丛岩峰1 温玉新1 张婷雅2
1.北华大学基础医学院 吉林省吉林市 132000；2.北华大学附属医院 吉林省吉林市 132011
摘要：目的：观察和探讨神经生长因子(NGF)对大鼠缺血缺氧性脑损伤(hypoxic-ische-micencephalopathy，HIE)的保护作用。方法：选取7d龄的Wistar大鼠18只，随机分成三组，NGF治疗组HIE组和假手术组各6只，在制成HIE模型前半小时腹腔注射NGF或0.9%氯化钠溶液各1次，缺血缺氧2h后再腹腔注射等量的NGF或0.9%氯化钠溶液，放回母鼠处喂养44h后处死取出大脑并固定，应用免疫组织化学-SP法研究p53蛋白和bcl-2在新生大鼠及缺血缺氧后脑中表达及与凋亡的关系。结果：p53蛋白在假手术组中基本无表达，HIE组p53蛋白表达明显高于假手术对照组，NGF干预后p53蛋白下降显著，而bcl-2正好相反，HIE组较假手术组表达降低，NGF干预组bcl-2表达显著增加结论：神经生长因子能减轻缺血缺氧性脑损伤，值得临床推广应用。
关键词：神经生长因子；缺血缺氧性脑损伤；保护作用；实验
缺氧缺血性脑损伤是造成新生儿死亡和婴儿、儿童神经发育障碍的严重疾病，围生期窒息为最主要的致病因素。缺氧缺血在早产儿和足月儿造成脑损伤的部位、病理改变和超声表现也不相同。早产儿脑室周围白质是大脑前、中和后动脉终末支供血的分水岭区。在缺血情况下会造成该部位白质的凝固性坏死，以邻近室间孔的侧脑室额角外侧和近三角区的白质最常累及，前者是皮质运动中枢发出的下降纤维所在，后者是视放射区，因而常常影响患儿的运动和视觉功能。大脑皮质因有来自脑膜动脉的侧支供血而不被累及。25％的患儿白质坏死区内可伴有出血[1]。坏死区接着有星形细胞和巨噬细胞增生，坏死组织被吞噬发生在5-7天，2周后形成空腔，如室管膜有破坏则空腔可与脑室相通，造成脑室边缘不规则。本实验采用新生大鼠HIE模型进行NGF保护HIE的作用的研究。现报告如下。
1.材料与方法
1.1动物模型制备与分组
Wistar大鼠18只，7日龄，体重12～16g，雌雄兼用。模型组动物乙醚吸入麻醉，结扎左侧颈总动脉，缝合切口，放回原饲养环境中恢复2h，置动物于2000ml密闭容器中，通入含有8％氧气的混合气体，流量为31L/min。2h后恢复正常供氧。制成左侧大脑半球缺氧动物模型。随机分成三组，NGF治疗组?HIE组和假手术组各6只，
1.2方法
1.2.1标本采集
在制成HIE模型前半小时腹腔注射NGF或0.9%氯化钠溶液各1次，缺血缺氧2h后再腹腔注射等量的NGF或0.9%氯化钠溶液，放回母鼠处喂养44h后处死取出大脑并固定。
1.2.2免疫组化检测
应用免疫组织化学-SP法研究p53蛋白和bcl-2在新生大鼠及缺血缺氧后脑中表达及与凋亡的关系?新生大鼠在制成模型并喂养44h后，处死并取出脑组织，均匀分离左右半脑，放入4%的多聚甲醛讲行固宁24h常规脱入?诱明?石蜡句理?织织切片4μm厚)、分别进行苏木素-伊红(HE)染色和免疫组化检测，包括促进细胞凋亡的p53蛋白和抑制细胞凋亡基因bcl-2。每次实验均设阴性对照，以PBS代替一抗。阳性反应为胞质内呈棕黄色染色，阴性结果为胞质内无棕黄色。在高倍镜卜观察同一实视野下100个细胞中棕黄色颗粒数来计算p53和bcl-2的表达。
1.3统计学处理
采用数理统计软件SPSS19.0对收集的数据进行整理与统计分析，并进行卡方检验，P<0.05显著差异具有统计意义。
2.结果
p53蛋白在假手术组中基本无表达，HIE组p53蛋白表达明显高于假手术对照组，NGF干预后p53蛋白下降显著，而bcl-2正好相反，HIE组较假手术组表达降低，NGF干预组bcl-2表达显著增加
3.讨论
