（成都市食品药品检验研究院 四川 成都 610045）
【摘要】目的：建立液相色谱法测定利福平胶囊（II）的有关物质。方法：采用液相色谱法，色谱柱：安捷伦C8（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-0.075mol?L-1磷酸二氢钾溶液-1.0mol?L-1枸橼酸溶液；流速：1.0ml?min-1；检测波长：254nm；柱温：35℃。结果：方法专属性良好，线性关系良好；各杂质与主成分峰分离度较好。结论：该方法可用于利福平胶囊（II）有关物质的测定。
【关键词】利福平胶囊（II）；高效液相色谱法；有关物质
【中图分类号】R95 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）19-0028-02
Determination of the related substances of Rifampicin capsule(Ⅱ)
Luo Yuan,Dongrui.
Chengdu Institute Center for Drug and Food Control,Chengdu,610045,China
【Abstract】Objective To develop a HPLC method for the determination of related substances in Rifampicin capsule (Ⅱ). Method A agilent C8 (4.6×250mm,5μm)was used.. The mobile phase was methanol- acetonitrile- 0.075 mol?L-1 potassium dihydrogen phosphate-1.0 mol?L-1 citric acid. The flow rate was 1.0 ml?min-1;the detection wavelength was 254 nm;the column temperature was 35℃. Result The method was specific and with good linear relationship. The related substances had good separation with main peaks. Conclusion The method is suitable for the related substances determination of rifampicin capsule(Ⅱ).
【Key words】Rifampicin capsule(Ⅱ); HPLC; Related substances
结核病是青年人容易发生的一种慢性和缓发的传染病，而利福平胶囊（Ⅱ）即适用于结核病、脑膜炎、军团菌病、结核性脑膜炎、麻风病等人群使用。虽然现在环境卫生条件提高，医疗技术发达，本制剂的使用范围和受众都有缩小，但其治疗意义依然存在。利福平胶囊（Ⅱ）目前没有被各国药典收载，现行标准也没有有关物质测定项，故本文结合《中国药典》2010版附录药品质量标准分析方法验证指导原则以及《中国药典》2010版利福平项下相关资料，对利福平胶囊（Ⅱ）的有关物质进行了方法学研究。
1.仪器与试药
Waters 2695-2489高效液相色谱仪：四元泵，在线脱气，柱温箱，自动进样器，紫外检测器；Millipore超纯水发生器；梅特勒电子天平。
醌式利福平对照品（中国药品生物制品检定所），N-氧化利福平对照品（中国药品生物制品检定所），3-甲酰利福霉素SV对照品（中国药品生物制品检定所），利福平对照品（中国药品生物制品检定所）。利福平胶囊（Ⅱ）（A药厂，编号：1、2、3；B药厂，编号4、5、6）。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
2.色谱条件及系统适用性试验
2.1 色谱条件
色谱柱：安捷伦C8（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-0.075 mol?L-1磷酸二氢钾溶液-1.0 mol?L-1枸橼酸溶液；流速：1.0ml?min-1；检测波长：254nm；柱温：35℃；进样量：10μl。
2.2 系统适用性试验
取3.3项下系统适用性溶液进样，各峰的分离度符合要求。
3.溶液的制备
3.1 供试品溶液的制备
精密称取供试品约250mg，置50ml量瓶中，加乙腈约25ml，温水浴中振摇使溶解，放冷后用乙腈稀释至刻度，摇匀，静置；精密吸取上清液用乙腈稀释并定量制成1mg?ml-1的溶液，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取利福平对照品适量，加乙腈溶解并稀释成10μg?ml-1的溶液作为对照品溶液（1）；分别精密称取醌式利福平对照品、N-氧化利福平对照品、3-甲酰利福霉素SV对照品适量，加乙腈溶解并稀释成10μg?ml-1的各杂质对照品溶液。
3.3 系统适用性溶液的制备
称取利福平对照品、醌式利福平对照品、N-氧化利福平对照品、3-甲酰利福霉素SV对照品适量，加乙腈溶解制成0.04mg?ml-1的溶液，即得。
4.方法与结果
4.1 专属性试验
对供试品进行了酸、碱、热、氧化和光照等破坏试验，结果证明该色谱条件对上述破坏后产生的降解产物能有效分离，色谱条件能满足利福平胶囊（Ⅱ）有关物质的测定。
4.2 线性和范围
分别取醌式利福平对照品、N-氧化利福平对照品、3-甲酰利福霉素SV对照品适量，加乙腈溶解并稀释成1、2.5、5、10、20、30μg?ml-1的各杂质对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定峰面积并进行计算，r均为0.9999，可见这三种特殊杂质在1～30μg?ml-1浓度范围内线性关系良好。
4.3 精密度
取3.2项下各杂质对照品溶液连续进样，计算精密度，结果表明各杂质的精密度均良好。
4.4 回收率试验
分别称取醌式利福平对照品、N-氧化利福平对照品、3-甲酰利福霉素SV对照品适量，加乙腈溶解并制成1mg?ml-1的各杂质对照品溶液。另每个特殊杂质回收试验称取供试品9份，置100ml量瓶中，分为三组，每组依次加入各杂质对照品溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml，按2.1项下色谱条件进样测定，计算回收率，各杂质回收率均在96%以上。
4.5 耐用性试验
换用不同的色谱柱：资生堂C8（4.6×250mm，5μm）进行有关物质检测，与原检测结果比较。实验结果表明，杂质峰分离度良好，杂质含量相差较小，本法耐用性良好。
4.6 样品测定
将两厂家样品进行测定，测定结果见表1。结果表明，两个厂家不同批号制剂中醌式利福平含量相近，N-氧化利福平和3-甲酰利福霉素SV含量相差较大，其余各杂质总量含量较为接近。
5.讨论
5.1 溶剂筛选
利福平溶于有机溶剂，将溶剂分别换为甲醇和乙腈进样，结果比较接近，但试验中发现用甲醇溶解的样品放置后会有析出现象，故选用乙腈做为溶解介质。
5.2 前处理方法的选择
因供试品为油性基质热溶解后灌装冷却成形，胶囊内容物为凝固的固体，且较硬，称样前需将其捣碎。若称取的样品直接超声处理，碎块的溶解性并不会随超声时间有所提高（曾试验超声30分钟以上，结果仍不理想），这样会影响成分的溶出进而影响测定结果。经试验将样品加入溶剂后置温水浴中振摇能很快溶解基质，故选择微微加热的方式来处理样品。
5.3 特殊杂质的对照品溶液一定要分开配制进样，因为如果全部混合到一份对照溶液中，它们会相互反应产生新的杂质，影响定量结果。
6.结语
本文建立了液相色谱法测定利福平胶囊（Ⅱ）有关物质的方法。在该色谱条件下可以定量测定主要杂质并控制其他杂质总量，杂质和主峰分离度好，可以用于该制剂的有关物质检测。
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论文作者:罗嫄,董瑞
论文发表刊物:《医药前沿》2018年7月第19期
论文发表时间:2018/7/10
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