的异常分布。同时，对不同人群乳腺癌的全基因组表达谱研究显示，其差异表达基因群存在族群或人群差异，提示基于人群或族群遗传背景的筛查分析有重要意义[3]。因此，本研究成果对于探讨新疆地区女性乳腺癌的病因研究具有实际意义。
参考文献：
[1]陈威.NQO1基因C609T多态性与乳腺癌遗传易感性及临床病理特征的相关性[D].桂林医学院，2016.
[2]木妮热?木沙江，古丽扎热叶?艾库拉，贺春钰，等.新疆维吾尔族女性乳腺癌与HLA-DRB1基因多态性的关系及临床意义[J].癌变?畸变?突变，2015（5）：366-369.
[3]籍素芝，古丽扎热叶?艾库拉，朱相露，等.新疆维吾尔族和汉族乳腺癌与HLA-DRB1基因多态性的分析[J].中华肿瘤防治杂志，2015，22（23）：1791-1796.
论文作者:查艳景,王谷仙,唐国斌通讯作者
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2018年7月上第13期
论文发表时间:2018/12/11
标签：乳腺癌论文; 基因论文; 维吾尔族论文; 汉族论文; 频率论文; 病例论文; 易感论文; 《中国医学人文》(学术版)2018年7月上第13期论文;