（湖南省职业病防治院 湖南长沙 410007）
摘要：目的 研究分析透明质酸钠对SD大鼠致畸敏感期的毒性。方法 将130只妊娠期大鼠随机分为五组，三种不同剂量的透明质酸钠为研究组，以及两组对照组，阳性对照组（250mg/kg的阿司匹林），阴性对照组（去离子水），每组不少于11只，在大鼠妊娠的第7~16天，将实验药物持续经口灌胃十天，每天进行一次，在大鼠妊娠的第二十天将老鼠处死，取出胎鼠，对胎仔以及胚胎的发育指标进行检测，同时还要检查胎鼠的内脏、外观以及骨骼有没有畸形的现象出现。结果 不同剂量透明质酸钠组孕鼠的子宫连胎质量、活胎率、体质量以及死胎率，并且胎鼠的身长、体质量以及尾长与对照组相比，无明显差异，也没有发现胎鼠的内脏、外观以及骨骼有畸形的现象出现。结论 不同剂量的透明质酸钠对SD大鼠没有母体毒性，对胎鼠也没有致畸毒性。
关键词：SD大鼠；透明质酸钠；毒性实验；致畸敏感期
在人体内以及动物的体内都广泛分布着透明质酸钠，它是组成细胞外基质的重要成分，并具有独特的保水功能以及粘弹性，还有调节渗透压、润滑等作用，可以保护体内的正常细胞不会受到自由基以及有毒物质的侵害，同时还能调节细胞的分化以及增生等，目前在化妆品、整形美容以及医药等行业都有着较为广泛的使用，还有相关研究证明了口服透明质酸的功效，但是目前对透明质酸钠在生殖发育毒性方面的研究还比较少，考虑使用透明质酸钠的人群多为育龄期的女性[1]，因此在本次实验中研究了透明质酸的致畸毒性，具体情况如下。
1.资料与方法
1.1受试物
本次实验中使用纯度为99%的透明质酸钠，为白色粉末，是由华熙福瑞达生物医药有限公司提供的。根据推荐的成人每天口服量为200mg，假设成人的体质量为120g来计算，将每日剂量折合为3.33mg/kg。
1.2实验动物以及环境
选取130只健康的SD大鼠，其中没有交配过的性成熟雌性大鼠80只，体质量为230~290g，雄性大鼠50只，体质量为270~350g，SD大鼠购于南京鹏晟生物科技发展有限公司，实验室的温度控制在23~26℃，湿度控制在54%~71%。
1.3选择受试剂量和实验分组
按照推荐的100、200以及400倍人体剂量，分别设置333mg/kg、667mg/kg以及1333mg/kg三个剂量组，并且还要分设阳性对照组以及阴性对照组，每组不少于11只孕鼠，采用去离子水为溶剂将样品配置成浓度为33.3mg/ml、66.7mg/ml、以及133.3mg/ml的溶液，阳性对照组采用阿司匹林水溶液（250mg/ml），阴性对照组采用去离子水，按照0.01ml/g的体积对SD大鼠进行分别灌胃[2]。
1.4仪器与试剂
仪器使用解剖显微镜，Aquaplus纯水仪以及游标卡尺等；试剂：阿司匹林（生产厂家：汕头金石制药总厂有限公司，批准文号：国药准字H44021505），氢氧化钾、茜素红、乙醇、甘油以及苦味酸都是国产分析纯。
1.5实验的方法
每天晚上十点将雄鼠与雌鼠按照1：1或者是2：1的比例放在同一个笼子例进行交配，第二天早上对雌鼠进行阴道涂片检查，若发现精子则视为受孕。将受孕的雌鼠称得体质量之后进行随机分组，受孕当天记为0天，在第七天的时候再次称取孕鼠的体重量，并开始将受试物经口灌胃，每天进行一次，一直持续到雌鼠怀孕的第16天，一共进行10次灌胃，在第20天的时候将孕鼠处死，取出胎鼠，同时对胎鼠的生长发育、存活以及畸形情况进行记录和观察，接着按照3：2的比例将胎鼠分成两部分，其中一部分使用95%的乙醇溶液将胎鼠固定两周，之后对胎鼠进行透明以及染色处理之后观察胎鼠的发育状况，另外一部分使用Bouins液固定胎鼠两周，之后进行切片观察胎鼠的内脏发育状况[3]。
