湖南中医药大学第二附属医院 湖南长沙 410000
【摘 要】目的：分析桑白皮蜜炙前后醋酸乙酯提取物指纹图谱，探究其在高效液相色谱指纹图谱中的差异性。方法：采用高效液相色谱仪、色谱柱等对试验的精密度、重复性和稳定性进行分析，并对10批桑白皮与10批蜜桑白皮乙酸乙酯提取物相似度进行探索。结果：本次试验具有良好的精密度、良好的方法重复性，且供试品溶液在24h内比较稳定；桑白皮密炙前后乙酸乙酯提取物的指纹图谱相似度基本上处于0.915-0.991之间，表示桑白皮在密炙前后具有较小的差异性；同一产地供试样品生产日期及生产批次不同的情况下，桑白皮与蜜桑白皮乙酸乙酯提取物的指纹图谱相似度处于0.231-0.913之间，代表具有较大差异性。结论：桑白皮密炙前后质量差异较小，但相同产地的市售桑白皮与蜜桑白皮质量存在较大差异。
【关键词】桑白皮；醋酸乙酯提取物；指纹图谱
桑白皮为桑科植物桑的干燥根皮，具有良好的利尿消肿与泻肺平喘的功效[1]。本次研究的主要目的在于分析桑白皮蜜炙前后醋酸乙酯提取物指纹图谱，探究其在高效液相色谱指纹图谱中的质量差异性，希望能够为桑白皮密炙机制的研究提供更加丰富的理论与实践支撑。
1 材料与方法
1.1实验材料与仪器
1.1.1供试药材
本次研究所选取的实验材料为桑科植物桑干燥根皮，样品来源如表1所述：
1.1.2实验仪器与材料
高效液相色谱仪型号为Waters2965；二极管阵列检测器型号为Waters2996；色谱柱为Thermo ODS-2 Hypersil；桑苷A对照品为CPE泽朗植提，批号为120405；东莨菪内酯对照品为中国药品生物制品检定所生产，批号为110768-200504；乙腈为美国天地公司生产，批号为0131512。
1.2研究方法
对供试药材进行溶液制备：
首先进行样品溶液制备，选取4g样品粗粉进行精密称定，采用定性滤纸向其包好并置于索氏提取器中，加入200ml乙酸乙酯并提取2h，趁热将提取液过滤且回收溶剂。采用甲醇进行溶解，将提取液定容至2ml，而后采用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，此时所产生的续滤液便作为供试药品的样品溶液。
其次进行对照品溶液的制备。第一，桑苷A对照品溶液的制备，精密称取5.08mg该药品并采用甲醇溶液将其溶解至25ml的容量瓶内，在定容至刻度后进行摇匀将其作为母液。精确提取0.5ml母液采用甲醇稀释并且将其定容为2ml，获得25μg?ml-1浓度的桑苷A对照品溶液。第二，东莨菪内酯对照品溶液的制备，精密称取4.84mg的该药品并采用甲醇溶液将其溶解至25ml的容量瓶内，在定容至刻度后摇将其作为母液。精确提取0.5ml母液采用甲醇稀释并且将其定容为5ml，获得19.36μg?ml-1浓度的东莨菪内酯对照品溶液。
色谱条件为：色谱柱为Thermo ODS－2 HYPERSIL（250mm×4.6mm，5μm）；柱温为30℃；检测波长为340nm；进样体积为10μl。
对照品峰的标定：依照标准方法对对照品溶液及样品溶液色谱图进行记录，确认样品溶液中两个成分。
精密度试验：选取同一供试品溶液连续6次进样，对色谱图进行记录。
重复性试验：选取同一批药材按照标准方法制备5份供试品溶液并分别进样，对色谱图进行记录。
稳定性试验：选取同一供试品溶液在不同时间点进样，即在0h、2h、4h、8h、12h和24h进样并记录色谱图。
桑白皮与蜜桑白皮的高效液相色谱仪指纹图谱比较：采用中药色谱指纹图谱相似评价软件对本次研究所选取的供试药材乙酸乙酯提取物指纹图谱分别进行相似度比较。
2 结果
2.1精密度、重复性和稳定性试验结果
精密度、重复性和稳定性的试验结果均显示：各共有峰的相对峰面积与保留实践的RSD均＜3%，表示具有良好的精密度、良好的方法重复性，且供试品溶液在24h内比较稳定。
2.2桑白皮与蜜桑白皮的高效液相色谱仪指纹图谱比较结果
桑白皮密炙前后乙酸乙酯提取物的指纹图谱相似度基本上处于0.915-0.991之间，表示桑白皮在密炙前后具有较小的差异性。但是，同一产地供试样品生产日期及生产批次不同的情况下，桑白皮与蜜桑白皮乙酸乙酯提取物的指纹图谱相似度处于0.231-0.913之间，代表具有较大差异性。表2为10批桑白皮与10批蜜桑白皮乙酸乙酯提取物相似度计算结果：
3 讨论
本次研究发现，桑白皮在密炙前后具有较小的差异性，同一产地供试样品生产日期及生产批次不同的情况下，桑白皮与蜜桑白皮差异性较大，产生该种情况的主要原因可能在于密炙程度存在差异性。鉴于此，对于桑白皮的密炙工艺需要进一步规范，由此将能够对饮片的质量具有良好的稳定作用[2-3]。
另外，虽然本次研究发现桑白皮密炙前后的各共有峰的相对峰面积与保留实践的RSD均＜3%，表示具有良好的精密度、良好的方法重复性，且供试品溶液在24h内比较稳定。但是，在桑白皮密炙后极有可能产生化学成本含量的改变，需要从宏观的角度把握，确保全国不同产地桑白皮密炙前后的质量[4-5]。
参考文献：
[1]池婕，林兵，刘志宏，等.雷公藤制剂指纹图谱及谱效关系研究[J].中国中药杂志，2015，08（03）：1479-1483.
[2]郑晓芬，陈磊，秦雪梅，等.基于1H-NMR指纹图谱研究逍遥散乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗抑郁谱效关系[J].世界科学技术-中医药现代化，2015，03（10）：563-568.
[3]杨海玲，张振凌.桔梗蜜炙前后指纹图谱的比较研究[J].海峡药学，2015，08（07）：26-28.
[4]张会敏，李群.桑白皮蜜炙前后总黄酮高效液相色谱纹图谱研究[J].时珍国医国药，2015，10（05）：2402-2404.
[5]李群，张会敏.桑白皮蜜炙前后水提液指纹图谱对比研究[J].时珍国医国药，2014，06（02）：1380-1382.
论文作者:郑集元,谭枚秀
论文发表刊物:《中国蒙医药》2017年2月第2期
论文发表时间:2017/3/17
标签：桑白皮论文; 乙酸乙酯论文; 溶液论文; 图谱论文; 指纹论文; 色谱论文; 提取物论文; 《中国蒙医药》2017年2月第2期论文;