一、急性胰腺炎大鼠胰腺组织中转化生长因子及Ⅰ型胶原变化的研究（论文文献综述）
张家伟[1]（2021）在《琥珀酰苯胺异羟肟酸对失血性休克大鼠模型胰腺组织的保护作用》文中研究表明背景:各种原因导致下的休克,有效循环血量急剧减少,组织血液灌注量严重不足,而在组织器官的血液循环恢复后,往往不仅未能使组织、器官功能恢复,反而会加重组织、器官的功能障碍和结构损伤,这一现象即为“缺血-再灌注损伤”（I/R）[1]。在许多临床环境中,胰腺的“缺血-再灌注损伤”是常见的病理生理过程。近年来,诸多研究提示组蛋白的乙酰化修饰在胆结石、酒精、高脂、缺血性等因素诱导的胰腺损伤及炎症反应进程中发挥着重要作用[2,3]。针对胰腺损伤的临床治疗难题,本课题以失血性休克大鼠为模型,评估其轻、重度失血后再灌注胰腺损伤的严重程度,并探讨在大鼠失血性休克模型中琥珀酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对胰腺损伤的保护作用,借以为胰腺炎性损伤的病理生理机制研究及临床相关治疗药物的研发提供新的视角和靶标。方法:随机将72只SD大鼠,分为假手术（Sham）组,假手术SAHA干预（Sham+SAHA）组、轻度失血性休克（MHS）组、轻度失血性休克SAHA干预（MHS+SAHA）组、重度失血性休克（SHS）组和重度失血性休克SAHA干预（SHS+SAHA）组,每组12只。并分别以总失血量20%和40%诱导轻度和重度失血性休克,并维持60min。后分别用自体血和SAHA或载体液进行复苏。复苏后3小时后,处死大鼠,并计算大鼠胰腺湿重/干重比值,并行HE染色观察大鼠胰腺组织病理形态学改变;采用蛋白质免疫印迹法（Western Blot）测定胰腺组织中组蛋白乙酰化程度和炎性细胞因子数值。!结果:数据分析发现,对比假手术组,失血性休克模型下,随着休克程度的加重,大鼠的胰腺损伤评分增加,湿/干重比值升高,炎性因子表达上调,磷酸化NF-κB/p65表达增强,而组蛋白乙酰化程度降低,差异均具有统计学意义（均P<0.05）;因而我们认为在大鼠休克模型下,我们构建大鼠胰腺损伤模型,得出随着失血性休克严重程度增高,大鼠胰腺损伤程度亦随着加重。而在施加SAHA佐剂干预后,对比各项数据,尤其是重度休克组,能发现大鼠胰腺病理损伤评分、湿/干重比、炎症因子含量及活化的NF-κB/p65水平均有所下降,而乙酰化H4的表达得到促进,差异均具有统计学意义（均P<0.05）;从而我们得出大鼠失血性休克胰腺损伤模型下,施加SAHA佐剂干预,能有效抑制失血性休克再灌注诱导的大鼠胰腺损伤,发挥其保护作用。结论:施加SAHA干预可明显减轻大鼠失血性休克再灌注所致的胰腺损伤,保护胰腺组织,其机制可能与逆转组蛋白乙酰化减少和抑制NF-κB途径有关。
殷茵[2]（2020）在《基于TRPA1通道探讨理中丸、小建中汤和吴茱萸汤治疗慢性胰腺炎的机制》文中研究指明研究背景:理中丸、小建中汤和吴茱萸汤是《伤寒论》中的经典名方,具有温中散寒止痛的功效,在中医《方剂学》教材中归属于温里剂,主治中焦寒证。脘腹疼痛是中焦虚寒证的主要表现之一,通过温中散寒的治疗方法可以有效减缓疼痛。胰腺位处中焦,受到炎症影响,可出现疼痛。吴茱萸汤、小建中汤、理中丸（温中三方）均对中焦寒痛疗效显着,现代研究证明它们均可用于治疗慢性胰腺炎（chronic pancreatitis,CP）。热敏通道瞬时感受器电位锚蛋白亚型1（Transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1）在慢性胰腺炎发病中发挥重要作用,TRPA1介导胰腺的神经元性炎症和痛觉过敏,阻断该通路能显着缓解疼痛,减轻炎症。已报道温中三方中包含的干姜、生姜、肉桂、吴茱萸中所含有的有效成分姜酚、肉桂醛和吴茱萸碱等具有调节TRPA1的作用。温中三方治疗胰腺炎症及疼痛可能是通过活化、脱敏或抑制TRPA1而实现。本研究通过长时间反复多次注射雨蛙素的实验手段诱导产生小鼠慢性胰腺炎模型,采用温中三方进行干预,通过小鼠疼痛行为学测定、髓过氧化物酶（Myeloperoxidase,MPO）和血清淀粉酶（Amylase,AMY）测定、胰腺组织病理学分级以及免疫组织化学、免疫蛋白印迹（Western Blot）等实验方式,从热敏通道TRPA1的角度揭示理中丸、小建中汤、吴茱萸汤治疗CP的炎症和疼痛的分子生物学机制。研究目的:探讨热敏通道TRPA1在理中丸、小建中汤和吴茱萸汤治疗慢性胰腺炎中发挥缓解疼痛和减轻炎症的作用机制,为阐明方剂药效科学内涵提供实验依据,对中医临床作出指导。研究方法:1.通过长期反复多次腹腔注射雨蛙素的实验手段诱导产生小鼠慢性胰腺炎模型,采用理中丸、小建中汤和吴茱萸汤进行干预,观察温中三方对小鼠疼痛行为的影响。2.复制CP小鼠模型,取小鼠血液用于血清淀粉酶的检测,取小鼠胰腺组织以ELISA法检测髓过氧化物酶活性、HE染色法用于胰腺组织病理分级,观察组织病理学变化。3.在小鼠CP模型上,应用免疫组化和免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测TRPA1、PAR2、cPLA2和EP4受体在小鼠胰腺组织的定位和表达。研究结果:1.小鼠慢性胰腺炎行为学实验雨蛙素腹腔注射造模后,在机械痛实验中,模型组对纤维丝敏感性增强,差异具有统计学意义（P<0.01）,在给药治疗后,理中丸组、小建中汤组和吴茱萸汤组与模型组比较,敏感性下降,差异具有统计学意义（P<0.01）。2.小鼠CP生理、病理实验模型组小鼠胰腺损伤程度明显,与正常组比较,病理评分高,两者之间存在统计学意义（P<0.01）,理中丸、小建中汤、吴茱萸汤与模型组进行比较,三方治疗后,三组病理损伤程度改善,评分低于模型组,两者之间存在统计学意义（P<0.01）。雨蛙素造模后,与正常组进行比较,小鼠MPO明显增高,两组之间进行比较差异具有统计学意义（P<0.01）,给药治疗后,阳性对照组、中药治疗组小鼠MPO值较模型组降低,各组比较差异具有统计学意义（P<0.01）。模型组小鼠血AMY值较正常组升高,差异具有统计学意义（P<0.01）,理中丸组、小建中汤组和吴茱萸汤组与模型组比较,AMY值显着下降,差异具有统计学意义（P<0.01）。3.CP小鼠胰腺免疫组化及免疫蛋白印迹实验三方对小鼠胰腺组织TRPA1的表达影响。胰腺组织中的TRPA1表达在造模后与正常组比较显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）,经中药给药后,TRPA1表达与模型组比较表达量下降,差异有统计学意义（P<0.01）。三方对小鼠胰腺组织PAR2的表达影响。雨蛙素造模后,PAR2在小鼠胰腺组织中表达高于正常组,差异有统计学意义（P<0.01）,给理中丸、小建中汤和吴茱萸汤后,组织中的PAR2表达量显着下降,差异有统计学意义（P<0.01）。三方对小鼠胰腺组织cPLA2的表达影响。造模后,与正常组比较cPLA2表达增加,差异有统计学意义（P<0.01）,三方给药后,胰腺组织中cPLA2表达较模型组下降,差异有统计学意义（P<0.01）。三方对小鼠胰腺组织EP4的表达影响。小鼠胰腺组织中EP4含量在雨蛙素造模后显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）,经给药治疗后,治疗组EP4含量显着下调,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:理中丸、小建中汤和吴茱萸汤三方均能降低胰腺组织中PAR2、cPLA2、EP4和TRPA1受体的表达量,抑制TRPA1通道的活性,减少其下游炎症物质释放,从而改善了胰腺炎症,缓解了腹部疼痛。