1.6统计学方法
将本次研究中的数据采用SPSS20.0统计学软件进行分析处理，计数资料采用x2检验，剂量资料采用t检验。
2、结果
2.1透明质酸钠对孕鼠体质量增加的影响
在本次研究中，不同剂量的透明质酸钠孕鼠的体质量以及总体体重增加和阴性对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05），说明透明质酸钠不会对孕鼠的体质量增加产生明显的影响，而阳性对照组的体质量要小于其他组，阳性对照组在第二十天的体质量以及总体体重增都明显低于阴性对照组，差异具有统计学意义（P<0.05），具体情况见表1，
表1 每组孕鼠体质量的变化比较（n=12）
3、讨论
在1934年美国哥伦比亚大学的一位眼科教授在牛眼玻璃体中分离出了透明质酸钠，其有着调节血管壁通透性、促进伤口愈合、润滑关节以及调节蛋白质等作用，并且其拥有特殊的保水功能，是目前在自然界中发现的保湿性最好的物质，被誉为是最理想的天然保湿因子，目前越来越受女性消费者的欢迎，不过在目前的研究中，主要注重的是对其保健功效进行研究，很少有对其生殖发育毒性进行相关的研究。[4]
致畸敏感期又被称为是关键期以及危险期等，其是指在受精卵着床后胎儿器官的开始发生以及形成，在此期间细胞的分化以及分裂比较旺盛，调控以及发育基因表达频繁，所以对于外源性因素的致畸作用非常敏感。一般情况下是选择动物的致畸敏感期来染毒进行致畸试验，此种试验既可以检测到受试物的致畸性，还能检查受试物导致胎仔、胚胎的死亡情况以及生长发育迟缓的情况，这也是目前最可靠的实验方法[5]。在本次研究中选择了SD大鼠进行致畸试验，实验结果表明，不同剂量的透明质酸对于孕鼠母体均无毒性，胎仔与胚胎的发育情况也没有发现异常，对胎鼠的四肢、躯干、尾部以及头部等外观进行检查均没有发现异常，检查胎鼠的内脏发育情况也未见异常情况，研究组和阴性对照组都出现了胸骨缺失现象，但是两组之间的比较，差异无统计学意义，这说明胸骨缺失是自发现象。
综上所述，不同剂量的透明质酸钠对SD大鼠没有母体毒性，对胎鼠也没有致畸毒性。
参考文献
[1]王宗尉，肖佳音，李庆忠. 医用透明质酸钠修复贴的生物学试验[J]. 哈尔滨医药，2016，36（2）：142-143.
[2]雷尚芳，白娜，鲍升娟，等. 丹参酮Ⅱ_A磺酸钠治疗先天性人巨细胞病毒性肝炎小鼠的实验研究[J]. 实用药物与临床，2016，19（1）：10-13.
[3]刘莉莉，骆红宇，施燕平，等. 医用透明质酸钠凝胶中钨含量的分析研究及其安全性评价[J]. 生物医学工程研究，2017，36（2）：183-186.
[4]别连钰，蒋茹，马宁，等. 透明质酸钠与软骨下钻孔对兔软骨损伤修复的对比试验[J]. 中国畜牧兽医，2018，45（2）：349-357.
[5]彭亮，傅伟忠，王彦武，等. 透明质酸钠对SD大鼠致畸敏感期的毒性试验[J]. 癌变·畸变·突变，2011，23（5）：380-383.
论文作者:马新群
论文发表刊物:《航空军医》2018年11期
论文发表时间:2018/8/23
标签：透明质酸论文; 毒性论文; 剂量论文; 大鼠论文; 对照组论文; 体质论文; 致畸论文; 《航空军医》2018年11期论文;