【摘要】目的：检测胃癌组织和癌旁组织中PI3K、AKT2两项指标的表达水平，分析其与临床病理特征和患者预后之间的相关性。方法：采用组织芯片、免疫组织技术，对胃癌组织（160例）、癌旁组织（50例）、正常胃黏膜组织（30例）中PI3K和AKT2两项指标的表达进行检测。结果：胃癌组织中，PI3K/AKT2的过表达，均和淋巴结转移、癌症分化、浸润以及Lauren分型存在明显相关(P＜0.05)，但和肿瘤大小无显著关联(P＞0.05)；PI3K、AKT2阳性组与生存期相关性存在显著差异；AKT2 过表达被视为胃癌预后的影响因子(P＜0.05)。结论：PI3K/AKT2 信号传导通路，诱导胃癌形成和发展，同时参与浸润转移，可作为胃癌患者的晚期事件和预测指标。
【关键词】胃癌；PI3K/AKT2；预后
【中图分类号】R735.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）05-0217-02
胃癌，属于消化系统较常出现的恶性肿瘤，其死亡率极高。胃癌的形成、浸润以及转移，和信号传导系统的改变存在明显相关[1]。本研究尝试利用组织芯片、免疫组织化学两项技术对PI3K/AKT2在不同组织中的表达进行检测，旨在分析其在胃癌形成和演变中的关系。
1.对象与方法
1.1 研究对象
研究时间：2013年2月—2016年3月；地点：本院肿瘤科；对象：资料齐全的胃癌术后石蜡标本。胃癌组织（160例）、癌旁组织（50例）(无癌细胞)。160例胃癌中，男女分别为105、55例；病人年龄为30～72岁，平均55岁。浸润深度：8例位于黏膜层，40例位于达肌层，80例位于达浆膜层，32例位于浆膜层外。有无出现淋巴结转移的患者分别为120例、40例。WHO分型：低、中和高分化型患者分别为90例、40例和30例。Lauren分型：弥漫型、肠型和混合型分别为80例、75例和5例。肿瘤直径：≥5cm和＜5cm的患者分别为100例、60例。另抽取30例正常胃黏膜进行对照。经随访，有效结果为95例，时间为2～79月。
1.2 方法
1.2.1 组织芯片制备 对空白模具蜡块进行制作，使用组织芯片仪进行打孔，直径为2mm，间距为1mm，数量6×7个。全部标本，均进行HE染色，并取1处代表位点；采用组织芯片仪分别进行钻孔，并对组织芯进行采集，直径2mm；将其摆放到蜡块孔中，做成组织芯片；并切片，厚4μm；并粘附1%比例的载玻片（已用多聚赖氨酸加以处理）。
1.2.2免疫组织化学染色 兔抗人AKT2和PI3Kp85两种多克隆抗体，均由博士德生物工程提供；S-P染色试剂盒以及DAB 酶底物显色剂，均由北京中杉生物提供。免疫组织化学染色，按试剂盒标注的说明书操作，试剂公司已经提供阳性对照，阴性对照选取PBS。
1.2.3染色结果评分 阳性结果：呈现淡黄色或者棕黄色颗粒状，于细胞浆或者细胞核中可见。由2名病理医师单独进行评定：阳性细胞数低于5%，记0分，5%～25%，记1分；26%～50%，记2分，高于50%，记3分；根据染色强度进行分类标志，无着色，0分；淡黄色，1分；棕黄色，2分；棕褐色，3分。评分相加：3分以上，阳性；3分以下，阴性。
1.4 统计学处理
实验资料，均采用SPSS 17.0软件包进行统计，计数资料选择秩和检验，x-±s用来代表计量资料，用t加以检验；P＜0.05，提示有显著性差异。
2.结果
2.1 PI3K、AKT2的阳性表达
胃癌组织中PI3K阳性表达率为76.7%，癌旁组织中25.9%，正常胃黏膜中则为25.0%；AKT2在各组的阳性表达率分别为71.5%、23.9%和25.1%。胃癌与癌旁组，胃癌组与对照组在PI3K 和AKT2阳性表达率上，存在明显差异性(P=0.000)。
2.2 PI3K、AKT2蛋白表达间相关性
AKT2阳性表达的26例癌组织中，PI3K呈现阴性表达，其中共同阴性、阳性分别为15例、101例，相关系数r=0.183，P=0.011，提示PI3K/AKT2表达存在明显正相关。
2.3 PI3K、AKT2与胃癌病理演变
结果表明：胃癌组织中，PI3K/AKT2的过表达，均和淋巴结转移、癌症分化、浸润以及Lauren分型存在明显相关(P＜0.05)。见表。
表 PI3K、AKT2与胃癌形成、发展之间相关性
2.4 PI3K 、AKT2 表达水平与生存期
经随访，95例胃癌手术病例中，PI3K 阳性、阴性表达的患者分别为35例、60例，半数生存期分别为20月和78月；AKT2阳性、阴性表达的病例分别为35例和60例，半数生存期分别为19月和72月，且阳性表达患者的生存期相较于阴性更长(P＜0.05)。
3.讨论
胃癌早期并没有典型的临床表现，大部分患者就诊便处于进展期，需扩大根治，且复发和转移几率高达54%。受化疗和耐药因素影响，晚期胃癌病人的生存期短于1年。及早诊断胃癌和找到新型分子标志物，对延长患者生存时间有很大的作用。
PI3K、AKt可以磷酸化，并介入细胞代谢、增殖以及凋亡关联的蛋白，加速肿瘤形成。AKT 基因包含：（1）Akt1/PKBα；（2）Akt2/PKBβ；（3）Akt3/PKBγ三种，很多肿瘤中均有AKT2 的异常表达[2]。本研究表明，胃癌组织内PI3K、AKT2有明显上调；且分化程度的逐渐递减，PI3K/AKT2阳性表达将明显上升，可见PI3K/AKT 传导通路介入胃癌形成过程。研究[3]发现，AKT在不同阶段、亚型的肿瘤中发挥不同的作用，AKT2或可作为肿瘤患者的晚期事件。另外，胃癌浸润深度越高，可见淋巴结转移灶，则PI3K和AKT2阳性表达率也会有很大差别。通过对95例患者进行随访，得出 PI3K、AKT2表达和病人的生存期有显著关联，阴性表达者在生存时间上有绝对优势，AKT过表达可视为胃癌预后的影响因子。
总之，本研究采用组织芯片、免疫组织化学两项技术检测到了胃癌组织中PI3K、AKT2的高表达，证实其介入胃癌形成、演变与浸润转移等过程。通过抑制PI3K/AKT2 传导通路对胃癌病人进行治疗，有助于提高病人的生存期。
【参考文献】
[1]王艳丽，高青.抑制PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞转移和侵袭影响的研究[J].重庆医科大学学报.2011(01) .
[2]Jonckheere N,Skrypek N,Van Seuningen.Mucins and tumor resistance to chemotherapeutic drugs[J].Biochim Biophys Acta,2014,1846(1):142-151.
[3]Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Siwei Zhang,etc.The incidences and mortalities of major cancers in China,2009[J].Chinese Journal of Cancer.2013(03).
论文作者:涂江江,刘秀丽,林静,陶利英,康马飞
论文发表刊物:《医药前沿》2017年2月第5期
论文发表时间:2017/3/10
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