广西玉林市第二人民医院玉林市玉州区医院 537000
【摘 要】目的 分析骨髓增殖性疾病（MPD）诊断综合性分析的意义。方法 选取2015年7月-2016年7月收治的60例外周血细胞数量增高患者以定量荧光PCR检测及骨髓细胞检查设为观察组，取同期健康检查者60例为对照组，观察JAK2基因检测中V617F点突变情况并比较两组阳性检测率。结果 对照组JAK2 V617F基因突变阳性检出率0.00%低于观察组的76.67%，阴性检出率100.00%高于观察组的23.33%（P＜0.05）。结论 定量荧光PCR检测分析骨髓增殖疾病可有效检出JAK2 V617F基因突变情况。
【关键词】MPD；诊断；荧光PCR
[Abstract] objective analysis of myeloproliferative disorders（MPD）diagnostic comprehensive analysis significance.Methods from July 2015 -2016 year in July from 60 the number of peripheral blood cells increased in patients with fluorescence quantitative PCR detection of bone marrow cells and examination as observation group，From the same health examination in 60 cases as control group，to observe the V617F point mutation detection of JAK2 gene and the positive detection rate was compared between two groups.The control group JAK2 V617F mutation positive rate is 0% lower than that of the observation group was 76.67%，the negative rate is 100% higher than that of the observation group 23.33%（P 0.05）.Conclusion the detection of V617F JAK2 gene mutation can be effectively detected by quantitative fluorescence PCR detection and analysis of bone marrow proliferation disease.
[Key words] MPD；diagnosis；fluorescence PCR
骨髓增殖性疾病（MPD）是指由骨髓细胞增殖引发的疾病，其症状多为外周血多系血细胞增生，并伴随淋巴结、肝、脾肿大，严重者可诱发急性白血病，威胁患者生命健康[1-2]。JAK2是指MPD疾病存在的获得性突变基因，临床将其第1849位处密码子从G变为T后，产生的JAK2激酶第617位的缬氨酸（V）由苯丙氨酸（F）替代后称为JAK2 V617F。目前，临床检验其病理多以定时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测为主，可有效检出患者JAK2基因中V617F突变情况。本研究现就取得的检测结果做有效分析，并报告如下。
1.资料与方法
1.1 临床资料 选取2015年7月-2016年7月收治的60例外周血细胞增高患者资料设为观察组，纳入经临床检验符合骨髓增殖疾病诊断标准：血小板、红细胞、白细胞水平增高及骨髓纤维化者；排除心肝肾脏障碍、精神障碍、凝血障碍及其他心脑血管病者。取同期60例健康体检者设为对照组。对照组男女比例37：23，年龄11-81岁，平均年龄（46.23±3.69）岁；文化程度：初中及以下22例、高中及以上38例；观察组男女比例35：25，年龄10-82岁，平均年龄（46.45±3.81）岁；文化程度：初中及以下24例、高中及以上36例。两组基线资料未显示高度差异（P＜0.05）。
1.2 方法 所有检测者均取外周血或骨髓液2ml，以乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝，随后制作骨髓涂片数张。操作：①DNA提取，以紫外分光测量计检测标本中DNA浓度并调整为50-100ng/μL（正常浓度为25-250ng/μL）；②突变检测：以NCBI下载JAK2 序列，依据第14外显子制作正反引物各1条，突变型、野生型探针均1条，于FAM、VIC标记处以双蒸水稀释后探针检测，试剂依照说明书配出20μL PCR反应扩增体系后注入2μL于模板中混匀离心，然后以PCR仪器实时检测V617F点突变情况，60℃下 1min收集信号，阳性对照取阳性质粒，空白用双蒸水，扩增后进行PCR分析。
1.3 统计方法 数据均以SPSS 20.0的统计软件分析，正态计量资料以“±s”表示，两组正态计量数据的组间比较采用检验；计数用例数（）表示，计数资料组间率（%）的比较采用检验。P＜0.05为差异具统计意义。
2.结果
2.1 观察组各疾病JAK2基因突变情况 PV突变率为91.67%、ET 65.22%、PMF 69.23%，红细胞、血小板继发性增多及骨髓继发性纤维化均未有V617F点突变发生。
3.讨论
MPD是一种源于机体造血干细胞引发的克隆性骨髓疾病，临床将其分为真性红细胞、原发性血小板增多，粒细胞慢性白血病和骨髓原发性纤维化。大量研究表示[3]，MPD患者多存在不同程度JAK2 V617F基因突变，而其突变位点常为1849位，是胸腺嘧啶代替鸟苷酸造成，因而此突变情况可作为造血因子信号传导检测的关键性指标。本研究现就荧光PCR检测在不同程度JAK2基因V617F突变患者诊断中取得的疗效做有效分析，以期为临床治疗探究提供循证依据。上述结果中观察组患者PV检出突变率为91.67%、ET突变率65.22%、PMF突变率69.23%，且红细胞、血小板继发性增多和骨髓继发性纤维化均未检出突变点；其次，观察组突变阳性检出率76.67%，对照组则为0；阴性检出率23.33%，对照组为100%；由此证实PCR检测可有效检出MPD患者 V617F点基因突变情况，为临床诊断提供有效辅助数据，此结果与周萍文献中研究结果相似[4]。PCR荧光定量是分子检测的常用方法，其检测敏感性及可操作性较普通PCR检测率高，可弥补电泳凝胶诊断中非特异类扩增现象发生的缺点，同时可控制突变性及野生型基因Ct值在8以内，降低比值落差；此外，MPD患者外周血多存在少量的克隆株突变情况发生，但不同检测方法敏感性均存在一定差异，而采用荧光定量实时PCR检测JAK2 V617F基因突变比例约为10%-100%，可快速检出V617F点突变[5]。
综上所述，实时定量荧光PCR检测可有效检测JAK2 V617F基因突变情况，能有效辅助MPD患者病理诊断，为临床治疗效果探究提供有效参考依据。
参考文献：
[1]李丽梅，金阿荣，阿茹娜，等.JAK2 V617基因突变在骨髓增殖性疾病中的表达及临床意义[J].内蒙古医学杂志，2014，47（2）：140-142.
[2]李业华，刘敏，黄彬，等.JAK2 V617F基因突变的定量测定及在慢性骨髓增殖性疾病中的应用[J].国际检验医学杂志，2014，35（16）：2132-2133.
[3]邱立丹.JAK2 V617F基因突变在骨髓增殖性疾病中的表达及临床意义[J].中国现代药物应用，2015，9（21）：34-35.
[4]周萍，唐吉斌，焦瑞宝，等.骨髓增殖性疾病诊断综合分析的意义[J].检验医学，2015，30（1）：26-30.
[5]徐修才，伍权，郑南，等.常见JAK2基因突变的筛检及在BCR-ABL阴性骨髓增殖病中的临床意义[J].中国实验诊断学，2014，18（4）：557-560.
论文作者:唐礼新
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2016年6月第14期
论文发表时间:2016/11/23
标签：突变论文; 骨髓论文; 检出论文; 基因突变论文; 荧光论文; 患者论文; 定量论文; 《中国医学人文》(学术版)2016年6月第14期论文;