糖尿病大鼠肾组织TIMP-1、TGF-β1及PKCβ的表达及其干预研究

胡玲^[1]2004年在《糖尿病大鼠肾组织TIMP-1、TGF-β_1及PKCβ的表达及其干预研究》文中研究指明目 的 探讨TIMP-1、TGF-β1和PKCβ在糖尿病大鼠肾损伤中的作用以及氯沙坦和辛伐他汀肾脏保护作用的可能机制。方 法 Wistar大鼠58只随机分为五组:正常对照组(C组),糖尿病模型组(D组),氯沙坦治疗组(D1组),辛伐他汀治疗组(D2组),以及氯沙坦和辛伐他汀联合治疗组(D3组)。所有糖尿病组大鼠在空腹10小时后按60mgβkg-1,一次性腹腔注射链尿佐菌素(STZ)溶液,C组注射等量生理盐水,72小时后尾静脉采血测空腹血糖(FBG)。当FBG≥16.65mmol/L并持续3天确认为制模成功进入实验。糖尿病各组不使用胰岛素及其他抗糖尿病药物治疗。D1组按20mgβkg-1βd-1氯沙坦灌胃,D2组按2 mgβkg-1βd-1辛伐他汀灌胃,D3组分别按以上剂量各自灌胃。成模后第8周末放射免疫法测尿白蛋白并计算12小时尿蛋白排泄率(UAER),同时收集血标本测FBG、血脂和血肌酐。取肾脏、脱水、称重、固定、石蜡包埋,免疫组化方法检测各组肾组织中金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、蛋白激酶Cβ(PKCβ)的表达水平以及治疗后变化。结 果 (1)氯沙坦和辛伐他汀单药及其联合治疗后的观察结果显示,两药均可显着降低糖尿病大鼠的12小时UAER(P<0.01),改善肾重指数(P<0.05),其中UAER下降以联合治疗组更为显着(P<0.01)。糖尿病各组的血脂水平未见明显差异。(2)实验8周末,TIMP-1、TGF-β1以及PKCβ可不同程度地表达于糖尿病鼠的肾小球、肾小管及小管间质中,且较正常对照组的表达普遍增高(P<0.01)。(3)氯沙坦和辛伐他汀各自单药治疗均可显着抑制TIMP-1、TGF-β1及PKCβ的表达(P <0.01),但均未达到正常对照水平,两药联合使用可进一步抑制叁者的表达。(4)分别用氯沙坦和辛伐他汀治疗的两组参数比较,总体上无明显差异。结 论1.STZ所致的DM大鼠,血糖明显增高的同时伴有体重减轻、肾重指数上升、12小时UAER明显增高。肾组织中TIMP-1、TGF-β1和PKCβ表达增高,提示上述指标参与了糖尿病大鼠肾脏损害的过程。2.氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能是通过抑制血管紧张素Ⅱ(AgⅡ)与其受体AT1结合,进而影响二酰甘油(DAG)-PKC活化途径,使PKCβ表达减少,达到下调TGF-β1和TIMP-1的效果。3.辛伐他汀也可以通过抑制TIMP-1、TGF-β1和PKCβ的表达,起到不依赖降脂的肾脏保护作用。其中对PKCβ活化的抑制可明显减弱对肾脏局部RAS的激活程度,从而引起TIMP-1和TGF-β1表达的减弱。4.氯沙坦和辛伐他汀联合使用的明显优势提示,两种药物可能从不同的环节共同作用于细胞因子网络起到肾脏保护作用,在临床上有更好的治疗效果。