王皓[3]（2013）在《大鼠重症急性胰腺炎继发性肝、肺损伤模型的建立及相关炎症因子研究》文中提出目的：（1）通过夹闭胰头部的方法建立一种新型大鼠重症急性胰腺炎相关性肝损伤（severe acutepancreatitis-associated liver injury）的动物模型（2）通过夹闭胰头部的方法建立一种新型大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤（severe acute pancreatitis-associated lung injury, SAP-LI）的动物模型。（3）观察大鼠重症急性胰腺炎继发性肺损伤（severe acute pancreatitis-associated lung injury, SAP-LI）肺组织中低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）mRNA、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）mRNA、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）的变化情况，探讨HIF-1α、iNOS、NO在SAP-LI中的作用,以便为SAP-LI的诊治提供理论基础。方法：（1）将SPF级健康雄性SD大鼠180只随机分为：对照组、假手术组、肝损伤模型组，每组60只。再分别将每个分组中的60只大鼠随机分为6个分组，包括0h、6h、12h、18h、24h、36h组，每组10只大鼠。肝损伤模型组用16cm弯止血钳夹闭胰头2小时后松开。同时在相应时间点建立对照组及假手术组。在造模完成后，分别于相应各时间点采集血液、肝脏组织、胰腺组织标本。行血清淀粉酶（serum amylase，AMY）、血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、血液中性粒细胞百分比检测，行肝脏组织、胰腺组织病理学观察。（2）将SPF级健康雄性SD大鼠210只随机分为:对照组、假手术组、重症急性胰腺炎相关性肺损伤模型组，每组70只。再分别将每个分组中的70只大鼠随机分为7个分组，包括0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h组，每组10只大鼠。SAP-LI模型组用16cm弯止血钳夹闭胰头2h后松开。假手术组于相应各时间点开腹后，仅轻轻翻动胰腺10次后放回其解剖位置。正常对照组除麻醉3h外不做任何处理。在造模完成后，分别于相应各时间点采集血液、肺泡灌洗液、肺组织、胰腺组织标本。行血淀粉酶、总蛋白、中性粒细胞百分比检测，行大鼠肺组织湿/干重比，肺泡灌洗液蛋白检测，行肺组织、胰腺组织病理学观察。（3）将210只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为:对照组、假手术组、SAP-LI模型组，每组70只。再将每组中的70只大鼠随机分为7个分组，包括0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h组，每组10只大鼠。SAP-LI模型组采用夹闭法建模。造模完成后，分别于相应各时间点采集血液、肺泡灌洗液、肺组织标本。行血浆总蛋白检测，行大鼠肺组织湿/干重比，肺泡灌洗液蛋白检测，行肺组织HIF-1mRNA、iNOS mRNA qRT-PCR检测及NO、MDA、MPO检测，行肺组织病理学观察。结果：（1）肝损伤模型组大鼠AMY12h[（5052.1±114.9）U/L]、中性粒细胞百分比值在12h[（75.2±5.8）%]、ALT12h[（52.6±5.9）U/L]、AST12h[（629.5±57.4）]达到峰值，均显着高于其它时间点组（P<0.05）。肝损伤模型组与对照组和假手术组同一时间点组比较，差异具有统计学意义（P﹤0.05）。病理组织学观察可见造模后随时间进程胰腺炎呈加重表现，肝组织损伤24h最重。肝损伤模型组血清淀粉酶与血液中性粒细胞百分比、ALT、AST呈正相关（r=0.796，P<0.01；r=0.710，P<0.01；r=0.875，P<0.01）。胰腺病理学评学与肝脏病理学评分呈正相关（rs=0.919，P<0.01）。（2）SAP-LI模型组大鼠血清淀粉酶12h（5052.1U/L±114.9U/L,P<0.01）、中性粒细胞百分比值12h（75.2%±5.8%,P<0.05）达到峰值,大鼠肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值36h（0.009021±0.000107,P<0.01）达到高峰;大鼠肺组织湿/干重比36h（1.2001±0.0443,P<0.01）达到最小值。SAP-LI模型组与对照组和假手术组比较,差异均具有统计学意义（P﹤0.05）。病理组织学观察可见造模后随时间进程胰腺炎呈加重表现,肺组织损伤36h最重。SAP-LI模型组血清淀粉酶与血液中性粒细胞百分比、肺湿干质量比均呈正相关（r=0.794,P<0.01; r=0.365,P=0.002）。中性粒细胞百分比与肺湿干质量比呈正相关（r=0.356,P=0.003）。肺湿干质量比、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈负相关（r=-0.717, P<0.01）。胰腺病理学评分与肺脏病理学评分呈正相关（r=0.934,P<0.01）。（3）SAP-LI模型组大鼠肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值36h（0.009021±0.000107，P<0.01）达到高峰；大鼠肺组织湿/干重比36h（1.2001±0.0443，P<0.01）达到最小值。肺组织中HIF-1α mRNA（0.020279±0.000625，P<0.01）、iNOS mRNA（0.029780±0.000498，P<0.01）的相对表达量及NO（7.505±0.481，P<0.01）含量24h达到最高值，MDA（6.819±0.810，P<0.01）、MPO（5.089±0.523，P<0.05）含量36h达到峰值。SAP-LI模型组与对照组和假手术组比较，差异均具有统计学意义（P﹤0.05）。病理组织学观察可见肺组织损伤36h最重。肺湿干质量比、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈负相关（r=-0.717,P<0.01）。肺湿干质量比和MPO、MDA呈负相关（r=-0.636,P<0.01； r=-0.497,P<0.01）。 MDA和肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.661,P<0.01）。NO和MPO、MDA、iNOS、HIF-1α、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.721,P<0.01；r=0.529,P<0.01；r=0.695,P<0.01；r=0.642,P<0.01；r=0.781,P<0.01）。HIF-1α和MPO、iNOS、MDA、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.387,P<0.01；r=0.99,P<0.01；r=0.269,P<0.05；r=0.413,P<0.01）。iNOS和MPO、MDA、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.457,P<0.01；r=0.323,P<0.01；r=0.495,P<0.01）。