1.甘肃天水市4ｏ7医院（甘肃 天水741000） 2.甘肃天水市麦积区中医医院 （甘肃 天水741000）
【摘要】目的 在痰标本细菌培养中，对本科自主创新的女性拭子研磨涂布痰标本预处理方法进行评价。方法 收集我院肺部感染患者痰培养合格标本206份，采用直接接种培养法、二硫苏糖醇均质化法和女性拭子研磨涂布三种方法接种平板培养，观察培养结果，统计分离出致病菌的阳性分离率。通过采用卡方检验，比较三种方法的阳性率差异。结果 经预处理后接种培养法阳性率均比直接培养法高，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。二硫苏糖醇均质化法和女性拭子研磨涂布两种方法间比较阳性率无统计学意义（P ＞ 0.05）。结论 预处理后的培养结果阳性率比直接接种培养阳性率高, 女性拭子研磨涂布与传统的痰标本预处理方法(二硫苏糖醇均质化)相比无显著性差异,阳性分离率较高,而且女性拭子研磨涂布预处理痰标本方法操作简单,材料易得,不需要特殊试剂,成本低廉,省时省力,不容易被污染,处理后的标本几乎没有杂菌干扰,致病菌阳性检出率高,所以方法可行，便于临床实际操作,适合在细菌室预处理痰标本时推广应用。
【关键词】痰培养；预处理；
【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A
下呼吸道感染通常用痰标本进行病原学检验,但由于痰液标本具有明显的非均质性，细菌等成分的分布很不均匀[1]，而且在咳痰时极易受到上呼吸道分泌物中正常菌群的污染，从而导致难以准确识别致病菌，影响培养结果阳性检出率,所以多年来，本科室针对痰培养阳性率低的问题,作了多方面的探索, 积累了一些经验和体会，目前，结合实验室条件，我科室初步尝试采用生理盐水洗涤与女性拭子研磨相结合的方法对痰液进行前处理后，再滚动涂布接种培养，使细菌培养阳性率有了明显提高，取得了满意的效果，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集2014年2月-2015年6月天水4O7医院肺部感染住院患者合格痰液标本206份做为研究标本，标本来源性别年龄不限。
1.2标本采集 取晨痰或纤支镜吸痰。晨痰留取前,患者先用冷水漱口清洗咽喉,然后气管深部咳出痰液,置于无菌痰盒中送检。纤支镜吸痰由纤支镜实验室按操作规程采集后,送微生物室检验。
1.3仪器试剂 血平板、麦康凯和巧克力平板由赛默飞生物工程有限公司生产,细菌鉴定仪及配套细菌鉴定板,CO2 孵育箱、无菌滴管等由湖南长沙天地人公司生产，革兰染液珠海由BASO公司提供，女性拭子由扬州市创新医疗器械厂提供，无菌生理盐水由石家庄四药有限公司提供，其它实验器材自配后经高压灭菌备用。
1.4试验方法 以接种环直接接种痰标本的做为对照组,用二硫苏糖醇均质化法、女性拭子研磨涂布两种预处理后的为试验组,将同一个患者的痰标本分别用三种方法进行接种培养和鉴定。记录鉴定结果,采用卡方检验,比较三种方法的阳性率差异,从而评价三种方法对痰培养阳性率的影响。
1.4.1 痰涂片镜检 取脓性或血性痰液一接种环在洁净玻片上，压片制成均匀的薄膜，干燥后固定，进行革兰染色，在显微镜下观察，凡白细胞＞25 个/LP 且鳞状上皮<10 个/LP 或鳞状上皮为10 ~ 25 个/LP，或白细胞∶ 鳞状上皮>2.5 ∶ 1 的标本为合格标本，其余为不合格标本，不进行下一步处理[2]。
1.4.2 接种环直接接种(做为对照组) 将未经任何预处理的合格痰标本取脓性或血性部分一接种环直接分区划线接种于血平板、麦康凯和巧克力平板上，置（35 ± 2）℃ CO2温箱培养。
1.4.3 二硫苏糖醇均质化 将痰标本加入含有15 ~ 20 ml 灭菌生理盐水的试管中，剧烈振荡5 ~ 10 s,然后用接种环将沉淀于管底的脓痰小片取出，再放入另一试管内，以同样方法反复3次[3],然后于痰标本中加入等量的二硫苏糖醇消化液，放置37 ℃ 90min，期间适当摇动，即能使痰液均质化,再将均质化的痰液接种于血平板、麦康凯平板和巧克力平板上,置（35 ± 2）℃CO2温箱培养。
1.4.4 女性拭子研磨涂布 在盛有痰标本的无菌痰盒中，直接加入无菌生理盐水15 ~ 20 ml, 用无菌滴管反复多次吹打痰液,弃去上清液,如此洗涤至少3次。然后用女性拭子搅拌研磨已洗过三遍的痰标本,使块痰变成碎痰，再用拭子挑取碎痰均匀滚动涂布于血平板、麦康凯和巧克力平板的第一区,反复挑取、涂布三次,再用接种环分区划线后立即培养。
