丁佳臣 何小敏（通讯作者） 何小峰
（泰兴市人民医院感染科 江苏 泰兴 225400）
【摘要】 目的:探讨结核感染T 细胞斑点试验(T-SPOT.TB) 、抗结核抗体在肺结核患者中的临床价值。方法:对泰兴市人民医院127例肺结核进行回顾性分析，用抗酸染色法查抗酸分支杆菌，利用T-SOPT.TB检测结核感染T细胞，金标法检测抗结核抗体。结果：共127例肺结核患者中痰涂片阳性患者68例(51%)，痰涂片阴性者59例(49%)，结核感染T细胞阳性的97例(76.3%)，其中菌阳患者中阳性57例(84%),菌阴患者中阳性40例(68%)。抗结核抗体阳性者103例(81%)，菌阳患者中阳性60例(88%),菌阴患者阳性43(73%)。结论：结核感染T细胞检测、抗结核抗体在结核患者中有较高的敏感性，菌阳患者中阳性率较菌阴患者高。
【关键词】 肺结核；痰涂片；抗结核抗体；T-SPOT.TB
【中图分类号】R521 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）23-0101-02
近年来随着环境污染的越来越严重特别是空气质量下降，新发肺结核患者有明显的增加，同时每年全球死于肺结核的患者为200到300万，如何快速准确的诊断活动性结核患者从而及时给予正规的治疗变得越来越重要。传统的抗酸杆菌涂片敏感性不高，报道发现血结核抗体的敏感性和特异性较高[1-2]。近期的γ干扰素释放试验，这类试验采用ELISPOT( 酶联免疫斑点) 方法定量检测全血/外周血单核细胞在结核菌特异性抗原刺激下释放γ干扰素的水平，用于诊断潜伏性结核分枝杆菌感染以及结核病，有较高的特异性和敏感性。
本研究对肺结核患者中痰涂片、TSPOT.TB和抗结核抗体三种检测方法在进行对比研究，现报告如下。
1.资料与方法
1.1 基本资料
对我院2013年4月～2015年4月在我院就诊的肺结核患者，包括肯定肺结核病：结核杆菌培养阳性(金标准)或痰检抗酸杆菌阳性；很可能肺结核病：结核杆菌检查阴性或无痰，但临床表现、影像学或病理组织学检查支持肺结核，且抗结核药物治疗有效，收集资料较为齐全的患者共127例，其中男105例，女22例，平均年龄55.5岁。
1.2方法：
1.2.1痰涂片：清晨收集脓性痰，进行抗酸杆菌染色，在显微镜下观察染色结果，以每100个视野抗酸杆菌超过3个为阳性。
1.2.2 T-SPOT.TB：T-SPOT.TB试剂盒（上海复星科技有限公司提供）。肝素抗凝管采集8 mL外周静脉血，离心分离外周血单核细胞（PBMC）。于显微镜下计数细胞数，配置每100微升含有25万细胞的标准溶液。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆取出T-SPOT.TB试剂盒内微板孔，阴性对照加入细胞培养液，阳性对照加入植物血凝素，另外两孔分别加入抗原A（ESAT-6）和抗原B（CFP-10）各50μL，然后每孔加入100μL含有PCMC的上述细胞悬液，置于CO2 培养箱37℃温度孵育16～20 h，用pH值6.8～7.2 的PBS液洗脱，加入碱性磷酸酶标记的抗IFN-γ单克隆抗体50μL，4℃孵育2 h，再用PBS液洗脱，每空加入显色液50μL。避光室温静置7 min，蒸馏水冲洗后观察结果，用放大镜人工计数每空斑点数。阳性结果定义为：当阴性对照孔点数为0～5时，测量孔点数减去对照孔点数≥6，当阴性对照孔点数≥6时，测量孔点数≥两倍对照孔点数。
1.2.3抗结核抗体：采用胶体金法，利用斑点免疫胶体金渗滤技术(DIGFA)原理，检测结核分支杆菌抗体，结核分支杆菌抗体试剂盒(胶体金法)由上海奥普生物医药有限公司提供。所有操作步骤及结果判定严格按照参考说明书和报告进行。
1.3 统计学处理
本研究所得数据均由SPSS 16.0软件进行统计学处理，计量资料用均数±标准差表示，采用T检验，计数资料采用卡方检验，P＜0.05为有差异，有统计学意义。
2.结果
127例肺结核患者中，痰涂片阳性患者68例(51%)，痰涂片阴性者59例(49%)，其中T-SPOT检测单一抗A阳性84例，单一抗B阳性73例，抗A、抗B均阳性的60例，两种抗原任意一种为阳性即判断结核感染T细胞阳性的97例(76.3%)，两种抗原均阴性的即判断为阴性的30例。抗结核抗体阳性者103例(81%)。
2.1 菌阳、菌阴肺结核的结核感染T细胞的结果见表1，菌阳肺结核患者的结核感染T细胞的阳性率高于菌阴肺结核。P<0.05，有统计学意义。
表1
痰涂片例数结核感染T阳性结核感染T阴性
阳性6857(84%)11(16%)
阴性5940(68%)19(32%)
2.2 菌阳、菌阴肺结核的抗结核抗体的结果见表2，菌阳肺结核的抗结核抗体阳性率高于菌阴肺结核。P<0.05，有统计学意义。
表2
痰涂片例数抗结核抗体阳性抗结核抗体阴性
阳性6860(88%)8(12%)
阴性5943(73%)16(27%)
3.讨论
痰涂片抗酸染色法是结核杆菌细菌学检查的常用方法，通常阳性即诊断为肺结核，既往研究认为清晨痰阳性率最高，但结核患者的典型临床表现为刺激性干咳，痰少甚至无痰，加上有时留取标本方法不当，痰涂片的阳性率得不到提升[3]，临床上在菌阴肺结核的诊断通常需要其他的相关诊断指标，抗结核抗体、结核感染T细胞检测在其中有较高的临床价值。
本回顾分析结果表示抗结核抗体在肺结核诊断中的阳性率73.2%，与相关报道一致[4]。国内及国际学者以CFP-10和EAST-6混合抗原多肽为刺激原刺激记忆性T细胞，使其分泌IFN-γ，检测细胞数，从而发现诊断结核感染的T-SPOT.TB这一方法。本回顾分析结果表示结核感染T细胞在肺结核诊断中的阳性率84%，与报道相符合[5-6]。
抗结核抗体、T-SPOT的敏感性均高于痰涂片，对痰涂片阴性的肺结核患者，检测抗结核抗体，T-SPOT可及时发现肺结核，避免漏诊。同时本研究发现在痰涂片阳性的患者中两种检测方法的阳性率高于痰涂片阴性的肺结核，提示在痰涂片阴性的肺结核患者有部分患者可能有一定的误诊率，建议临床工作中有肺部病变，X线片考虑结核的患者，当痰涂片阴性、抗结核抗体阴性，T-SOPT阴性时，须进行更多的分析，寻找更多的依据，避免误诊。
【参考文献】
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论文作者:丁佳臣,何小敏（通讯作者）,何小峰
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第23期供稿
论文发表时间:2015/10/14
标签：肺结核论文; 涂片论文; 结核论文; 阳性论文; 抗体论文; 阴性论文; 患者论文; 《医药前沿》2015年第23期供稿论文;