MPO与MDA、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.595,P<0.01；r=0.884,P<0.01）。结论：（1）通过夹闭胰头部的方法建立了一种新型大鼠重症急性胰腺炎相关性肝损伤的动物模型，24h为肝损伤最严重的时间点，也是我们建模的最佳时间点．为急性坏死性胰腺炎致肝损伤的发病机制及药物干预研究提供了一种较为理想的动物模型。（2）通过夹闭胰头部的方法建立了一种新型大鼠重症急性胰腺炎致肺损伤动物模型,36h为肺损伤最严重的时间点,也是我们建模的最佳时间点。为重症急性胰腺炎致肺损伤的发病机制及药物干预研究提供了一种较为理想的动物模型。（3）大鼠重症急性胰腺炎继发性肺损伤36h损伤最重，肺组织MDA、MPO检测值36h最高，HIF mRNA、iNOS mRNA含量及NO检测值24h最高，由此推测HIF-1α参与了肺损伤早期过程，iNOS及NO间接性致伤作用占主导地位。HIF-1α、NO、iNOS与中性粒细胞活性、脂质过氧化程度、及SAP-LI蛋白渗出有关。中性粒细胞活性与脂质过氧化程度有关。中性粒细胞活性、过氧化损伤与肺蛋白渗出关系密切。
刘晓[4]（2013）在《急性胰腺炎时自噬变化的意义及干扰素γ对自噬影响的实验研究》文中进行了进一步梳理研究背景急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是临床常见的急症，国外报告其发病率10/105～44/105，近年来呈升高趋势。约20%患者可发展为重症急性胰腺炎，病死率高达15%～30%，病情危重，预后凶险，已经成为威胁人类健康和生命的重要杀手。尽管国内外学者对急性胰腺炎的防治进行了多年的研究，但迄今还没有针对急性胰腺炎特效的防治措施。因此，深入研究AP的发病机制，探索其启动的关键过程，不仅具有重要的学术价值，而且将有助于寻找和建立有针对性的救治方法，以期提高急性胰腺炎的救治水平，具有重要的的意义。自噬是广泛存在于真核生物中的生命现象，属程序性细胞死亡的一种。自噬发生时，在细胞内形成“双层膜”结构的囊泡即自噬体，包裹胞质成分和某些细胞器碎片，送入溶酶体中并进行多种酶的消化及降解，为细胞内再循环提供能量和小分子物质。自噬是急性胰腺炎早期发生的事件，在急性胰腺炎中的作用机制存在很多争议。有学者采用敲除自噬相关基因小鼠研究后发现急性胰腺炎减轻，同时自噬相关蛋白减少，推测自噬在急性胰腺炎中被诱导增强，自噬对胰腺起损害作用；有学者研究发现在急性胰腺炎中长寿蛋白的降解大大减少（长寿蛋白通过自噬途径降解），大量空泡聚集，认为自噬在急性胰腺炎中下降，自噬对胰腺起保护作用；另外有学者认为自噬是一个动态的过程，自噬过程在急性胰腺炎中被破坏，自噬和胰腺炎起相互促进作用。这些相互矛盾结果显示自噬在急性胰腺炎发生中存在很大的争议。干扰素γ是一种来自T淋巴细胞培养液上清的蛋白，具有免疫调节和抗细胞增殖作用。目前有研究发现干扰素γ可促进自噬。另有文献报告干扰素γ对急性胰腺炎有一定影响。为了进一步探讨自噬在急性胰腺炎发生过程中的变化及其病理意义，并观察干扰素γ对急性胰腺炎及自噬的影响，并探讨其作用机制，拟开展本实验研究。研究目标1.建立大鼠重症急性胰腺炎模型。观察急性胰腺炎发生过程中自噬活性的变化，探讨其病理意义。2.观察干扰素γ对急性胰腺炎炎症及自噬的影响，初步探讨其机制。研究方法围绕上述目标，本研究采用以下研究方法：1．动物模型的建立采用左旋精氨酸400mg/100g（腹腔注射，2次，间隔1小时）方法，构建急性胰腺炎大鼠模型。2．电镜大鼠新鲜胰腺组织取下后立即置于25%戊二醛电镜固定液中，切成1mm3大小组织块，送电镜室，于透射电镜下观察自噬相关结构。3．ELISA造模取血，离心，上清用R&D试剂盒行ELISA检测，检测不同时间点AMY、TAP的浓度及IL-1、IL-6、TNF-α等炎症因子的水平。4．HE染色标本置于4％中性缓冲甲醛中固定24小时，组织脱水石蜡包埋，室温保存，行HE染色后观察胰腺炎症程度。5．免疫组化经漂洗，封闭，一抗和二抗孵育后检测LC3、Beclin-1、Lamp-2等蛋白在胰腺组织中的表达。6．Western Blot经过提取蛋白、凝胶电泳、转膜、标记一抗和二抗、曝光等步骤观察LC3、Beclin-1、Lamp-2、GAPDH等蛋白的表达。7. qRT-PCR通过RNA提取、逆转录和qRT-PCR的方法检测胰腺组织LC3、Beclin-1、Lamp-2、Ⅲ型PI3K、GAPDH等蛋白的基因表达。8．统计学分析全部数据通过SPSS11.5统计软件X进行分析，取P＜0.05具有统计学意义。计量资料实验数据以均数标准差（±S）表示；两样本均数比较采用t检验，多组样本均数比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），方差齐时采用LSD-t或SNK-q检验，方差不齐时采用Dunnett’s T3或Dunnett’s C检验。研究结果1．20%L-精氨酸腹腔注射可构建重症急性胰腺炎模型先后采用250mg/100g、300mg/100g、400mg/100g和500mg/100g等不同给药剂量的20%L-精氨酸腹腔注射构建重症急性胰腺炎大鼠模型，结果发现400mg/100g的剂量腹腔注射2次，间隔1小时造模，可成功建立重症急性胰腺炎大鼠模型。2．急性胰腺炎诱导增强自噬的发生免疫组化、Western Blot和qRT-PCR检测发现，与正常对照组比较，大鼠急性胰腺炎模型组自噬相关因子LC3、Beclin-1的蛋白与mRNA表达显着上调；电镜观察发现急性胰腺炎组大鼠胰腺组织自噬相关超微结构明显多于对照组。结果证实急性胰腺炎可诱导增强自噬的发生。3．调控自噬可影响胰蛋白酶原的活化程度和急性胰腺炎的损伤程度分别采用自噬诱导剂雷帕霉素（RAP）和自噬阻断剂氯喹（CQ）及3-甲基腺嘌呤（3-MA）调控自噬活性，发现诱导自噬后TAP明显升高，阻断自噬后TAP下降；SAP9h后诱导剂组大鼠胰腺坏死病理评分高于急性胰腺炎组，阻断剂组与急性胰腺炎组无明显差别，24h后诱导剂组胰腺坏死评分高于急性胰腺炎组，阻断剂组胰腺坏死评分低于急性胰腺炎组。结果表明急性胰腺炎时自噬可促进胰蛋白酶原的激活，并参与胰腺的损伤。4．干扰素γ在急性胰腺炎时可诱导自噬的发生及自噬体和溶酶体的融合与急性胰腺炎对照组相比，急性胰腺炎模型大鼠注射干扰素γ，免疫组化、Western Blot和qRT-PCR检测均表明自噬相关因子LC3及Beclin-1的蛋白和mRNA表达明显上调；溶酶体相关膜蛋白-2（Lamp-2）蛋白和基因表达亦明显上调。结果表明干扰素γ可进一步诱导自噬的发生，并促进自噬体和溶酶体的融合。5．干扰素γ能促进胰蛋白酶原的激活和加重急性胰腺炎时胰腺的损伤与急性胰腺炎对照组相比，急性胰腺炎模型大鼠注射干扰素γ后胰腺水肿、炎症、坏死、出血评分明显增高；血浆炎症因子IL-6浓度明显升高，TAP在各时间点均明显上升；淀粉酶峰值前移。结果表明干扰素γ能促进胰蛋白酶原的激活，并加重急性胰腺炎时的炎症反应与胰腺损伤。6．急性胰腺炎时干扰素γ可能通过Ⅲ型PI3K通路来诱导自噬和加重炎症qRT-PCR显示干扰素γ组Ⅲ型PI3K复合物（vps34）mRNA明显高于急性胰腺炎对照组，提示急性胰腺炎时干扰素γ可能通过该通路诱导自噬和加重胰腺损伤和炎症。结论急性胰腺炎可诱导增强自噬的发生，自噬促进胰蛋白酶原的激活，并参与胰腺的损伤；急性胰腺炎时给予干扰素γ可进一步诱导自噬的发生，促进胰蛋白酶原的活化和加重胰腺的损伤，该效应可能通过Ⅲ型PI3K通路实现。
