四川省资阳市第一人民医院检验科 641300
摘要：目的 探讨乙肝病毒DNA检测与乙肝血清学标志物检测的关系。方法 采用PCR荧光探针定量（FQ-PCR）检测HBV-DNA，同时用时间分辨免疫荧光法（TRFIA）检测HBV血清学标志物HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBsAb和抗-HBc。结果 HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA阳性率为93.55%，高于HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组（65.79%）和HBsAg、抗-HBc阳性组（41.67%）；且HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA含量为（8.70±1.98）×107IU/ml，明显高于HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组（8.09±4.45）×105IU/ml和HBsAg、抗-HBc阳性组（2.19±1.59）×105IU/ml，P＜0.05差异具有统计学意义；HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组与HBsAg、抗-HBc阳性组HBV-DNA含量P＞0.05差异无统计学意义。结论 PCR定量测定HBV-DNA可以真实的反应患者体内病毒复制的动态情况，联合血清学标志物的检查可以为临床用药的选择、疗效及转归提供依据。
关键词：乙肝病毒DNA；血清学标志物；FQ-PCR；TRFIA
HBV感染是全球的公共卫生问题。在我国，HBV携带率约占10%，是世界上最大的“肝炎大国”【1】。HBV感染后临床表现多样，可表现为急、慢性肝炎、重症肝炎、无症状携带者，部分慢性肝炎可演变为肝硬化或肝癌。目前，国内检测乙型肝炎最常用的方法是血清学标志物的检查和荧光定量PCR测定HBV-DNA，本文通过两种方法对乙型肝炎检测的关系分析，达到了解PCR技术在乙型肝炎临床诊断中的作用。
1 材料和方法
1、1标本采集 收集本院2015年8月至2015年9月门诊及住院HBsAg阳 性血清标本201例，其中男141例，女69例，年龄12~79岁，平均年龄42.43岁。晨起采集静脉血3ml，非溶血、非脂血标本，严禁肝素抗凝。置于灭菌的一次性试管中，室温自然凝固，严禁肝素抗凝。及时分离血清，每例血清分成2份，一份用作TRFIA检测，一份用作FQ-PCR检测。
1、2仪器和试剂 血清学标志物抗原抗体检测采用上海新波技术有限公司提供的Anytest时间分辨荧光免疫分析仪，试剂来自苏州新波生物技术有限公司提供的乙型肝炎病毒血清学标志物试剂盒（免疫荧光法）。血清HBV-DNA检测使用美国ABI-7500荧光定量检测仪，试剂来自广州达安股份有限公司生产的乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）。
1、3方法
1、3、1 血清学标志物抗原抗体检测采用时间分辨荧光免疫分析法，严格按照试剂说明书操作。
1、3、2 HBV-DNA用PCR荧光探针定量法检测。待检标本同阴性、临界阳性、强阳性对照一同处理，用已知浓度梯度（2×103，2×104，2×105，2×106）的HBV-DNA标准品为参照物，严格按照试剂说明书操作，采用煮沸裂解法，经荧光定量PCR扩增后绘制标准曲线，待测标本与其对比得出DNA含量。PCR扩增条件：93℃2min预变性，93℃45s–55℃60s 10个循环，93℃30s–55℃45s 30个循环。反应结束后仪器自动分析，得出标本的病毒含量。试剂盒最低检测限为1×102IU/ml。
1、4统计学方法 使用SPSS17.0统计软件，计量数据用（`x±s）表示，采用t检验行差异性分析，P＜0.05差异有统计学意义。
2 结果
201例HBsAg阳性标本中，HBV-DNA阳性检出率为71.64%，其中，HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA阳性率为93.55%，高于HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组（65.79%）和HBsAg、抗-HBc阳性组（41.67%）；且HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA含量为（8.70±1.98）×107IU/ml，明显高于HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组（8.09±4.45）×105IU/ml和HBsAg、抗-HBc阳性组（2.19±1.59）×105IU/ml，P＜0.05，差异具有统计学意义；HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组与HBsAg、抗-HBc阳性组HBV-DNA含量P＞0.05，差异无统计学意义。
