（1.陕西省第四人民医院 陕西 西安 710043）
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【摘 要】目的：观察地塞米松对高血压脑出血大鼠模型脑组织水通道蛋白-4表达的影响。方法：将60只成年健康雄性SD大鼠均用胶原酶诱导脑出血，并随机分为2组，无干预组（n=30）、地塞米松干预组（n=30），并按时间分成6h、12h、1d、3d、5d、7d 6个亚组（n=5）。分别检测各组大鼠脑水含量和脑组织AQP4表达。结果：与无干预组相比较：1.地塞米松干预组大鼠脑组织含水量在1、3、5d时间点显著低降低（P<0.05）；2.AQP4表达水平减弱，尤其是在3d时间点（P<0.05）。结论：（1）地塞米松能减少胶原酶诱导的脑出血模型大鼠脑组织水含量；（2）地塞米松可以降低胶原酶诱导的脑出血模型大鼠脑组织AQP4表达水平。
【关键词】高血压；脑出血；地塞米松；水通道蛋白-4
【中图分类号】R459 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）6-0779-02
1 前言
近年来有许多研究发现，高血压脑出血（Hypertensive intracerebral hemorrhage，HICH) 与在脑内高度表达的水通道蛋白-4（AQP4）关系密切[1]。本实验通过建立胶原酶诱导的大鼠脑出血模型，评估应用地塞米松（DEX）后，血肿周围水肿区脑组织含水量的变化及AQP4表达的变化，并探讨水通道蛋白-4与脑水肿的相关性。
2 材料和方法
2.1动物和药品
SD健康雄性大鼠60只，体重220-250g，标准颗粒喂养和饮用纯净水，由大连医科大学动物实验中心提供。大鼠随机分为2组：胶原酶诱导脑出血组（n=30）、脑出血后地塞米松干预组（n=30）。其中胶原酶诱导脑出血组和脑出血后地塞米松干预组按造模后6h、12h、1d、3d、5d、7d时间点分成6个亚组（n=5）。从实验开始到结束，饲养室温度始终保持20-25℃和湿度恒定。保持环境安静。每三只大鼠置于一个鼠笼，大鼠可自由活动及摄食水。
2.2实验步骤
（1）制作IV型胶原酶诱导的脑出血大鼠模型[2]。
（2）胶原酶诱导脑出血
（3）地塞米松干预组 脑出血模型制成后，向模型大鼠腹腔内注射地塞米松1mg/kg/24h。
2.3观察指标及方法
AQP4的免疫组化检测
在各时间点分别对脑出血组、地塞米松干预组进行AQP4的免疫组化检测。阴性对照组用0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗进行孵育。将免疫组化的结果分为五级：阴性（-）：不着色；弱阳性(+):淡黄色；阳性（++）：黄色；中等阳性（+++）：棕黄色；强阳性（++++）：深棕黄色。用ImagePro Plus4.5图像分析软件进行图像分析，分析指标为A值。
2.4统计学处理
实验数据用均数±标准差表示，用SPSS 13.0医学统计学软件对资料进行统计分析，组间比较采用独立样本t检验，以P<0.05为有统计学差异。
3 结果
与无干预组相比较：地塞米松组12h、24h、3d、5d、7d的AQP4表达明显低于脑出血组相应时间点（P<0.05），尤其是24h、3d、5d和7d（P<0.01，表1）。
*P<0.05，**P<0.01，与脑出血组比较
4 讨论
小剂量地塞米松（DEX）已经被用来减轻创伤后脑水肿[3]。一些作者研究发现1mg/kg的剂量在获得较好疗效的同时可以避免大的副作用[4]。GC 通过结合于细胞内的糖皮质激素受体(GR) ，形成复合物进入细胞核内, 作用于DNA 的糖皮质激素反应元件(GRE) 调节基因的表达，Moon 等[5]在研究红白血病(MEL)细胞时发现，MEL细胞的AQP1启动子区域存在GRE。 但是未见GRE存在于AQP4启动子上的报道。以往的研究发现血肿周围区域的血脑屏障（BBB）短暂的、适度的开放，且已经证明这种继发的炎症性连锁反应加剧脑出血后BBB机能障碍。因此，血肿周围水肿区域表达上调的AQP4关系到BBB的破坏和炎性细胞活素类。然而，数目众多的实验证明，DXM有助于恢复BBB的完整和减少炎性细胞活素类[6]，这暗示DXE在AQP4表达方面的作用可能与这个能力有关[7]。另外，AQP4的表达促进细胞毒性脑水肿模型脑肿胀的形成。可以想象的是，DXE干预引起的AQP4表达的下调可能有利于ICH后脑水肿的液体清除。
参考文献：
[1]Qureshi AI,Tuhrim S, Broderick JP, et al. Spontaneous intracerebral hemorrage[J].N Engl J Med, 2001,344(19):1450-1460
[2]Broderick JP,Adams HP Jr,Barsan W,et al.Guidelines for the management of spontaneous intracerebral hemorrhage:A statement for healthcare professionals from a special writing group of the stroke council,American Heart Association[J].Stroke, 1999,30(4):905-915
[3]Peeling J,Yan HJ,Chen SG,et al.Protective effects of free radical in hibitors in intracerebral hemorrhage in rat [J].J Brain Res,1998,795(1/2):630-701
[4]包新民,舒斯云.大鼠脑立体定位图谱[M].北京:人民卫生出版社,1991:1-2
[5]Verkman AS, Mitra AK. Structure and function of aquaporin water channels.Am J Physiol,2000,278: F13-F28
[6]Walz T,Hirai T,Murata K,et al.The three-dimensional structure of aquaporin-1.Nature,1997,387: 624-627
[7]Frigeri A,Gropper MA,Umenishi F,Kawashima M,BrownD, VerkmanAS. Localization of MIWC and GLIP water channel homologs in neuromuscular,epithelial and glandular tissues.J Cell Sci,1995;108:2993-3002
基金项目：
陕西省科技厅基金资助 （编号：2014JM4102）
论文作者:穆学芳,管来顺
论文发表刊物:《河南中医》2015年6月供稿
论文发表时间:2015/10/21
标签：脑出血论文; 胶原酶论文; 大鼠论文; 诱导论文; 模型论文; 高血压论文; 水肿论文; 《河南中医》2015年6月供稿论文;