（1遵义医药高等专科学校临床系 贵州 遵义 563006）
（2遵义市红花岗区疾病预防控制中心预防医学门诊 贵州 遵义 563000）
【摘要】 目的：探讨葡萄球菌肠毒素A（SEA）诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用。方法：采用荧光法观察SEA诱导HepG2细胞凋亡的形态学变化。结果：荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小，核碎裂，染色质凝集等凋亡形态改变。结论：SEA可诱导HepG2细胞凋亡。
【关键词】 HepG2；细胞凋亡；吖啶橙
【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）32-0028-02
A fluorometric method on Superantigens in inducing the apoptosis of human hepatocellular liver carcinoma cell line (HepG2) in vitro
Yang Zhitao1,Wang Dengxiu2.1. Zunyi Medical and Pharmaceutical College Clinical department ,Zunyi 563006,China;
2. Department of Preventive Medicine, Hong hua gang district center for disease control and prevention 563000,China
【Abstract】Objective To investigate the inducing effect of SEA on the apoptosis HepG2. Methods A fluorometric method was used to observe the morphological changes of cell apoptosis.Results cells were seen under fluorescent microscope shrinkage nuclear fragmentation,Chromatin morphological changes of apoptosis.Conclusions Experiments showed that SEA can induce the apoptosis of HepG2 cells.
【Key words】 HepG2; Apoptosis; Acridine orange
原发性肝癌是临床最常见的消化道恶性肿瘤之一[1]，在癌症致死因素中位居第三位[2]。肝癌的手术治愈率低，术后5年生存率为14％[3]。近年来，人们尝试用生物免疫疗法治疗原发性肝癌取得了一定的成果。根据研究显示，原发性肝癌的产生、发展和转归与肝癌细胞的凋亡有着密切的关系[4]。为此，本实验尝试用金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）来诱导肝癌细胞凋亡。
1.材料与方法
1.1 材料与仪器
肝癌细胞HepG2（遵义医学院中心实验室）；SEA（北京诺必信生物工程有限公司），使用前稀释到所需浓度；丫啶橙（天根生化科技（北京）有限公司）；荧光显微镜（Olympus）；二氧化碳培养箱（Thermo Forma 公司）。
1.2 方法
1.2.1细胞培养 HepG2复苏后，在DMEM培养液（含10%的胎牛血清），37℃，5% CO2培养箱中培养，选对数生长期的细胞进行试验，分对照组和SEA组，按2:1，每三天传代。
1.2.2HepG2细胞凋亡的荧光法观察 将对数生长期的HepG2细胞常规传代，待细胞贴壁后换液继续培养24h，加入SEA,使其最终质量浓度为0.2μg/ml，作用24h后，胰酶消化，制成细胞悬液，调整细胞数为107个/ml。取90μl细胞悬液，并加入新鲜配制的丫啶橙溶液10μl充分混匀，取1滴细胞混合液滴在干净的载玻片上，用盖玻片封片，注意不要有气泡，在荧光显微镜下观察，并拍片。
2.结果
SEA诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的形态学观察 没有加SEA作用的对照组细胞，荧光显微镜下观察为均匀的绿色，形态比较规则（图1）；加SEA作用的细胞，有大有小，凋亡细胞大多可见细胞核形态不规则，胞质浓缩，核固缩、碎裂，细胞边缘处出现大小不等的圆形或不规则的荧光颗粒（图2，3）。
图1 对照组HepG2细胞荧光情况（×100）
图2、3 0.2μg/ml SEA处理组HepG2细胞荧光情况（×100）
3.讨论
肝癌的发生既与肝细胞增殖和分化的异常有关，也与细胞凋亡异常有关[5-6]。SEA是一种不需要抗原递呈，只要极低浓度便能直接引起高效免疫活性的蛋白质[7]，使其用于诱导肿瘤细胞凋亡的研究比较多 [8-9]，但用于肝癌的研究还鲜见。
凋亡有着显著的形态学特征，吖啶橙是一种荧光色素，该色素具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒。本实验用吖啶橙染色，在荧光显微镜下观察到，通过SEA作用后的细胞和对照组细胞比较，体积变小，胞核边界不规整，核固缩、细胞核碎裂等，这些均为典型的细胞凋亡现象。
本研究显示，SEA可诱导体外培养的人肝癌细胞HepG2凋亡，其诱导凋亡的机制有待进一步探讨。
【参考文献】
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[8] Leroy EM，Becquart P，Wauquier N，et a1．Evidence for Ebola Virus Superantigen Activity J Journal of Virology,2011，85(8)：4041—4042．
基金项目：遵义市科技局课题（遵市科合字[2012]28号）。
论文作者:杨志涛,王登秀
论文发表刊物:《医药前沿》2016年11月第32期
论文发表时间:2016/11/10
标签：细胞论文; 肝癌论文; 凋亡论文; 诱导论文; 遵义论文; 荧光论文; 葡萄球菌论文; 《医药前沿》2016年11月第32期论文;