湖南省妇幼保健院 湖南长沙 410008
摘要：目的 探讨内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF）、血管内皮生长因子在多囊卵巢综合征（PCOS）中的表达及意义。方法 选取2014年2月至2016年12月我院收集的PCOS组织（PCOS组），同时选取正常卵巢组织31例作为对照组，采用免疫组化法检测EG-VEGF和VEGF表达。结果 PCOS组织中EG-VEGF在颗粒细胞、卵泡膜细胞及间质细胞胞浆中高表达，VEGF在颗粒细胞及卵泡细胞胞浆中高表达；PCOS组EG-VEGF、VEGF表达分别为（0.183±0.011）和（0.179±0.010），明显高于对照组（p＜0.05）；PCOS组EG-VEGF表达水平与VEGF表达水平呈负相关（r=-0.362，p＜0.05），对照组EG-VEGF表达水平与VEGF表达水平无相关性（p＞0.05）。结论 EG-VEGF和VEGF在PCOS组织中高表达，与PCOS发生可能有一定的关系。
关键词：内分泌腺来源的血管内皮生长因子；血管内皮生长因子；多囊卵巢综合征
Expression and significance of EG-VEGF and VEGF in PCOS
[Abstract]Objective：To investigate the expression and significance of endocrine gland derived vascular endothelial growth factor（EG-VEGF）and vascular endothelial growth factor（VEGF）in polycystic ovary syndrome（PCOS）. Methods：Collected PCOS tissue in our hospital from February 2014 to December 2016（PCOS group），and 31 cases of normal ovarian tissue as control group，immunohistochemistry was used to detect the expression of EG-VEGF and VEGF. Results：In PCOS tissue，EG-VEGF was highly expressed in the cytoplasm of granulosa cells，theca cells and stromal cells，and VEGF was highly expressed in the cytoplasm of granulosa cells and follicular cells；The expression of EG-VEGF and VEGF in PCOS group were（0.183±0.011）and（0.179±0.010），significantly higher than those in the control group（P < 0.05）；The expression level of EG-VEGF in PCOS group was negatively correlated with the expression level of VEGF（r=-0.362，P < 0.05）. There was no correlation between the expression level of EG-VEGF and the expression level of VEGF in the control group（P > 0.05）. Conclusion：EG-VEGF and VEGF are highly expressed in PCOS tissues，which may be related to the occurrence of PCOS.
[Key words] Endocrine gland derived vascular endothelial growth factor；vascular endothelial growth factor；polycystic ovary syndrome
多囊卵巢综合征（PCOS）的发生发展，可以导致患者不孕或者继发性的卵巢功能的衰退，流行病学研究显示，PCOS的发病率可达0.06%-0.14%左右，且近年来呈现出了明显的上升趋势[1，2]。在探讨PCOS的发病机制的过程中可以发现，局部卵巢组织中相关生物学因子的变化，可以通过影响到卵泡的成熟、刺激始基卵泡的发育等，进而导致多囊卵巢的形成，并严重影响到患者的内分泌激素的稳定。内分泌腺来源的血管内皮生长因子（Eendocrine gland derived vascular endothelial growth factor，EG-VEGF）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可以通过促进新生血管的形成，加剧卵巢的排卵功能异常，从而促进PCOS的发生[3-5]。本研究选取2014年2月至2016年12月我院收集的PCOS组织，探讨了局部组织中VEGF及EG-VEGF的表达，报道如下。
1材料与方法
1.1标本来源
选取2014年2月至2016年12月在我院治疗的PCOS患者42例（PCOS组），年龄19～35岁，平均年龄（29.01±4.72）岁，收集其腹腔镜下卵巢打孔术钳取或开腹手术楔形切取的部分多囊卵巢组织的石蜡标本，纳入标准：（1）病理诊断符合妇产科第七版教材中诊断标准；（2）患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准：术前3个月内使用过性激素、促排卵剂或雄激素等药物。同时选取同期我院获得的正常卵巢组织石蜡标本31例作为对照组，年龄18～34岁，平均年龄（28.72±5.03）岁，其中卵泡期16例，黄体期15例。PCOS组和对照组受试者年龄比较差异无统计学意义（t=0.252，p＞0.05）。