邓文宏[5]（2013）在《花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的作用及其机制探讨》文中认为第一部分：静脉注射花姜酮治疗重症急性胰腺炎大鼠的量效关系目的：探讨一种天然植物提取物花姜酮治疗重症急性胰腺炎（SAP）大鼠的量效关系,为花姜酮干预重症急性胰腺炎大鼠肝损伤提供合适的用药剂量。方法：48只wistar大鼠,雄性,随机分为6组（N=8）。正常对照组（CON组）,重症急性胰腺炎组（SAP组）,花姜酮预处理组5mg/kg （ZER5mg/kg）,花姜酮预处理组10mg/kg （ZER10mg/kg）,花姜酮预处理组20mg/kg （ZER20mg/kg）,花姜酮预处理组40mg/kg （ZER40mg/kg）。采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液（0.1ml/100g）制备重症急性胰腺炎大鼠模型,于模型制备前30min由股静脉给予不同浓度（5、10、20、40mg/kg）的花姜酮溶液。模型制备后12h处理大鼠,以干棉球吸附大鼠腹水；心脏穿刺取血分离得到血清；取大鼠右肺中叶计算肺湿干比；取大鼠胰腺组织经4%多聚甲醛固定。分别测定各组腹水量、血清淀粉酶（AMY）和肝肾功能（ALT、Cr值）、肺湿干比（反应肺脏含水量）、HE染色观察各组胰腺组织病理学改变并评分。结果：重症急性胰腺炎组（SAP组）腹水量、血清AMY、ALT、Cr值、肺湿干比、胰腺病理评分均较正常对照组（CON组）显着升高,差异有统计学意义（P<0.05）。 ZER5mg/kg上述指标与SAP组无显着差别。ZER10mg/kg、ZER20mg/kg、ZER40mg/kg三组上述指标中腹水量、血清AMY、肺湿干比、胰腺病理评分均较SAP组显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）。但ZER20mg/kg与ZER40mg/kg两组血清ALT、Cr值较高,与SAP组无统计学差异,而ZER10mg/kg组血清ALT、Cr值与SAP组相比明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：5mg/kg花姜酮不能有效缓解胰腺炎病情,10、20、40mg/kg花姜酮均能较好的缓解胰腺炎病情,降低腹水量、血清淀粉酶、胰腺病理评分。而20、40mg/k花姜酮虽能缓解胰腺炎病情,但肝肾毒性较大。因此认为10mg/kg为治疗重症急性胰腺炎的最佳有效剂量。第二部分：花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的作用目的：探讨花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的作用,为重症急性胰腺炎大鼠肝脏保护提供理论依据。方法：70只wistar大鼠,雄性,随机分为4组。正常对照组（CON组）（N=10）；重症急性胰腺炎组（SAP组）（N=40）；花姜酮预处理组（ZER组）（N=10）,花姜酮药物对照组（Drug-CON组）（N=10）。其中重症急性胰腺炎组（SAP组）又分四个时间点1h,3h,6h,12h （N=10）.重症急性胰腺炎组及花姜酮预处理组大鼠采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液（0.1ml/1OOg）制备重症急性胰腺炎模型,正常对照组及花姜酮药物对照组翻动胰腺和十二指肠。花姜酮预处理组及花姜酮药物对照组于模型制备前30分钟由股静脉穿刺给予10mg/kg的花姜酮溶液。正常对照组、花姜酮预处理组、花姜酮药物对照组于12h处死大鼠,重症急性胰腺炎组分1h、3h、6h、12h四个时间点处死大鼠。以干棉球吸附各组大鼠腹水。以5m1注射器心脏穿刺抽血,经离心机分离得到血清；取部分大鼠胰腺胰头组织及大鼠肝脏右叶经4%多聚甲醛固定后石蜡包埋。分别测定各组大鼠死亡率、腹水量、血清淀粉酶（AMY）和磷脂酶水平,测定反映肝脏功能的谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平（ALT、AST值）、并行胰腺和肝脏光镜下常规病理学HE染色检查。结果：花姜酮药物对照组大鼠死亡率、腹水量、AMY、磷脂酶水平、ALT、 AST值、以及胰腺和肝脏组织病理学评分（级）同正常对照组,差异无统计学意义。重症急性胰腺炎组大鼠死亡率、腹水量、AMY、磷脂酶水平、ALT、AST值、以及胰腺和肝脏组织病理学评分（级）明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。花姜酮预处理组大鼠上述指标与重症急性胰腺炎组相比明显降低（P<0.05）,但均高于正常对照组水平。结论：应用花姜酮可以降低大鼠死亡率,减轻大鼠腹水量,减轻胰酶及肝脏酶学,减轻胰腺和肝脏的病理学损伤；对重症急性胰腺炎大鼠胰外脏器-肝脏的损伤起到了保护作用。然而花姜酮药物本身对正常大鼠无明显副作用。第三部分：花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤保护作用的机制探讨目的：本文前两部分已经证实花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠的胰外脏器-肝脏具有保护作用,本部分进一步探讨静脉给药对大鼠重症急性胰腺炎肝损伤保护作用的机制。方法：70只wistar大鼠,雄性,随机分为4组。正常对照组（CON组）（N=10）；重症急性胰腺炎组（SAP组）（N=40）；花姜酮预处理组（ZER组）（N=10）,花姜酮药物对照组（Drug-CON组）（N=10）。其中重症急性胰腺炎组（SAP组）又分四个时间点1h,3h,6h,12h（N=10）。重症急性胰腺炎组及花姜酮预处理组大鼠采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液（0.1ml/100g）制备重症急性胰腺炎模型,正常对照组及花姜酮药物对照组则向胆胰管注入等量生理盐水。花姜酮预处理组及花姜酮药物对照组于模型制备前30分钟由股静脉穿刺给予10mg/kg的花姜酮溶液。正常对照组、花姜酮预处理组、花姜酮药物对照组于12h处死大鼠,重症急性胰腺炎组分1h,3h,6h,12h四个时间点处死大鼠。取部分大鼠胰腺胰头组织及大鼠肝脏右叶经4%多聚甲醛固定后石蜡包埋。取部分大鼠胰腺胰头组织及大鼠肝脏右叶至-80°冻存。行免疫组化法检测各组大鼠胰腺及肝脏核因子-κB （nuclear factor-kappa B, NF-κB） p65的表达水平,提取各组大鼠核蛋白行Western blot蛋白印迹法测定各组大鼠核因子-κB表达,提取各组大鼠浆蛋白测定及核因子-κB抑制蛋白I-κB （Inhibitor κB, I-κB）水平,逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-reverse transcription, RT-PCR）检测各组大鼠胰腺及肝脏细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule, ICAM-1）及白介素-1（Interleukin, IL-1） mRNA表达水平。结果：随着时间点的延长,重症急性胰腺炎组大鼠胰腺组织细胞核NF-κB蛋白的表达逐渐增加,6小时达高峰后表达下降,但仍高于正常对照组水平。给予花姜酮预处理后,能够明显减少NF-κB蛋白的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。胞浆内I-κB蛋白的表达变化与NF-κB蛋白相反。免疫组化定位结果提示重症急性胰腺炎组大鼠胰腺组织表达NF-κB主要位于细胞核内,而正常对照组大鼠胰腺组织NF-κB表达主要位于细胞浆。重症急性胰腺炎组大鼠肝脏组织细胞核NF-κB蛋白的表达逐渐增加,12小时达高峰。给予花姜酮预处理后,能够明显减少NF-κB蛋白的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。胞浆内I-κB蛋白的表达变化与NF-κB蛋白相反。免疫组化定位结果提示重症急性胰腺炎组大鼠肝脏组织表达NF-κB主要位于细胞核内,而正常对照组大鼠肝脏组织NF-κB表达主要位于细胞浆。ICAM-1及IL-1结果提示应用花姜酮后,花姜酮预处理组大鼠的PCR产物表达明显低于重症急性胰腺炎组大鼠,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：花姜酮可以通过减少重症急性胰腺炎大鼠胰腺及肝脏组织NF-κB蛋白表达,进而抑制炎症瀑布效应分子ICAM-1和IL-1,从而达到对胰腺炎肝损伤的保护作用。
