韶关学院医学院 广东韶关 512106
摘要：目的：研究分析甲基硒酸对乳腺癌细胞增殖及生长影响。方法：在乳腺癌细胞系MCF-7中使用浓度不同的甲基硒酸，分别在不同的时间对乳腺癌细胞体外增殖、形态以及生长造成的影响进行观察分析。借助噻唑盐法对细胞的增殖进行测定，并借助光学显微镜对细胞的形态以及生长状况进行观察。结果：甲基硒酸对乳腺癌细胞的体外增殖可产生显著的抑制效果，甲基硒酸作用于乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用，且会随着药物浓度的增加而增加；甲基硒酸对乳腺癌细胞的生长也有一定的抑制效果，能够致使乳腺癌细胞出现核碎裂以及消失，乳腺癌生长以及形态改变会随着药物浓度以及作用时间的增加而增加。结论：甲基硒酸对乳腺癌细胞的体外增殖、生长具有一定的抑制作用，能够使乳腺癌细胞的形态发生变化，有望能够成为乳腺癌疾病预防以及治疗的一种新式方法。
关键词：甲基硒酸；乳腺癌细胞；增殖；生长影响
乳腺癌（mammarycarci）是危害世界女性生命健康的主要疾病，发病率和死亡率已分别位居第二位和第五位，且呈现不断增长趋势。在我国女性的恶性肿瘤中乳腺癌以居首位，对妇女的身心健康造成严重的威胁，对家庭生活的稳定也产生了一定影响，同时也对社会造成一定医疗负担。在乳腺癌的治疗中，传统方法较多应用放化疗以及手术手段进行治疗，对患者也会有一定的身心影响，且有较大的损伤[1]。本文通过体外实验，研究甲基硒酸（MSA）能够影响人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖以及生长，为进一步探讨元素硒的抗癌作用机制，提供一定的理论依据促进硒向预防以及治疗乳腺肿瘤的靶向性提供有效依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选购来自长春天药科技有限公司的人乳腺癌细胞株MCF-7，另选购来自Sigma公司的甲基硒酸。选自百奥生物公司的噻唑盐试剂盒。来自杭州四季青生物工作有限公司的胎牛血清。
1.2 分组方法
1.2.1借助噻唑盐法对细胞增殖进行检测
在研究过程中，需要将使用MSA的组别设为干预组，将未使用MSA的组设置为对照组，将干预组以浓度不同作为依据进行划分，分别为：2.5、5、10、20微摩尔每升4组。分别在24、48、72小时对MCF-7细胞的抑制率进行观察。在浓度以及时间点较为适合的情况下进行实验。
1.2.2 借助光镜对细胞的形态以及生长状况进行观察
也可划分为干预组以及对照组，其中按照浓度划分，将干预组划分为5、10微摩尔每升2组，对照组未加入甲基硒酸。分别在24、48小时时，借助显微镜对乳腺癌细胞形态以及生长情况进行观察，同时进行HE染色以及镜检、拍照，详见图1，图2，图3，图4。
图2 加入MSA培养前48小时的MCF-7细胞
图4 加入5微摩尔每升的MSA培养48小时候的MCF-7细胞
1.3 对实验流程进行分析
1.3.1 培养以及复苏乳腺癌细胞株
将乳腺癌细胞株MCF-7在液态氮中进行保存，在37摄氏度的水浴使其复苏。将复苏的细胞进行4～5min的悬液离心，弃上清液，保存在RPMll64培养液中，浓度为10%的胎牛血清中，加入每毫升100单位的青霉素，每毫升100单位的链霉素，保存温度需达到37摄氏度，浓度为5%的二氧化碳以及湿度饱和的状况下。在实验中选取对数生长期的细胞数量。
1.3.2 借助噻唑盐法对甲基硒酸作用在MCF-7细胞的增殖情况进行检测