1.2检测方法
采用石蜡切片脱蜡至水，切片厚度3mm，3%H 2 O 2 室温孵育 5 min，采用去离子水水冲洗3次，每次3min，采用浓度为10% 牛奶蛋白（1g蛋白加入100ml纯水）封闭，室温孵育 5min，加入抗体（鼠来源，南京碧云天生物科技有限公司），37 ℃ 孵育 2h，PBS缓冲液冲洗3次，每次5min，滴加HRP标记的二抗（兔来源，购自罗氏检测公司），37 ℃ 孵育 30 min，PBS 冲洗3次，每次5min，加入 NBT/BCIP色剂显色 5min，复染，脱水，透明，封片，镜下观察。OLIPICS电子显微镜购自上海精密仪器有限公司，配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。
1.3 结果判断
VEGF阳性表达为血管内皮细胞中胞质出现棕黄色或黄色颗粒，EG-VEGF阳性表达为血管内皮细胞中胞浆中出血棕黄色或黄色颗粒。
1.4统计学处理
统计分析采用SPSS19.0软件，计量资料采用（±s）表示，组间比较使用t检验，相关性采用Pearson相关分析，以p＜0.05表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1 EG-VEGF及VEGF表达情况
PCOS组织中EG-VEGF阳性表达产物定位于颗粒细胞、卵泡膜细胞及间质细胞的胞浆中，见图1A，而在正常卵巢组织中EG-VEGF亦有表达，在卵泡期表达于颗粒细胞及卵泡膜细胞胞质，在黄体期表达于颗粒黄体细胞及卵泡膜黄体细胞胞质，见图1B、1C；PCOS组织中VEGF阳性表达产物定位于颗粒细胞及卵泡细胞胞浆中，在间质细胞无表达，见图1D，而在正常卵巢组织中VEGF亦有表达，在卵泡期表达于颗粒细胞及卵泡膜细胞胞质，在黄体期表达于颗粒黄体细胞及卵泡膜黄体细胞胞质，见图1E、1F。
2.3两组EG-VEGF与VEGF表达相关性
经Pearson相关分析，结果显示PCOS组EG-VEGF表达水平与VEGF表达水平呈负相关（r=-0.362，p＜0.05），对照组EG-VEGF表达水平与VEGF表达水平无相关性（p＞0.05）。
3.讨论
自身性性激素受体敏感性的改变或者由于患者长期的下丘脑-垂体-卵巢轴的紊乱，可以促进高雄激素或者黄体激素高峰导致的卵泡成熟障碍，引起雌激素及雄激素的持续性分娩紊乱。临床上PCOS的患者，其临床治疗的总体有效率不高，治疗后的病情缓解率不足35%[6]，且疾病长期迁延不愈。而通过对于PCOS发病过程中相关生物学机制的研究，可以为PCOS患者的综合性临床治疗提供参考。
VEGF是生长因子家族中重要的成员，其羧基末端结构上包含了多个巯基结构，可以影响到新生血管的形成、促进局部组织的高代谢及高血流灌注性表现，从而影响到恶性肿瘤、炎症及良性增生性疾病的发生发展。VEGF在影响卵巢上皮生发层细胞的成员过程中，可以通过促进新生血管的形成，加剧局部的氧化应激反应，影响到雌激素的正反馈调节机制，进一步促进卵泡成熟障碍；EG-VEGF是腺体来源的生长因子成员，其对于卵巢腺体的发育障碍的促进作用更为明显，特异性更高[7-9]，基础研究显示EG-VEGF对于多囊卵巢的排卵高峰前孕激素的干扰，可能是其影响到PCOS的主要因素。已有的研究探讨了VEGF在PCOS患者血清中的异常表达，认为高表达的VEGF是促进PCOS患者病情进展的重要因素[10，11]，但缺乏免疫组化蛋白水平的研究，同时对于EG-VEGF的表达研究也不足。
本次研究采用免疫组化研究发现，PCOS组织中EG-VEGF阳性表达产物定位于颗粒细胞、卵泡膜细胞及间质细胞的胞浆中，在颗粒细胞或者是膜细胞中的异常高表达，主要考虑EG-VEGF的表达可能是促进颗粒细胞等分泌雌激素的重要原因，EG-VEGF的高表达，能够在影响到VEGF/NOTCH信号通路的激活方面发挥作用，进一步促进下游性激素转录或者翻译的功能障碍。吴丽姝等[12，13]研究者在探讨PCOS发病机制的过程中发现，颗粒细胞膜组织中EG-VEGF的高表达，与PCOD患者的病情具有明显的关系，患者的性激素分泌越为紊乱，EG-VEGF的表达越高，相关关系较为明显，这与本研究的结论较为相似。PCOS组织中VEGF阳性表达产物定位于颗粒细胞及卵泡细胞胞浆中，但在间质细胞中并无明显的阳性表达，VEGF的差异性表达在影响到新生未成熟卵泡的血流供应等方面发挥了一定的作用，而在间质细胞中无相关的高表达表现，主要考虑间质细胞中VEGF的受体密度较低。PCOS组EG-VEGF、VEGF的阳性表达率均明显高于对照组，差异具有统计学意义，提示二者可能均参与到了PCOS的发病过程中，其中相关关系分析也可以发现，EG-VEGF、VEGF的表达具有明显的负性相关关系，从机制上考虑EG-VEGF、VEGF的异常表达促进PCOS进展的原因可能与下列因素有关：（1）EG-VEGF的高表达，可以局部抑制VEGF的表达，从而呈现出一定的负性相关关系的表达，并可以因此而加剧卵泡数量、功能的成熟障碍；（2）EG-VEGF的高表达，能够协同促进VEGF受体，拮抗VEGF的表达，从而出现VEGF表达下降的趋势。
综上所述，EG-VEGF和VEGF在PCOS组织中高表达，特别是二者在颗粒细胞或者卵泡膜细胞中的异常表达，提示其与PCOS发生可能有一定的关系。
参考文献：
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论文作者:胡萃
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第13期
论文发表时间:2017/9/22
标签：卵泡论文; 细胞论文; 内皮论文; 卵巢论文; 颗粒论文; 血管论文; 组织论文; 《中国误诊学杂志》2017年第13期论文;