余佳[6]（2012）在《聚腺苷二磷酸核糖聚合酶在重症急性胰腺炎肾上腺损伤中的作用及机制》文中研究说明目的：探讨重症急性胰腺炎（SAP）大鼠模型中肾上腺的组织形态、细胞凋亡和功能变化,研究PARP在SAP大鼠肾上腺组织的变化规律及其对肾上腺损伤的作用。探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂3-氨基苯甲酰胺（PARP inhibitor3-AB）治疗大鼠SAP的量效关系。观察阻断PARP活性对SAP大鼠肾上腺组织病理和超微结构、细胞凋亡的影响,检测肾上腺组织NF-κB激活及其依赖性基因的蛋白表达变化,探讨PARP抑制剂3-AB对SAP肾上腺损伤保护作用的机制。方法：第一部分：采用SPF级雄性Wistar大鼠,通过逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠溶液建立SAP大鼠模型。假手术对照组（对照组）开腹后仅翻动胰腺和十二指肠。实验动物在检测PARP活性时分为假手术对照组（基础值）、SAP3h、6h、12h、24h组。检测血清淀粉酶（amylase, AMY）口脂肪酶（lipase, LPS）水平,ELISA法检测血清皮质酮水平,应用HE染色观察胰腺和肾上腺组织病理学改变,采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL法）检测肾上腺皮质细胞凋亡指数。采用蛋白印迹法检测肾上腺组织PARP活性指标聚腺苷二磷酸核糖（PAR）表达在SAP不同时程的变化。第二部分：SPF级雄性Wistar大鼠60只,随机分为6组：假手术对照组（假手术+溶剂对照组,对照组）,重症急性胰腺炎模型组（SAP造模+溶剂对照组,SAP组）,3-氨基苯甲酰胺10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg预处理组（SAP造模+3-AB预处理组,分别记为T1、T2、T3组）,3-AB药物对照组（假手术+3-AB对照组,Drug-CON组）（n=10）。逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠诱导SAP模型。CON组、SAP组均于术前30min经股静脉注射5%DMSO （2ml/kg）,3-AB各剂量预处理组SAP造模前30min经股静脉注射等量5%DMSO溶解的不同剂量的3-AB,药物对照组根据预处理效果选择最佳剂量。术后12h剖杀各组大鼠,测定腹水量,血清淀粉酶（AMY）、谷丙转氨酶（ALT）和肌酐（Cr）水平并观察胰腺组织病理学变化。第三部分：雄性Wistar大鼠150只,分为研究实验（一）（N=90）和生存率观察实验（二）（N=60）。研究实验组的大鼠随机分为三组：假手术对照组（CON+vehicle组,CON组,n=10）,重症急性胰腺炎模型组（SAP+vehicle组,SAP组,n=40）,3-AB预处理组（SAP+3-AB组,3-AB组,n=40）。SAP组和3-AB组分别设立3h、6h、12h、24h时间点。CON组、SAP组均于术前30min经股静脉注射5%DMSO （2ml/kg）,3-AB组经股静脉注射等体积5%DMSO溶解的3-AB（20mg/kg）。术后于各时间点分别剖杀大鼠并采集标本。电镜观察肾上腺皮质细胞超微形态结构,TUNEL法检测肾上腺细胞凋亡指数,比色法检测肾上腺组织髓过氧化物酶（MPO）活性（间接表示中性粒细胞浸润程度）,蛋白印迹法检测肾上腺组织PAR、NF-κBp65、肿瘤坏死因子-α （tumor necrosis factor-α, TNF-α）和细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule, ICAM-1）的表达水平。另外设置的生存率观察实验组设置CON组、SAP组和3-AB组（各组处理方式,溶剂和3-AB的给予量同研究实验（一））,每组20只大鼠。观察PARP抑制剂3-AB对SAP大鼠生存率（病程30h）的影响。结果：第一部分：随胰腺炎病情进展,胰腺酶学指标AMY和LPS水平升高,胰腺组织出现出血、坏死等病理变化,胰腺病理学评分逐渐升高。血清皮质酮在SAP3h应激性升高,至6h时有所下降但仍处较高水平,至12h时接近基础水平,至24h时明显低于对照组,出现肾上腺功能障碍。光镜观察SAP3h时肾上腺组织水肿,血窦明显扩张、充血,6-24h逐步加重,出现肾上腺腺体结构紊乱、出血,及肾上腺细胞坏死、变性。CON组大鼠肾上腺TUNEL染色阳性细胞少。随SAP病程进展,肾上腺TUNEL染色阳性细胞数明显增加,主要在束状带,皮质细胞凋亡指数逐渐升高。CON组大鼠肾上腺组织PAR表达水平很低,SAP组肾上腺组织PAR表达3h迅速升高（P<0.05）,6h达峰值（P<0.05）,12-24h逐渐降低,但仍高于对照组（P<0.05）。第二部分：SAP组腹水量、AMY、ALT口Cr值较CON组均显着升高（P<0.05）；T1组腹水量较SAP组有显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）,但其血清AMY、 ALT和Cr值较SAP组比较,差异无统计学意义（P>0.05）；T2组上述各指标值与SAP组比较均显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）；T3组血清AMY和ALT水平较SAP组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）,但其腹水量和血清Cr水平与SAP组比较,差异无统计学意义（P>0.05）；3-AB药物对照组（Drug-CON组,20mg/kg）的上述指标值与较CON组差异无统计学意义（P>0.05）。第三部分：与SAP组比较,PARP抑制剂3-AB可显着降低SAP大鼠血清淀粉酶和胰腺组织病理评分,缓解肾上腺组织病理和超微结构损伤,降低肾上腺皮质细胞凋亡指数,并下调肾上腺组织MPO活性（P<0.05）,提升12-24h血清皮质酮水平（P<0.05）。SAP造模后肾上腺组织NF-κB p65、TNF-α和ICAM-1蛋白表达较对照组增加（P<0.05）,阻断PARP活性能够抑制NF-κB p65、TNF-α和ICAM-1蛋白的表达（P<0.05）。结论：SAP大鼠随病程进展,肾上腺病理损伤和细胞凋亡呈进行性加重,血清皮质酮水平亦出现相应变化。表明SAP大鼠存在肾上腺损伤和急性肾上腺功能不全。SAP大鼠肾上腺组织PARP活化呈时间依赖性增强,具有促进细胞凋亡和坏死的作用,提示肾上腺组织PARP过激活参与了SAP肾上腺损伤的过程。在大鼠SAP肾上腺损伤中NF-κB活化增强,TNF-α和ICAM-1蛋白表达以及肾上腺中性粒细胞浸润程度明显增加,肾上腺组织出现明显的病理损伤、细胞凋亡和超微结构改变。静脉给予PARP抑制剂3-氨基苯甲酰胺20mg/kg干预是改善大鼠SAP病情安全有效的最佳剂量。应用3-AB抑制PARP活性,能抑制肾上腺NF-κB炎症通路激活和中性粒细胞的募集,减少SAP大鼠肾上腺细胞凋亡和坏死,减轻肾上腺炎症损伤和凋亡,从而对SAP相关性肾上腺损伤发挥保护作用。
