董世娟[1]2004年在《我国片形吸虫核糖体DNA及线粒体DNA多态性的研究》文中研究指明本文对来自我国广西、四川、贵州、江苏、甘肃、黑龙江等省的不同宿主的76株片形吸虫进行核糖体DNA和线粒体DNA多态性的研究，用法国的肝片吸虫做对照样本，并将测序结果与GenBank~(TM)中已发表的片形吸虫DNA序列进行比较，旨在从基因水平上明确我国片形吸虫的遗传变异水平。 根据Huang等发表的片形吸虫核糖体DNA(rDNA)的第二内转录间隔区(ITS-2)序列，设计两对特异性引物，优化PCR反应条件，建立特异PCR方法来鉴别片形吸虫的种类，并评价此方法的特异性和敏感性。结果76株片形吸虫经特异PCR鉴定被分为叁“类”，即肝片吸虫、大片吸虫和两个虫种的“中间型”，而且叁“类”代表性样品ITS-2部分片段的测序结果也证实了上述结论；此方法与寄生于牛或羊的其它虫体如前后盘吸虫、胰阔盘吸虫、日本分体吸虫、牛弓首蛔虫无交叉反应性；能检测到的大片吸虫最低DNA量是350pg，能检测到的肝片吸虫最低DNA量是110pg。 选择经特异PCR方法鉴定的叁“类”片形吸虫的代表性样品36株，参照基因库已发表的肝片吸虫第一内转录间隔区(ITS-1)序列设计一对保守引物，首先扩增出ITS-1部分序列，再经单链构象多态性(SSCP)分析方法进行分析，结果SSCP显示叁种带型，第一种为大片吸虫的带型，第二种为肝片吸虫带型，第叁种为两种带形的混合带型。对代表性样品的ITS-1进行测序，结果ITS-1全长为422bp，共有5个变异位点；根据ITS-1序 广西大学硕十论文我国片形吸虫核糖体DNA及线粒体DNA多态性的研究列变异位点可区分出两种片形吸虫;表现为混合带型的样品在变异位点具有肝片吸虫和大片吸虫的碱基重迭现象。此结果和特异pCR方法鉴定的结果相互支持，表明!Ts一1片段亦可作为遗传标记来研究片形吸虫的多态性。 在研究核糖体DNA的基础上，对76株片形吸虫线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基1基因部分序列(pcoxl)和线粒体NAOH脱氢酶亚单位1基因部分序列(pnadl)进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(SSCP)分析。结果76株虫体均成功地扩增出约450bp的peoxl基因片段和约200bp的pna引基因片段;SSCP分析显示出不同地区或同一地区的不同样品在p coxl和pna川的SSCP带型上均存在多态性:将18个代表性样品的p coxl基因和11个代表性样品的pna川基因分另lJ进行测序，测序结果显示我国片形吸虫Pcoxl序列和pnadl序歹IJ种间差异均大于种内变异，且两段基因的遗传图谱相似，样品的分类情况相同。除了南京「hNJG4和甘肃「hGSGI两个样品外，经特异PCR鉴定为“中间型”的样品的p coxl和pna川序歹Ij全部和大片吸虫的相应序列相似性高，这个结果和韩国、日本片形吸虫的研究结果相似，提示大片吸虫有可能是“中间型”片形吸虫的母性祖先。 本项目通过对我国片形吸虫核糖体DNA和线粒体DNA多态性的研究，阐明了我国片形吸虫的遗传变异水平。特异P保方法敏感性好高、特异性好，为片形吸虫的分子流行病学调查、片形吸虫的分类学及种群遗传结构研究奠定了基础。
刘伟[2]2006年在《湖南省日本血吸虫DNA多态性的研究》文中研究说明对湖南省日本血吸虫DNA多态性进行研究，旨在阐明湖南省日本血吸虫种内的遗传变异，为进一步的分子遗传学和分子诊断学研究奠定基础。采用PCR扩增、克隆、测序和序列分析等方法对湖南省日本血吸虫核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)序列、线粒体(mtDNA)NADH脱氢酶亚单位Ⅳ基因(nad4)和细胞色素c氧化酶笫Ⅰ亚基(cox1)序列的多态性进行研究。结果表明：1．首次在国内报道湖南省长沙及岳阳钱粮湖农场日本血吸虫ITS序列，其中日本血吸虫ITS-1全序列的报道是国际上首次。与GenBanK中收录的日本血吸虫部分ITS-1及ITS-2全序列做比较，发现它们之间有一定差异。2．nad4基因序列的PCR扩增引物是作者根据GenBanK中收录的日本血吸虫与肝片吸虫的nad4基因序列设计的一对兼并引物，扩增片段为500bp左右。日本血吸虫nad4基因序列的报道在国内是首次。不同的代表性样品nad4序列差异明显，碱基差异在1.0％～2.9％之间。3．cox1基因序列分析表明，采自湖南岳阳君山、岳阳汨罗的样品cox1序列之间有一定差异，碱基差异在0.2％～1.2％之间。 本研究证明了ITS、nad4及cox1叁段序列确为理想的种内变异研究的遗传标记，研究结果有助于日本血吸虫的生活史、传播途径、流行病学、种群遗传学的研究和其相关疾病的诊断。
参考文献：
[1]. 我国片形吸虫核糖体DNA及线粒体DNA多态性的研究[D]. 董世娟. 广西大学. 2004
[2]. 湖南省日本血吸虫DNA多态性的研究[D]. 刘伟. 湖南农业大学. 2006
标签：畜牧与动物医学论文; 线粒体论文; 日本血吸虫论文; 多态性论文; its序列论文; dna论文; 科普论文; 线粒体dna论文; dna序列论文;