曹文富^[2]2004年在《糖尿病大鼠肾小球与系膜细胞CTGF、ECM表达变化及Losartan的干预作用研究》文中进行了进一步梳理[目的] 探讨糖尿病大鼠肾小球结缔组织生长因子 (Connective tissue growth factor, CTGF)和细胞外基质(Extracellular matix,ECM)表达的变化在糖尿病肾病发生发展中的作用与意义，以及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(Angiotensin Ⅱ receptor antagonist，ARB)Losartan的干预效应。[方法]建立链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)诱导的Wistar大鼠糖尿病模型，采用血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 Losartan进行干预。应用原位杂交技术分析肾小球CTGFmRNA表达的变化，免疫组织化学技术分析肾小球生长因子系统CTGF、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β, TGF-β)和肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor, HGF)表达的变化；系膜细胞表型转化标志(α-平滑肌肌动蛋白[α-smooth muscle actin, α-SMA])和单核巨噬细胞标志(CD14+)的表达变化；细胞外基质(Extracellular matrix)系统纤维连接蛋白(Fibronectin, Fn)、层粘连蛋白(Laminin, Ln)和Ⅳ型胶原(Collagen type Ⅳ, Col Ⅳ)表达的变化；以及基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases, MMPs)系统MMP-9、组织金属蛋白酶抑制因子-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP-1)的表达变化。采用q检验及相关分析进行统计学处理。[结果](1)糖尿病模型组大鼠，肾小球CTGFmRNA、CTGF、TGF-β表达显著高于正常对照组(p<0.01)；HGF显着低于正常对照组；CTGF表达与TGF-β表达、肾小球体积(Glomerular volume,GV)、24小时尿蛋白排泄量之间呈显着正相关(p<0.01)，与HGF表达呈显着负相关(p<0.01)；与糖尿病模型组比较，Losartan干预组上述指标显着改善，但未能恢复至正常对照组水平(p<0.05)。(2)糖尿病模型组大鼠，肾小球α-SMA及CD14+表达显着高于正常对照组(p<0.01)；肾小球α-SMA与CTGF表达呈显着正相关(p<0.05)；与糖尿病模型组比较，Losartan干预组肾小球α-SMA及CD14+表达显着降低(p<0.05)，但未能恢复至正常对照组水平(p<0.05)。(3)糖尿病模型组大鼠，肾小球Fn、Ln和Col Ⅳ表达显着高于正常对照组(p<0.01)；肾小球Fn、Ln和Col Ⅳ表达与CTGF表达呈现同向升降关系；与糖尿病模型组比较，Losartan干预组肾小球Fn、Ln和Col Ⅳ表达显着降低(p<0.05)，但未能恢复至正常对照组水平(p<0.05)。(4)糖尿病模型组大鼠，肾小球MMP-9表达显着低于正常对照组(p<0.01)，TIMP-1表达显着高于正常对照组(p<0.01)；MMP-9/TIMP-1比值显着低于正常对照组(p<0.01)；MMP-9/TIMP-1比值与CTGF呈反向升降关系；与DM模型组比较，Losartan干预组肾小球MMP-9/TIMP-1比值显着改善(p<0.05)，但未能恢复至正常对照组水平(p<0.05)。[结论](1)DM大鼠肾小球CTGF及TGF-β表达显著升高，HGF表达显着降低，肾小球平均体积(MGV)增大，24小时尿蛋白排泄量增多；Losartan可部分改善升高的肾小球CTGF、TGF-β和HGF的异常表达，改善24小时尿蛋白排泄量和肾小球平均体积。(2)糖尿病大鼠肾小球有明显的系膜细胞表型转化和单核巨噬细胞浸润，并可能与CTGF表达有密切关系； Losartan可部分降低升高的系膜细胞表型转化和单核巨噬细胞浸润。(3)DM大鼠肾小球ECM表达升高，并与CTGF密切相关,可能是DM肾病发生和发展的病理基础；Losartan可部分改善升高的肾小球CTGF和ECM表达水平，可能有助于延缓肾小球硬化进程。(4)DM大鼠肾小球MMP-9表达降低，TIMP-1表达升高，MMP-9/TIMP-1比值降低,可能与ECM降解功能减弱有关；Losartan能部分改善肾小球基质金属蛋白酶系统的异常，可能有助于在一定程度上减少肾小球ECM沉积，延缓肾小球硬化的进程。

参考文献：

[1]. 糖尿病大鼠肾组织TIMP-1、TGF-β_1及PKCβ的表达及其干预研究[D]. 胡玲. 山西医科大学. 2004

[2]. 糖尿病大鼠肾小球与系膜细胞CTGF、ECM表达变化及Losartan的干预作用研究[D]. 曹文富. 重庆医科大学. 2004

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