张俊东[7]（2009）在《激活素整合素内皮素在慢性胰腺炎胰腺纤维化机制中的作用及其对策的研究》文中研究说明胰腺纤维化是与慢性胰腺炎（chronic pancreatitis）相伴随的特殊的组织病理学特点,往往导致胰腺功能性组织丧失,富含连接组织的细胞外基质（extracellularmatrix ECM）在胰腺内沉积等后果。然迄今为止,胰腺纤维化过程精确的调控机制仍未明了。胰腺星状细胞（pancreatic Stellate cell,PSC）是产生胰腺纤维化的关键细胞,并最终导致慢性胰腺炎的形成。在此过程中有多种细胞因子参与,而各种因子的产生途径、相互作用机制不尽相同。激活素（Activin）最早是在性腺发现的糖蛋白激素,后来发现其作用不仅限于性腺,具有多种生物学功能,属于TGF-β超家族的成员,其三种受体属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。激活素参与机体炎症反应和组织修复过程,一定水平激活素不但呈剂量依赖性的促进PSC增殖并表达a平滑肌肌动蛋白（a-SMA）,而且可增强其胶原蛋白分泌。内皮素（endothelin ET）作为迄今所知最强的缩血管物质,其作用机制是通过增加PSC的胶原合成和分泌,以及提高PSC的摄取与合成能力有关。整合素（Integrin）是位于细胞表面的糖蛋白受体家族分子,为介导细胞—细胞以及细胞—细胞外基质,且作为介导信号传递的膜分子,在许多重要的病理生理过程:如细胞增殖、分化、伸展和迁移、凋亡、炎症反应、组织修复和肿瘤侵袭转移等中起着十分重要的作用。细胞因子在促进PSC活化、增殖、迁徙过程中,都要通过细胞信号传导通路对PSC进行控制。c-Jun氨基端激酶（c-Jun-terminal kinase,JNK）是丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activaed proren kinase,MAPK）信号传导通路家族成员。MAPK广泛参与细胞的多种生命过程,包括生长、分化、细胞周期调节,肿瘤发生,细胞凋亡等。JNK主要参与ECM的合成。汉丹肝乐是在临床辩证的基础上,以丹参、黄芪、汉防己碱、银杏、赤芍等五味中药组方而成。已有的研究证实,它可通过减轻肝细胞脂质过氧化、保护肝细胞、抑制HSC增殖及胶原合成、提高胶原酶活性、并促进胶原蛋白降解等多种机制,来发挥抗肝纤维化效应。本课题采用细胞生物学和分子生物学技术（包括免疫组化、RT-PCR,westernblot等）,检测激活素、整合素、内皮素在胰腺组织损伤修复及纤维化形成过程中的动态变化以及应用药物干预胰腺纤维化的形成。旨在探讨激活素、整合素、内皮素在慢性胰腺炎胰腺纤维化发生、发展中的作用和细胞内传导途径以及药物干预效果。本课题主要分为三部分:（1）慢性胰腺炎大鼠模型的建立;（2）激活素、整合素、内皮素在慢性胰腺炎胰腺组织中的表达;（3）汉丹肝乐对大鼠慢性胰腺炎胰腺纤维化干预的研究。实验方法1、实验动物模型的建立通过向Wistar大鼠胆胰管输注含2%三硝基苯磺酸（TNBS）的10%乙醇PBS溶液复制慢性胰腺炎动物模型,在胆胰管中注射等量的10%乙醇PBS溶液复制对照组,干预组（模型组动物）术后第三天给予口服汉丹肝乐,大鼠术后分1、2、3、4、5、6、7周等观察时点。2、实验标本的制备抽取血清分别应用速率法、电化学发光免疫法测定血清淀粉酶及C肽;取胰腺组织部分即刻按透视电镜观察胰腺组织超微结构要求制片后行电镜观察,部分胰腺组织行组织学标本制备,部分胰腺组织-80℃保存。3、免疫组化组织学标本经脱蜡、脱苯,水化后采用免疫组化法检测FN胶原、ACT-A、ET-1、Integrinα5β1、JNK、a-SMA,结果判定:光镜下胰腺间质出现黄、棕色为阳性染色。免疫组化半定量分析表达程度:应用彩色图象分析系统,对各组大鼠胰腺切片随机选取10个视野测量,计算阳性染色面积占胰腺视野面积比,并进行定量分析,以染色面积在标本中所占百分比表示。4、Masson胶原染色组织学标本经脱蜡、脱苯,水化后采用采用Masson胶原染色法行胰腺组织胶原染色,结果判断:胰腺腺泡呈红色,胶原纤维呈蓝色或绿色。胶原面积半定量分析:选取每一例标本10个不同视野下相同大小的区域,测算出胶原面积占该区域的百分比,取其平均值作为胶原的相对含量值。5、RT-PCRRT-PCR技术检测模型组激活素mRNA、整合素mRNA、内皮素mRNA的表达。实验所用物品的去Rnase处理,组织总RNA的提取,逆转录（RT）反应,聚合酶链反应（PCR）,基因扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳,拍照。结果分析:将凝胶电泳图像输入,自动电泳凝胶成像分析系统,进行表达强度分析,按下公式计算相对系数:相对系数=细胞因子表达强度/β-actin表达强度。每张电泳图重复进行3次,计算均数。6、western blot（蛋白印迹）western blot法检测α-SMA、JNK表达。组织中总蛋白的提取,聚丙稀酰胺凝胶（SDS一PAGE）电泳,转膜,印迹（blotting）,将胶片图像输入凝胶成像分析系统,进行表达强度分析,按下公式计算相对系数:相对系数=蛋白表达强度/β-actin表达强度,每张图像重复进行3次,计算均数。结果1、实验动物大体及形态学变化模型组大鼠术后第一周内体重明显减轻,其后体重有所增加,但与对照组相比,体重仍较轻。模型组大鼠病理形态变化:自术后第二周胰腺小叶周围及间质内有纤维化形成,第4周达高峰,第5、6、7周胰腺组织变化基本同第4周。2、透视电镜观察模型组第1、2周胰腺间质内可见少量活化的胰腺星状细胞（PSC）,其内维生素A脂滴消失,胰腺腺胞线粒体肿胀、有多种囊泡形成。第3周胰腺组织间质内、透明活化的PSC以及成纤维细胞明显增多,间质内纤维增多,腺胞内线粒体明显肿胀、透明。第4周时,胰腺组织间质内活化的PSC、成纤维细胞、巨噬细胞明显增多,间质内可见大量的纤维成分。胰腺腺胞内粗面内质网明显扩张,腺胞体积减少,第5、6、7周胰腺组织变化基本同第4周。3、血清学检测模型组各时点淀粉酶测定值较对照组均明显升高,模型组C肽测定值在术后第1、2周较对照组无差异,3～7周较对照组均明显降低4、免疫组化检测（1）FN胶原在模型组表达逐渐上调,于第四周达高峰,明显高于干预组及对照组,干预组较模型组有所下调。模型组第5、6、7周胰腺组织变化基本同第4周。（2）对照组:激活素在腺泡细胞、胰管壁、胰腺间质内低表达;模型组与干预组:阳性细胞多位于胰腺间质、纤维间隔区、炎症细胞浸润区表达。模型组在1-7周呈逐渐上调趋势,明显高于对照组,尤以第4周后明显,干预组较模型组有所下调.（3）对照组:内皮素在胰腺腺泡、胰管壁有弱表达;模型组与干预组:阳性细胞多位于纤维化区域及炎症细胞浸润区。模型组分别在1、4周出现两个高峰,明显高于对照组,干预组较模型组明显下调。（4）对照组:整合素在胰腺腺泡、胰管壁有弱表达;模型组及干预组:阳性细胞多位于纤维化区域及炎症细胞浸润区。模型组表达逐渐上调,于3,4周达高峰,随后表达下调,明显高于对照组,干预组较模型组明显下调。（5）对照组:JNK在胰腺腺泡、胰腺间质内少量表达;模型组及干预组:阳性细胞多位于胰腺间质及纤维化区细胞浆和细胞核中,两者明显高于对照组,干预组较模型组明显下调。