济南市食品药品检验检测中心 济南 250106
摘要：目的：建立对乙酰氨基酚混悬滴剂微生物限度检查方法并进行验证。方法：按照《中国药典》2010年版二部的要求，对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证。结果：对乙酰氨基酚混悬滴剂可按常规法进行微生物限度检查。结论：应对该药品的微生物限度检查建立方法并进行验证。
关键词：对乙酰氨基酚混悬滴剂；微生物限度检查；方法验证
对乙酰氨基酚混悬滴剂主要成份为对乙酰氨基酚，用于儿童流行性感冒或普通感冒引起的发热，亦用于缓解轻、中度的头痛、神经痛、牙痛、肌肉痛、关节痛等。根据该药品的成份及适应症，应对该药品的微生物限度检查方法进行验证。
1.试药、仪器与培养基
1.1 试药
对乙酰氨基酚混悬滴剂（上海强生制药有限公司，批号：150204063）
1.2 仪器
电热恒温培养箱，电子天平，高压蒸汽灭菌器。
1.3 实验用菌种
枯草芽孢杆菌［CMCC〔B〕63 501］、金黄色葡萄球菌 ［CMCC〔B〕26 003］、大肠埃希菌［CMCC〔B〕44 102］、黑曲霉［CMCC〔F〕98 003］、白色念珠菌［CMCC〔F〕98 001］，以上第三代菌种均购自山东省食品药品检验研究院。
1.4 培养基
营养肉汤培养基（1305223），pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（1303232），营养琼脂培养基（1305223），玫瑰红钠培养基（130523），改良马丁培养基（130211），北京三药科技开发公司；MUG培养基（20121126），胆盐乳糖培养基（20130326），青岛高科园海博生物技术有限公司。
1.5 供试液制备
取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
2.细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证
2.1 菌液制备
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，34℃培养24小时，取白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，26℃培养24小时，上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的菌悬液备用；取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，26℃培养7天，加入5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的孢子悬液备用。
2.2 细菌计数方法验证[1]
2.2.1 试验组 取1：10的供试液1ml注入平皿中，再分别注入1ml 2.1中制备好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌菌悬液，倾注营养琼脂培养基。
2.2.2 菌液组 各取1ml 2.1中制备好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌菌悬液，分别注入平皿中，倾注营养琼脂培养基。
2.2.3 供试品对照组取1：10的供试液1ml注入平皿中，倾注营养琼脂培养基。
2.3 霉菌及酵母菌计数方法验证
2.3.1 试验组 取1：10的供试液1ml注入平皿中，再分别注入1ml 2.1中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
2.3.2 菌液组 各取1ml 2.1中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，分别注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
2.3.3 供试品对照组 取1：10的供试液1ml注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
各试验菌分别进行3次独立的平行试验，分别计算各试验菌每次实验的回收率。各组计数及试验组的菌数回收率见表1。
2.4 结果 表1显示5株试验菌株的3次回收率均高于70%，对乙酰氨基酚混悬滴剂可用常规法进行细菌、霉菌及酵母菌计数。
3 控制菌检查方法验证[1]
3.1 菌液制备 取大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，34℃培养24小时，上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的菌悬液备用。
3.2 供试品组 取1：10供试液10ml接种至100ml胆盐乳糖培养基中，34℃培养24小时，取上述培养物0.2ml至5mlMUG培养基试管中，于5小时、24小时在366nm紫外光下观察；沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，观察液面颜色。
3.3 试验组 取1：10供试液10ml、3.1中制备好的大肠埃希菌菌悬液1ml（50-100cfu）接种至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
3.3 阳性对照实验 取3.1中制备好的大肠埃希菌菌悬液1ml（50-100cfu）至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
3.4 阴性对照实验 取pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
观察结果见表2
3.5 结果 试验组检出大肠埃希菌，表明对乙酰氨基酚混悬滴剂可用常规法进行控制菌检查。
4 讨论
通过方法验证，对乙酰氨基酚混悬滴剂可以采用常规平皿法进行细菌、霉菌和酵母菌计数，可用常规法进行控制菌检查。中国药典规定所有药品的微生物限度检查均需进行方法验证，确保所用方法适用于该药品的微生物限度检查。[2]
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［S］.中国医药科技出版社，2010，附录：附录Ⅺ J 107-116.
[2] 中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范［M］.中国医药科技出版社，2010：351-389.
论文作者:曹克任
论文发表刊物:《健康世界》2015年18期
论文发表时间:2016/3/2
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