（四川省骨科医院 610041）
【摘 要】目的：采用高效液相色谱法测定化瘀止痛涂膜剂中盐酸小檗碱的含量。方法：采用Waters 1525 Binary HLPC Pump，以乙腈-O.1%磷酸溶液(50：50)(每100ml加十二烷基磺酸钠O.1g)为流动相，流速1.0 ml/min；柱温：30℃；检测波长为265nm。结果：盐酸小檗碱进样量在0.025ug—0.125ug范围内峰面积具有良好的线性关系，r=0.9991，平均回收率为98.83%，RSD=0.75%（n=9）。结论：该方法操作简便，精密度好，结果准确可靠，可用于化瘀止痛涂膜剂中盐酸小檗碱含量的测定。
【关键词】化瘀止痛涂膜剂；盐酸小檗碱；高效液相色谱法；黄柏
【中图分类号】R284.1 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）7-0217-02
化瘀止痛涂膜剂的处方由黄柏、大黄、牡丹皮等中药材组成。黄柏在处方比例中占约20%，盐酸小檗碱是其主要指标成分，因此选择盐酸小檗碱作为含量测定指标。
1 仪器与试药
1.1 仪器：电子天平，Mettler Toledo XS105；Waters 1525 Binary HLPC Pump，Waters 2487 Dualλ Absorbance Detecto；超声波提取器SB3200；超纯水机AYJ1-0501-U。
1.2 试药：盐酸小檗碱对照品，批号：110713—200911，中国药品生物制品检定所；乙腈、甲醇为HLPC级（美国Fisher），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。对照品（批号：20120607，20120614，20120616）和阴性样品（缺黄柏的化瘀止痛涂膜剂），均由我院制剂室配制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[1][2]：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-O.1％磷酸溶液(50：50)(每100ml加十二烷基磺酸钠O.1g)为流动相；色谱柱为WatersC18柱（250mm X4.6mm，5m），流速为1.0ml/min，进样量10ul，检测波长为265nm。
2.2 溶液制备
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称取5.0132mg，置于100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，待用。
供试品溶液的制备[3] ：精密量取1ml供试品，加水10ml，搅拌，有白色成膜基质析出；再加5ml水洗涤析出物，弃去不溶于水的成膜基质，合并药液过滤，水浴蒸干，加入流动相溶解并定容至100ml，备用。
阴性溶液的制备：按处方比例量取缺黄柏的药物，按照制备工艺制得成品。再精密量取1ml溶液，照供试品溶液的制备方法制得阴性溶液，备用。
2.3 系统适应性试验
阴性干扰试验：取盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液和阴性溶液，按色谱条件进样，进样量为10ul，记录色谱图，见下图。供试品色谱中盐酸小檗碱与相应对照品色谱峰保留时间一致，阴性溶液在盐酸小檗碱色谱峰处未发现吸收峰；其他组分对测定无干扰。
线性关系考察：分别精密量取盐酸小檗碱对照品溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml和2.5ml置于10ml量瓶中，以流动相定容至刻度，分别进样10ul。以进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线回归，得回归方程： Y=13597X-212.8（r =0.9991）。结果表明，盐酸小檗碱进样量在0.025ug—0.125ug范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
精密度试验：精密量取对照品溶液0.5ml，置于10ml容量瓶中，加入流动相溶解并定容至10ml。精密量取该浓度（2.5066ug/ml）的盐酸小檗碱对照品溶液10ul，重复6次进样测定峰面积。结果，平均峰面积为33920，RSD=1.76%，表明仪精密度良好。
稳定性试验：取同一批号（批号20120614）供试品溶液。分别于1、3、5、7、9小时按色谱条件进行测定。结果，峰面积RSD=1.96%，表明供试品在9小时内稳定性较好。
重复性实验：精密量取化瘀止痛涂膜剂（批号20120614）各1ml，按供试品溶液制备方法制备得6份供试液，测定盐酸小檗碱含量，结果样品中盐酸小檗碱平均含量为4.5145 mg/ml，RSD=1.37%。表明重现性良好。
加样回收率实验：精量称取已知含量的样品（批号20120614）1ml各两份，分别精密加入含量为2.5066ug/ml的对照品溶液1ml，照供试品溶液制备成供试品溶液，测定含量，计算回收率。其平均回收率为98.83%，RSD=0.75%。表明本方法回收率良好。结果见下表：
3 讨论
3.1 化瘀止痛涂膜剂是含醇可流动的粘性液体，其成膜材料为不溶于水的聚乙烯醇缩酊醛。在供试品溶液制备时，需先加入适量的纯净水搅拌使成膜材料析出，过滤后收集滤液制备成供试品溶液。
3.2 参考资料报道，针对盐酸小檗碱的含量的方法有液相色谱串联质谱法，HLPC法[3]，反相高效液相色谱[4]， HPLC-PDA法[7]和高效毛细管电泳法等，均可取得较满意的测定结果。本文采用2010年版中国药典收载的色谱条件进行含量测定，该方法操作简便，精密度好，结果准确可靠，可用于化瘀止痛涂膜剂中盐酸小檗碱含量的测定。
3.3 中药制剂成分复杂，一种指标成分不能代表整个制剂，我们采用2010年版中国药典收载的色谱条件对大黄相关指标成分进行了测定，亦有较好的结果。但因对照指标较多，操作相对复杂，故未将大黄成分作为该制剂的含量测定对象。
参考文献：
[1]国家药典委员会 中华人民共和国药典(一部)[S]．北京：中国医药科技出版社，2010：286．
[2]冯光富，郭宏彦，张嵩，等．正交实验优选化瘀止痛涂膜剂的渗漉法提取工艺[J]．内蒙古中医药，2012，31（22）：42-43.
[3]潘晓鹃，沈立．HPLC测定肿痛消涂膜剂中的欧前胡素[J]．华西药学杂志，2007，22(5)：578-579．
[6]李明月，杨惊宇，刘西京等．RP-HP LC法测定变通丸中盐酸小檗碱的含量[J]．中国药房，2011，22（27）：2555-2556．
论文作者:冯光富,郭宏彦,涂禾,朱力阳,祝贺
论文发表刊物:《河南中医》2015年7月供稿
论文发表时间:2015/10/21
标签：溶液论文; 盐酸论文; 小檗论文; 色谱论文; 黄柏论文; 精密论文; 含量论文; 《河南中医》2015年7月供稿论文;