（6）对照组:α-SMA少量表达在血管壁;模型组及干预组:α-SMA表达在纤维化区域及胰管周围,两者明显高于对照组,干预组较模型组明显下调。5、胰腺组织胶原分布情况对照组于胰腺组织纤维间隔可见少量胶原纤维染色;模型组胰腺组织中可见大量呈蓝色的胶原纤维沉积,小叶间及胰管周边集中,小叶内可见散在的胶原纤维分布,干预组较模型组小叶间及胰管周围胶原纤维沉积均明显减少,小叶内仅见少量胶原纤维沉积.6、RT-PCR（1）激活素mRNA在模型组表达在第1-3周时测不到,4周后逐渐升高,6-7周为最高.（2）内皮素mRNA在模型组表达在第1、4周出现两个高峰.（3）整合素在mRNA在模型组表达逐渐升高,第4周达高峰,随后下调.7、western blot（1）α-SMA在胰腺组织中蛋白表达与对照组比较:模型组、干预组α-SMA表达明显上调;α-SMA在干预组表达较模型组明显下调。（2）JNK在胰腺组织中蛋白表达与正常对照组比较:模型组、干预组JNK表达明显上调;JNK在干预组表达较模型组明显下调。结论1、胆胰管内注射2%TNBS乙醇PBS溶液的方法成功复制慢性胰腺炎的动物模型。2、本方法可反映急性胰腺炎向慢性胰腺炎转化的动态过程,符合人类慢性胰腺炎病情演变的规律。本方法造模后4周,即可满足研究需要。3、激活素、整合素、内皮素可促进慢性胰腺炎发生纤维化过程。4、激活素促慢性胰腺炎胰腺纤维化的作用主要发生在病程的后期,整合素、内皮素促慢性胰腺炎胰腺纤维化的作用主要发生在病程的早、中期。5、汉丹肝乐具有抑制大鼠慢性胰腺炎胰腺纤维化的作用。6、JNK信号传导通路在慢性胰腺炎胰腺纤维化发生过程中起重要作用。7、内皮素、整合素、激活素对PSC的活化、增殖作用可能与JNK信号传导通路的活化有关。8、汉丹肝乐对胰腺纤维化的干预与其减少内皮素、整合素、激活素的生成、抑制JNK信号传导通路的活化有关。
二、急性胰腺炎大鼠胰腺组织中转化生长因子及Ⅰ型胶原变化的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、急性胰腺炎大鼠胰腺组织中转化生长因子及Ⅰ型胶原变化的研究（论文提纲范文）
（1）琥珀酰苯胺异羟肟酸对失血性休克大鼠模型胰腺组织的保护作用（论文提纲范文）
| 附录 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 研究方法 |
| 1.研究材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组和药物制剂 |
| 2.2 动物模型和实验干预方案 |
| 2.3 胰腺组织病理检查 |
| 2.4 湿重/干重比测定 |
| 2.5 Western blot分析 |
| 2.6 统计分析 |
| 结果 |
| 1 实验行图(见图A) |
| 2 大鼠胰腺组织病理评分 |
| 3 大鼠胰腺组织的湿干重比值 |
| 4 MPO的表达及SAHA对其表达的影响 |
| 5 SAHA对组蛋白H4乙酰化的影响 |
| 6 SAHA对炎症因子表达水平的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 组蛋白乙酰化修饰及其治疗胰腺炎的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）基于TRPA1通道探讨理中丸、小建中汤和吴茱萸汤治疗慢性胰腺炎的机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 热敏通道TRPA1的研究进展 |
| 1. TRPA1的生理特性 |
| 2. TRPA1的活化与脱敏 |
| 3. TRPA1与炎症性疼痛的关系 |
| 4. TRPA1和慢性胰腺炎的关系 |
| 5. TRPA1与中医药 |
| 参考文献 |
| 综述二 理中丸、小建中汤、吴茱萸汤在消化系统疾病的临床及实验研究 |
| 1 临床研究 |
| 2 实验研究 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 研究一 理中丸、小建中汤和吴茱萸汤对雨蛙素腹腔注射诱导的CP模型小鼠的影响 |
| 实验一 理中丸、小建中汤和吴茱萸汤对CP模型小鼠疼痛行为学的影响 |
| 1 实验材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 4 讨论 |
| 实验二 三方对CP模型小鼠炎症相关生化、组织病理学的影响 |
| 1. 实验材料与方法 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 结论 |
| 4. 讨论 |
| 研究二 三方对CP模型小鼠胰腺组织中TRPA1、PAR2、cPLA2和EP4表达的影响 |
| 1 实验材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 讨论 |
| 1. 热敏通道TRPA1通道介导的CP炎症和疼痛的病理机制 |
| 2. 理中丸、小建中汤和吴茱萸汤减轻CP的炎症和疼痛的机制 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2.创新点、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（3）大鼠重症急性胰腺炎继发性肝、肺损伤模型的建立及相关炎症因子研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠重症急性胰腺炎继发性肝损伤模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 术前准备及术后处理 |
| 2.3 手术建模方法和步骤 |
| 2.4 指标检测及取材方法 |
| 2.5 取材组织脱水流程 |
| 2.6 HE 染色步骤 |
| 2.7 胰腺病理学评分方法 |
| 2.8 肝组织病理学评分方法 |
| 2.9 统计学处理 |
| 2.10 技术路线图 |
| 结果 |
| 1 实验大鼠一般情况 |
| 1.1 对照组 |
| 1.2 假手术组 |
| 1.3 肝损伤模型组 |
| 2 各组大鼠血清淀粉酶检测值 |
| 3 各组大鼠血液中性粒细胞百分比值 |
| 4 各组大鼠血清 ALT 含量 |
| 5 各组大鼠血清 AST 含量 |
| 6 各组大鼠胰腺组织病理学分析 |
| 7 各组大鼠肝脏组织病理学分析 |
| 8 相关性分析 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 第二部分 大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 术前准备及术后处理 |
| 2.3 手术建模方法和步骤 |
| 2.4 指标检测及取材方法 |
| 2.5 取材组织脱水流程 |
| 2.6 HE 染色步骤 |
| 2.7 BCA 法测定肺灌洗液超微量蛋白含量操作步骤 |
| 2.8 胰腺病理学评分方法 |
| 2.9 肺组织病理学评分方法 |
| 2.10 统计学处理 |
| 2.11 技术路线图 |
| 结果 |
| 1 实验大鼠一般情况 |
| 1.1 对照组 |
| 1.2 假手术组 |
| 1.3 SAP-LI 模型组 |
| 2 各组大鼠血清淀粉酶检测值 |
| 3 各组大鼠血液中性粒细胞百分比值 |
| 4 各组大鼠肺湿干质量比值 |
| 5 各组大鼠肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值 |