重度缺氧缺血性脑病患儿脑组织神经细胞损伤严重，生后7天内可发生大面积坏死，因此早期做好三项支持疗法和三项对症处理，维持机体内环境稳定和各脏器功能正常运转，及早恢复神经细胞能量代谢，尽可能减少和避免形成坏死，是早期治疗的重要目标[2]。根据动物实验，缺氧缺血性脑损伤神经细胞死亡有坏死和凋亡两种形式，而坏死主要见于严重的缺氧缺血性脑损伤。即使在严重缺氧缺血性脑损伤，死亡仍以凋亡为主，凋亡是一慢性、可逆的过程，有许多因素可以阻断凋亡，从而为临床上治疗缺氧缺血性脑病创造了时机[3]。根据缺氧缺血性脑损伤大鼠动物模型，脑组织病变中的细胞凋亡可持续到2l天以上，此时已接近成年大鼠，提示临床上治疗缺氧缺血性脑病，要防止产生神经后遗症，应有足够的疗程，采取有效措施，阻断神经细胞凋亡过程。这对重度缺氧缺血性脑病尤为重要，把治疗限制在新生儿期是不够的，应该延长至新生儿期以后[4]。
新生儿脑功能发育不完善，即使神经细胞有损伤，也不一定出现神经症状，临床医生不能认为新生儿期没有神经症状，缺氧缺血性脑病便已痊愈，对重度缺氧缺血性脑病更应重视新生儿期后的随访和治疗。目前尚无足够的研究报告可证明新生儿缺氧缺血性脑病神经细胞凋亡过程持续多久。近年来国内一些临床实践经验表明，生后二、三个月随访检查可早期发现某些异常神经症状，再结合影像学和脑电图检查，便可决定新生儿期后是否需要继续治疗和干预。这种随访和治疗应持续至生后6个月。既往认为新生儿期出院后6个月再来复查显然是太晚了，此时脑瘫症状已经明显，影像学检查可见脑空洞或脑萎缩，表明脑组织神经细胞死亡已不可逆，治疗难以奏效。
进入90年代以来，神经营养因子对中枢神经系统(CNS)的保护作用成为国外神经病学研究热点之一，研究重点从CNS退行性病变转移到CNS损伤尤其是缺氧缺血性损伤上来。脑皮层损伤后，受损侧脑组织内神经生长因子(NGF)及其mRNA表达明显增加，提示脑组织受损时内源性NGF生成增加。当经患侧脑室内注入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)7天后，患侧脑组织内NGFmRNA的表达增加了8倍，表明经侧脑室注入外源性神经营养因子后，可大大增加脑组织内神经营养因子含量。最近西班牙学者Pedm Cuevas等发表他们的研究报告，证明将14C标记的bFGF经肌肉或静脉注入大鼠体内，脑组织内可发现被14C标记的bFGF散布在神经元内。国内也有动物实验报告，给缺氧缺血新生大鼠腹腔内注入125I标记的bFGF后也可在脑内被发现。以上研究结果为临床上周身应用神经营养因子类药物治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供了实验依据。新生儿期一直至生后6个月内，血脑屏障通透性较大，药物容易进入脑组织，是应用神经营养因子治疗缺氧缺血性脑损伤的最佳时机。现在国内已有基因重组的bFGF批量生产，正用于第三期临床试验，不久可正式用于临床，将为重度新生儿缺氧缺血性脑病新生儿期后治疗提供更有效的治疗手段。本组资料显示，通过实验研究，神经生长因子能减轻缺血缺氧性脑损伤，值得临床推广应用。
参考文献:
[1]胡泳菊，汤永红. 脑源性神经营养因子对神经干细胞增殖分化的影响[J]. 现代医药卫生，2014，30(1)：53-55.
[2]杨坦，刘华，王肇光，等. 应用于缺血缺氧性脑病治疗的神经干细胞移植：现实与未来[J]. 中国组织工程研究，2014，18(1)：143-148.
[3]赵亮. 针刺配合鼠神经生长因子穴位注射治疗脑瘫斜视[J]. 辽宁中医药大学学报，2014，16(1)：186-188.
[4]梁意敏，林红，曾德辉，等. 鼠神经生长因子联合高压氧、手法训练治疗45例缺血缺氧性脑病康复期患儿疗效观察[J]. 现代诊断与治疗，2013，24(15)：3553-3554.
作者简介:丛岩峰(1977-),男,吉林人,解剖专业硕士研究生,研究方向:临床应用解剖学。
温玉新(1968-),男,吉林人,副教授,硕士研究生导师,研究方向:临床应用解剖学。
论文作者:丛岩峰,温玉新,张婷雅
论文发表刊物:《健康世界》2015年2期供稿
论文发表时间:2015/11/16
标签：缺血性论文; 神经论文; 新生儿论文; 组织论文; 脑病论文; 脑室论文; 神经细胞论文; 《健康世界》2015年2期供稿论文;