借助胰酶溶液对MCF-7细胞进行消化，制作成单细胞悬液。在孔板上将细胞接入，使其能够融合70～80%。在接种完成24小时后，将不同浓度的甲基硒酸加入其中，分别在24、48以及72小时时，加入MTT20微升，保持4小时37摄氏度的温度。孔内分别加入150微升的二甲基压砜，经过10分钟震荡，以溶解结晶物。借助酶联免疫检测仪，对其的吸收度进行测定，以反应增殖情况。
1.4 质量控制要求
在实验进行的过程中，要保证无菌操作，对每一个样本进行复孔平行检测。
1.5 统计学分析
本组实验选用SPSS19.0统计学软件进行处理，计量资料采用（）表示，并借助t进行检验，计数资料采用百分率（%）表示，采用x2检验，当P＜0.05时，差异具有统计学意义。
2 结果
甲基硒酸对乳腺癌细胞的体外增殖可产生显著的抑制效果，甲基硒酸作用于乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用会随着药物浓度的增加而增加；甲基硒酸对乳腺癌细胞的生长也有一定的抑制效果，能够致使乳腺癌细胞出现核碎裂以及消失，乳腺癌生长以及形态改变会随着药物浓度以及作用时间的增加而增加，MSA对乳腺细胞MCF-7增殖的影响见表1。
3 讨论
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率呈上升趋势。传统的手术切除并没有带来满意的生存率，绝大多数病人仍难免死于肿瘤复发及转移[2]。应用术后放化疗方式能够使患者的生存率得以改善，但是也会给患者身体带来一定的损伤，使得化学治疗效果往往难以令人满意，达不到预期的治疗效果。此时，就需要选择一种高效且副作用小的的药物进行有效治疗[3]。
硒（selenium，Se）是机体生理活动所必需的微量元素，早在19世纪80年代就有学者把硒元素与癌的风险紧密地联系一起来，能够对癌症有预防以及抵抗的作用。不同的硒化合物，抑制癌细胞的作用能力强弱也不同，人们对其作为药物的研究也在不断深入[4]。在本组实验中，应用MSA后，乳腺癌细胞发生形态的改变，生长速度也明显减慢，同时出现癌细胞核的碎裂、核浓缩及核溶解的现象，凋亡的癌细胞明显增多。综合上述分析，硒能够对乳腺癌细胞生长有一定的抑制作用，使得凋亡的乳腺癌细胞明显增加，在时间及剂量上具有一定的依赖作用，能够实现抗癌、抑癌的效果[5]。由此证明，甲基硒酸对乳腺癌细胞的体外增殖、生长具有一定的抑制作用，能够有效抑制乳腺癌细胞增殖，有望能够成为乳腺癌疾病预防以及治疗的一种新式方法。为抗乳腺肿瘤的可行性和有效性提高有利依据。
参考文献：
[1]郭凤军，郭锡永，田静岩等.甲基硒酸对乳腺癌细胞增殖及生长影响的研究[J].中国妇幼健康研究，2010，21（2）：158-161.
[2]邱万寿，唐勇，刘威等.甲基硒酸对人三阴性乳腺癌细胞化疗增敏作用的机制探讨[J].中国病理生理杂志，2013，29（11）：1990-1993.
[3]罗雅婕，徐璐，邵继红等.硒-甲基硒代半胱氨酸对MCF-7细胞抗氧化及Survivin基因表达的影响[J].安徽医科大学学报，2014，（2）：194-197.
[4]郭凤军，郭锡永，吴飞等.甲基硒酸对乳腺癌细胞体外凋亡和细胞周期的影响[J].中国妇幼保健，2010，25（32）：4766-4768.
[5]谢蒙蒙，黄秋，罗雅婕等.硒-甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞端粒酶活性和hTERT基因表达的影响[J].营养学报，2014，36（5）：471-474.
论文作者:谭亮,邓文佳
论文发表刊物:《健康世界》2015年10期供稿
论文发表时间:2016/1/12
标签：癌细胞论文; 乳腺论文; 甲基论文; 乳腺癌论文; 生长论文; 细胞论文; 浓度论文; 《健康世界》2015年10期供稿论文;