| 6 各组大鼠胰腺病理学分析 |
| 7 各组大鼠肺组织病理学分析 |
| 8 相关性分析 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 第三部分 大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤肺组织中 HIF-1α、iNOS、NO、MDA、MPO 变化的研究 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 术前准备及术后处理 |
| 2.3 手术建模方法和步骤 |
| 2.4 指标检测及取材方法 |
| 2.5 取材组织脱水流程 |
| 2.6 HE 染色步骤 |
| 2.7 BCA 法测定肺灌洗液超微量蛋白含量操作步骤 |
| 2.8 10%肺组织匀浆的制备 |
| 2.9 BCA 法测定组织超微量蛋白含量操作步骤 |
| 2.10 一氧化氮试剂盒（硝酸还原酶法）操作步骤 |
| 2.11 组织髓过氧化物酶（MPO）测试操作步骤 |
| 2.12 组织匀浆丙二醛（MDA）测定步骤 |
| 2.13 HIF RNA 荧光定量 PCR 相对表达量的测定步骤 |
| 2.14 iNOS mRNA 荧光定量 PCR 相对表达量的测定步骤 |
| 2.15 β-action mRNA 荧光定量 PCR 相对表达量的测定步骤 |
| 2.16 肺组织病理学评分方法 |
| 2.17 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 各组大鼠肺湿干质量比值 |
| 2 各组大鼠肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值 |
| 2.1 各组大鼠肺组织病理学分析 |
| 2.2 各组大鼠肺组织 NO 含量 |
| 2.3 各组大鼠肺组织 MPO 活力 |
| 2.4 各组大鼠肺组织 MDA 含量 |
| 2.5 各组大鼠肺组织 HIF mRNA 相对表达量 |
| 2.6 各组大鼠肺组织 iNOS mRNA 相对表达量 |
| 2.7 相关性分析 |
| 2.8 技术路线图 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师评阅表 |
（4）急性胰腺炎时自噬变化的意义及干扰素γ对自噬影响的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一部分 重症急性胰腺炎大鼠模型的建立 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分自噬在急性胰腺炎时的变化及其意义 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 急性胰腺炎时 IFNγ对自噬的影响及病理意义 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 综述 |
| 综述 1 |
| 综述 2 |
| 参考文献 |
| 在读期间参加学术会议情况 |
| 在读期间工作情况 |
| 发表论文 |
| 致谢 |
（5）花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的作用及其机制探讨（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 静脉注射花姜酮治疗重症急性胰腺炎大鼠的量效关系 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图一 |
| 参考文献 |
| 第二部分 花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的作用 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图二 |
| 参考文献 |
| 第三部分 花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤保护作用的机制探讨 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图三 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 攻博期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）聚腺苷二磷酸核糖聚合酶在重症急性胰腺炎肾上腺损伤中的作用及机制（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 目录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 聚腺苷二碳酸核糖聚合酶在重症急性胰腺炎大鼠肾上腺损伤的表达及作用研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 第二部分 PARP抑制剂3-AB干预大鼠重症急性胰腺炎量效关系的探讨 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 第三部分 PARP抑制剂对重症急性胰腺炎肾上腺损伤的保护机制研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻博期间的科研成果 |
| 后记 |
（7）激活素整合素内皮素在慢性胰腺炎胰腺纤维化机制中的作用及其对策的研究（论文提纲范文）
| 一、摘要 |
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 二、英文缩略语 |
| 三、论文 |
| 论文一 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 论文二 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 论文三 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 四、本研究创新性的自我评价 |
| 五、参考文献 |
| 六、附录 |
| 综述 |
| 在校期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、急性胰腺炎大鼠胰腺组织中转化生长因子及Ⅰ型胶原变化的研究（论文参考文献）
- [1]琥珀酰苯胺异羟肟酸对失血性休克大鼠模型胰腺组织的保护作用[D]. 张家伟. 福建医科大学, 2021(02)
- [2]基于TRPA1通道探讨理中丸、小建中汤和吴茱萸汤治疗慢性胰腺炎的机制[D]. 殷茵. 北京中医药大学, 2020(04)
- [3]大鼠重症急性胰腺炎继发性肝、肺损伤模型的建立及相关炎症因子研究[D]. 王皓. 石河子大学, 2013(04)
- [4]急性胰腺炎时自噬变化的意义及干扰素γ对自噬影响的实验研究[D]. 刘晓. 第二军医大学, 2013(05)
- [5]花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的作用及其机制探讨[D]. 邓文宏. 武汉大学, 2013(10)
- [6]聚腺苷二磷酸核糖聚合酶在重症急性胰腺炎肾上腺损伤中的作用及机制[D]. 余佳. 武汉大学, 2012(06)
- [7]激活素整合素内皮素在慢性胰腺炎胰腺纤维化机制中的作用及其对策的研究[D]. 张俊东. 中国医科大学, 2009(10)