1.4.5统计分析 统计三种方法分离出致病菌的株数，分别计算阳性率,各组间采用χ2 检验，P <0.05 为有明显差异，有统计学意义; P >0.05 为无明显差异。
2结果
3讨论
206例患者痰标本直接接种培养共培养出致病菌115株,阳性率为55.8%；二硫苏糖醇均质化处理后共培养出致病菌144 株,阳性率为69.9%；女性拭子研磨涂布处理后共培养出致病菌152株,阳性率为73.8%。如表1显示，三种方法相比，痰标本不经预处理直接接种培养阳性率最低,与经预处理后的两种方法比较均有显著性差异（P ＜0.05）；表2显示，两种预处理方法相比，无显著性差异（P ＞ 0.05），女性拭子研磨涂布法阳性率较高于二硫苏糖醇均质化法。相比之下，直接接种由于口腔寄居菌没有被很好地清除,包裹在脓痰内的致病菌没有充分分离出来,培养基上生长的细菌比较复杂,很难辨认致病菌，给鉴定带来一定困难和干扰。两种预处理方法比较：二硫苏糖醇是强还原剂，可作用于粘蛋白的二硫键使痰液均质化，但这种方法首先要用生理盐水在试管内洗涤，试管的面积不大，痰在试管内不易摇碎，所以洗痰不够彻底，另外多次洗涤，痰标本多次被移动，不但容易污染，而且极易丢失有价值的部分[4]；其次消化时间长，需90min，消化时间长短对细菌的检出率有较大影响，如流感嗜血杆菌在消化液处理后15min接种比30 min后接种的检出率要高；另外，虽然市面上已有配制好的商品试剂出售，其有效期长，方便保存，但成本高，而且对细菌生长有不同程度的抑制作用[5]。另外，直接接种和二硫苏糖醇均质化法接种时只挑取一接种环在培养基中划线培养，由于痰中细菌的数量和种类的分布不均匀，接种时可能所取的部位没有致病菌或只接种了一部分致病菌，这将会使培养的阳性率大大降低。而痰标本用女性拭子研磨涂布处理后接种，培养结果显示,致病菌生长良好, 菌落特征明显, 对下一步的鉴定和药敏分析都很有帮助,该方法洗涤时直接是将无菌生理盐水直接倒入痰盒中，痰盒面积相比试管大，用无菌滴管反复多次吹打痰液，便能较彻底地洗去口腔中的定植菌，多次洗涤，痰标本都在痰盒中，不被移动，所以污染几率小，也不易丢失有价值的部分；然后再用女性拭子反复多次搅拌研磨，使块痰变成碎痰，被脓痰包裹的致病菌充分分离出来，然后用女性拭子沾取碎痰，反复滚动涂布在培养基胡第一区，至少三次，本研究采用拭子沾取而不用接种环，是因为在痰液洗涤过程中，痰液会变得比较散在，接种环挑取痰脓块很困难，而用拭子挑取的目的是尽可能多的致病菌接触培养基,提高阳性检出率。所以女性拭子研磨涂布法预处理痰标本，口腔寄居菌能被很好地清除,而且能够准确及时的捕捉致病病原体，提高阳性检出率,为临床早诊断|、早治疗,合理应用抗生素提供有效帮助。当然，导致三种方法阳性率减低也不排外以下两种原因：1、患者检测前使用过多种抗生素，细菌被抑制，导致培养失败。2、标本未立即送检,如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和肺炎链球菌体外自溶以及嗜血杆菌等娇弱菌存放期间死亡等。
综上所述几种方法的优缺点，我们采用女性拭子研磨涂布预处理痰标本方法操作简单，材料易得，不需要特殊试剂，成本低廉，省时省力，污染几率小，处理后的标本致病菌阳性检出率高，所以方法可行，便于临床实际操作，适合在细菌室预处理痰标本时推广应用。
参考文献：
[1]徐兴平, 朱明祥, 张树仁.用于细菌学检查的痰标本的质量问题[ J] .实用医技杂志, 2004, 11(6B):1097
[2] 叶应妩, 王毓三, 申子瑜. 全国临床检验操作规程[M] . 第3 版. 南京: 东南大学出版社, 2006: 744-745.
[3] 叶应妩，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 第3 版.南京：东南大学出版社，2006：744-745.
[4] 桂勇.三种细菌培养痰标本预处理方法学评价中国现代医生 2012 年10 月第50 卷第28 期
[5] 柯俊，陈媛，陶治洲，等. 痰标本预处理对细菌学检验结果的影响[J].检验医学与临床，2008，5（13）：814-815.
论文作者:邓宁,成永平
论文发表刊物:《解放军预防医学杂志》2015年第5期供稿
论文发表时间:2015/11/25
标签：标本论文; 致病菌论文; 方法论文; 阳性论文; 女性论文; 细菌论文; 涂布论文; 《解放军预防医学杂志》2015年第5期供稿论文;