湖南省株洲市二医院（株洲市肿瘤医院）病理科 412005
【摘 要】目的：试验分析微小组织冰冻快速制片技术。方法：选取200例微小组织，针对其冰冻快速制片过程常常出现冰晶、染色不均、切片多粒组织不全等问题，建立普通对照组与3个相应实验组（n=50），分别采用普通处理对照组和预冷冻平铺包埋处理、吸水纸处理、速冷冻方法，进行冰冻快速制片，对比其制片问题发生几率。结果：预冷冻平铺包埋处理切片多粒组织不全发生几率远低于普通处理；经过预冷冻平铺包埋处理、吸水纸处理出现冰晶问题大幅降低，后行速冷冻处理下，制片质量大幅提高。结论：微小组织冰冻快速制片技术中，采取预冷冻平铺包埋处理、吸水纸处理、速冷冻处理相结合是提高其制片质量的关键手段。
【关键词】微小组织；冰冻快速制片
病理的诊断过程中，随着各类疾病的治疗制作穿刺活检标本的需求量的增多，对于微小组织的冰冻快速制片技术运用越来越广泛[1]。微小组织的快速制片过程由于纤维内镜、穿刺组织相对细小，且存在多黏液、多纤维成分的情况，常会出现制片问题冰晶、染色不均、切片多粒组织不全等，面对此类问题，为探究合理的解决方法，本研究选取300例微小组织开展相关对比试验，探究提高冰冻切片质量的有效方法，现报道如下[2]。
1一般材料与方法
1.1一般资料
本研究运用的200例微小组织来源自我院临床穿刺获得的活检标本，主要分为多粒新生组织和长条形组织[3]。200例微小组织中，100例新生组织包括喉镜、胃肠镜、膀胱镜等穿刺标本，100例长条形组织包括肝穿、乳腺、肾穿等穿刺标本。建立1个普通处理对照组和A.预冷冻平铺包埋、B.吸水纸处理、C.速冷冻方法3个阶段步骤实验组（只进行A步骤，进行A+B步骤、进行A+B+C三个步骤），每组各50例活检标本，其中包括多粒新生组织和长条形组织各25例。研究一般资料不存在明显差异性（P>0.05），见表1。
表1 各组一般资料对比
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1.2仪器与试剂
300例微小组织均采用冰冻切片机进行切片，机器工作前工作环境温度设置在-20°~-25°之间[4]。采用的混合液为冰醋酸、福尔马林、95%浓度酒精混合固定液（AAF），混合比例为5：15：80。
1.3方法
1.3.1前期处理方法
①普通处理对照组，仅采用冰冻切片机进行切片，进行常规处理。
②实验组一，只进行步骤A.预冷冻平铺包埋，切片前对微小组织在冷冻头上平铺薄层冰冻切片，用普通胶水作为包埋剂，冻硬后修平，对于多粒新生组织如喉镜、胃肠镜、膀胱镜获取的活检标本，将其一点点快速平放于预冷冻平铺包埋修好的冷冻头上；对于长条形组织如肾穿、乳腺穿、肝穿获得的活检标本，将其一条条整齐的排列于于预冷冻平铺包埋的冷冻头上，使其不要互相重叠[5]。
③实验组二，进行步骤A+B.基于步骤A后进行吸水纸对微小组织处理，吸干其水分[6]。
④实验组三，进行A+B+C.基于前两步骤进行速冷冻处理，再吸干水分后再次补加少量普通胶水使组织完全包裹住，后在速冻器进行速冻。
1.3.2染色方法
染色前，对锋利且不存在缺口的刀片进行适当预冷，使刀片温度保持与操作环境温度一致；切片前，调整好活检标本组织与切片刀片之间的角度，对于要穿刺进条索状组织时刀片应与其成垂直角度，同时，切片过程组织脂肪在最后才接触到切片刀口；切片过程用螺旋扭进行适当修切，切片组织暴露时，可切开一张3~５μm厚度的薄片，贴于载玻片左侧，切片组织达到充分暴露时，同样再深切一张厚度相适的薄片贴于载玻片右侧，完成深浅两张薄片的切割后，使用混合固定液（AAF）进行立即固定。之后才用常规苏木素-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining HE）进行染色。染色完成后病理医生完成报告结果生成后，将剩余多出的组织切片上胶水洗净，放入10%浓度的中性福尔马林固定液中，制作成石蜡切片。
1.4观察指标
切片制作成功率，冰晶、染色不均、切片多粒组织不全出现情况
1.5统计学方法
采用SPSS16.0统计学软件对实验数据进行分析，以百分比记录冰晶、染色不均、切片多粒组织不全出现情况，P<0.05表示具有统计学上的差异。
2结果
2.1 各组微小组织冰冻快速制片制作成功率比较
实验结果显示，普通处理对照组的制作成功率为80%，只进行预冷冻平铺包埋的实验组一制作成功率为96%，进行预冷冻平铺包埋处理、吸水纸处理的实验组二和进行预冷冻平铺包埋处理、吸水纸处理、速冷冻方法的实验组三的成功率均为100%，见表2。
表2 各组成功率比较
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3.结论
微小组织冰冻制片技术中，常常出现切片不全、冰晶、染色不均匀等问题，长期的研究及工艺改进中我们发现，采用预冷冻平铺包埋处理、吸水纸处理、速冷冻处理等方法制作出优质的冰冻切片。预冷冻平铺包埋处理可以使多粒组织不会切完，并有效减少切片多粒组织不全出现的情况，用吸水纸处理可以吸干微小组织中水分，从而减少染色不均的状况，速冷冻通过急剧降温可以有效的实现减少冰晶，综合多步骤的实施，可以使微小组织的冰冻快速制片在保证速度的同时也能很好的控制质量，使制片中常见的问题得到很好的解决。因此，在微小组织的冰冻快速制片技术中，提倡使用预冷冻平铺包埋处理、吸水纸处理、速冷冻处理等多处理方式来完善制片的技术，使医疗服务水平得以更好的提升。
参考文献：
[1]陈淑敏，李凤朝，李琳琳，柳红.术中快速冷冻制片技术要点[J].徐州医学院学报. 2013（1）：63-64
[2]陈杰，郑莉，张惠箴.浅谈冷冻制片中常见问题与处理[J].临床与实验病理学杂志.2010（4）：502-503
[3]贺德智.浅谈如何制作优良的甲状腺冰冻切片[J].基层医学论坛. 2016（22）：3167-3168
[4]田玉旺，丁华野，李琳，等.一种减少冷冻切片组织内冰晶的处理方法.[J].临床与实验病理学杂志，2002，18（5）：567-568
[5]李敏，吴在增，曾玲，郑智勇.多组织块集合包埋制片法在冷冻切片中的应用[J].临床与实验病理学杂志. 2011（02）：215
[6]刘朝霞，徐丽，王军梅，杜江，李桂林.冰冻切片技术在神经病理诊断中的应用[J].现代医药卫生. 2015（06）：815-817
论文作者:谭云艳
论文发表刊物:《中国蒙医药》2017年第17期
论文发表时间:2018/3/1
标签：组织论文; 切片论文; 预冷论文; 制片论文; 平铺论文; 冰冻论文; 微小论文; 《中国蒙医药》2017年第17期论文;