HBV-DNA含量与血清学标志物的关系
3 结论
乙肝病毒感染已成为危害人类健康的重要疾病。TRFIA是从免疫学水平检测HBV感染机体后产生免疫应答生成相应抗原抗体的含量。由于个体差异，不同的人在感染HBV后产生不同的免疫应答，从而生成不同的抗原抗体组合模式，即通常所说的“两对半”。HBsAg是乙肝患者血清中首先出现的抗原，一般作为乙肝的感染标志物，但在感染的早期，或由于S基因的低水平表达或变异，免疫学方法不能检出而出现漏诊。HBeAg是PreC基因编码的非结构蛋白，是HBV复制和具有强感染性的一个重要指标【2】。HBeAb的出现被视作预后良好的象征，对HBV感染有一定的保护作用。
近年来，随着PCR技术的日趋成熟，越来越多的应用于感染性疾病的临床诊疗中。FQ-PCR是在封闭的状态下，通过特异性探针的杂交信号检测PCR的扩增产物，具有高度特异性和敏感性，且与自动分析一体化，使检测更加简便、快捷。本组研究中，201例HBsAg阳性血清HBV-DNA检出率71.64%。HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA阳性率93.55%，HBV-DNA含量（8.70±1.98）×107IU/ml，且含量＞106IU/ml占82.76%，说明该组患者体内乙肝病毒处于高复制、高传染状态。仍有6.45%的HBV-DNA阴性者，可能是使用抗病毒药物或患者处于免疫清除阶段，HBV-DNA的清除速率比HBsAg快导致，此时，HBV-DNA降至检测水平以下，肝内仍可有HBV复制【3】。HBsAg、HBeAb、抗-HBc均阳性组和HBsAg、抗-HBc均阳性组HBV-DNA检出率为65.79%和41.67%，HBV-DNA含量（8.09±4.45）×105IU/ml和（2.19±1.59）×105IU/ml，分别有77.33%和90%的HBV-DNA含量＜106IU/ml，虽然随着HBeAg的消失，病毒处于低复制或无复制状态，但是，当PreC区发生变异，不能与C基因共同转译出完整的HBeAg，导致HBeAg表达缺失，机体感染HBV而不表达HBeAg时，同样具有传染性【4】，此种情况下，HBV-DNA的检测尤为重要。亦有一例，HBsAg、HBeAg、HBsAb、抗-HBc均阳性的HBV-DNA阳性患者，HBV-DNA含量3.01×103IU/ml，说明患者虽然出现了HBsAb阳性，但体内病毒仍在复制，可能与HBV-DNA发生突变有关，出现“免疫逃避”或不同亚型的HBV重叠感染。也有研究证明，HBsAb出现后，血清内仍有DNA复制，随着时间的推移，HBV-DNA的检出率逐渐下降。
抗病毒治疗是乙肝治疗的关键，乙型肝炎治疗时，血清HBV-DNA水平是临床评价HBV复制情况的“金标准”，且对非活动性HBsAg携带状态的判断具有重要意义，也是对治疗方案的优化和调整的重要依据【5】。因此，乙肝患者的血清学标志物常规检查联合PCR定量检测HBV-DNA含量，是对FQ-PCR的补充，前者能反应HBV感染的不同时期，提示疾病的转归，后者能更好的了解体内病毒复制水平，决定其是否需要用药，及用药方案的选择、治疗后随访及检测复发。
参考文献：
【1】Chen YS，Liang XF，Hu JF．The serum markers of hepatitis B virus（HBV）infection and the natural history of chronic HBV infection．ZhongguoYi Miao He Mian Yi，2009，15：279-283．
【2】郭卉，董瑶佳，刘晓峰，陈雪礼.乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量关系的分析[J].实验与检验医学，2010，28（4）：417-418.
【3】田沂，唐晓鹏，杨旭，罗开忠，黄力.HBV标志物定量与病毒载量关系探讨[J].第三军医大学学报，2007，29（13）：1305-1307.
【4】刘鱼，Hua Shan，王憬惺，杨通汉，贠中桥，董向东，马红丽，刘桂，柯玲，徐敏.中国献血人群感染乙型肝炎病毒PreC/BCP区的新变异[J].中国输血杂志，2012，25（9）：830-833.
【5】蒋素贞，鲁凤民，庄辉.慢性乙型肝炎病毒DNA定量检测的临床意义[J].中华检验医学杂志，2012，35（2）：117-121.
论文作者:朱萍,魏铃程,刘文清
论文发表刊物:《健康世界》2015年24期
论文发表时间:2016/3/11
标签：阳性论文; 血清学论文; 定量论文; 乙型肝炎论文; 含量论文; 标志物论文; 血清论文; 《健康世界》2015年24期论文;