【摘要】目的:了解腹泻儿童感染致泻性大肠埃希菌（DEC）的情况及药敏结果，为制定预防措施和治疗提供依据。方法:选取2014年1月-2016年12月住院及门诊腹泻儿童组450例，通过增菌、选择性培养基筛选、鉴定和药敏试验，分析DEC的常规血清分型、耐药率和超广谱β-内酰胺酶情况。结果:450份样本中检出29株DEC，检出率为6.4%，血清分型以肠致病性大肠埃希菌为主，占DEC的75.9%。耐药率＞50%的抗菌素有氨苄西林、复方磺胺甲恶唑、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素和头孢唑啉，而阿米卡星、头孢替坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、氨曲南有较好敏感性。产超广谱β-内酰胺酶菌株占DEC的44.8%。结论:本地区腹泻儿童致泻性大肠埃希菌以肠致病性大肠埃希菌为主，未检出肠出血大肠埃希菌。DEC对氨基西林及其复合剂、二代头孢菌素、复方新诺明耐药率较高，接近一半DEC为产超广谱β-内酰胺酶菌株。
【关键词】儿童；致泻性大肠埃希菌；药敏试验
【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）30-0145-02
致泻性大肠埃希菌（Diarrheagenic E.coli，DEC）引起人类腹泻性感染已引起全球广泛关注，根据毒力因子、致病机制、临床表现及流行病学等特征，目前主要将DEC分为六类，分别为肠出血性大肠埃希菌(EHEC)或产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)及弥散粘附性大肠埃希菌(DAEC)。为了解本地区腹泻儿童致泻性大肠埃希菌的血清型分布及药敏情况，本研究以住院及门诊腹泻儿童450份粪便样本培养结果作为对象进行分析，现报告如下。
1.资料与方法
1.1 研究对象
选择我院2014年1月-2016年12月住院及门诊，年龄16岁以下诊腹泻儿童送检大便450例作为研究对象，男童310例，女童140例，年龄中位数4.6岁。
1.2 方法
1.2.1仪器与试剂 法国生物梅里埃公司VITEK 2 Compact细菌鉴定药敏分析仪系统及配套的GN鉴定卡、AST-13药敏卡试剂。麦康凯平板、致泻性大肠埃希菌诊断血清、肠出血性大肠埃希菌O157诊断血清、质控菌株大肠埃希ATCC25922和ATCC35218、O157：H7，购自温州市康泰生物科技有限公司。mEC肉汤增菌液、山梨醇-麦康凯平板和CHROMagar?法国科玛嘉改良O157显色平板为购买半成品干粉培养基按说明书配制。
1.2.2标本来源及处理 儿科及门诊送检的稀便、水样便、黏脓便或脓血便，用一次性无菌拭子采集少量粪便直接接种山梨醇-麦康凯琼脂平板和O157显色平板上，（35±1）℃培养18～24h。同时用mEC肉汤增菌液2ml加入到拭子增菌，温度（36±1）℃，培养6h后转种于O157显色平板和山梨醇-麦康凯平板18～24h。
1.2.3可疑菌落挑取 SMAC琼脂生长时呈无色、半透明的中心灰褐色菌落可疑菌落或O157显色平板上紫红色或淡紫色、中等大小菌落，应用梅里埃VITEK2 Compact全自动细菌分析系统进行鉴定实验。
1.2.4血清型分型 通过上述试验对符合致泻大肠埃希菌的纯培养物，用相应的致泻大肠埃希菌O多价、O单价、K、H诊断血清进行血清玻片凝集试验。
1.2.5药敏试验 梅里埃AST-13药敏卡，参照试剂说明书由VITEK2 Compact分析系统自动读取数据。报告按照2014年CLSI M100-S24标准判读最终药敏结果。
1.3 统计学处理
采用WHONET 5.6统计软件。
2.结果
2.1 菌株检出率及血清型分型
450份标本分离到DEC共29株，检出率为6.4%，其中EPEC占DEC的75.%，分离出的DEC共分10种O血清型，EPEC分为6种不同血清型，主要血清型为O86：H111、O119，结果见表1。
2.3 产超广谱β-内酰胺酶菌株29株DEC中14株ESBLs阳性，构成比为48.3%。
3.讨论
DEC是引起人类腹泻病的重要病原菌[1]，全年均可发病，发达地区DEC感染率较低，北京、上海、广州和深圳报道为4.0%～9.9%[2-5]，我国西部地区报道为8.4%～19.1%[6-8]，本资料仅为6.4%，均低于西部地区水平，可能与沿用传统的培养法和血清凝集法等研究方法有关。因此，随着分子生物学检验技术的成熟和普及，有条件基层医院建立必要的分子生物学检验，对提高微生物检测能力具有十分重要意义。
本研究检测到血清凝集DEC四种血清类型，分别为EPEC、EIEC、ETEC和EHEC，没有检测肠出血性大肠埃希菌，其中EPEC占75.9%，血清型以O86、O111、O119三种为主。EPEC是引起婴幼儿腹泻和成人散发性腹泻的重要病原菌之一，在人肠道内携带率比较高，EPEC对外环境抵抗力强，适宜的温度条件能迅速繁殖，因而其导致疾病发生的概率还是难以估计的。另外非典型的EPEC（即缺少编码BFP的EAF质粒）也有可能引起持续腹泻的发生[9]，而非典型EPEC在我国的流行病学和致病性情况尚无系统研究[2]，对存在漏检非典型EPEC感染应引起重视。资料显示本地区引起儿童DEC感染主要是EPEC，与文献[3-4，7]报道一致，因此，加强区域性DEC监测能有效了解本地区DEC分布感染情况，为制定预防措施提供资料。
药物敏感试验是治疗细菌感染的重要参考依据，本资料表明中DEC对氨苄西林、复方磺胺甲噁唑、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、头孢唑啉有较高的耐药性（均＞50%），与文献的报道相似[10]，对三代和四代头孢菌素、奎诺酮类、氨曲南的耐药率较低，没有发现亚胺培南耐药株。大肠埃希菌产生耐药性是通过在体内产生出红霉素类钝化酶、氨基糖苷类灭活酶、各种的β-内酰胺酶等，经过磷酸化、水解乙酰化、修饰等作用下对抗生素的活性进行破坏来实现。DEC对第三代头孢菌素耐药主要机制是通过产生出超广谱β-内酰胺酶对含氧亚氨基的β-内酰胺类引起水解导致药物失去活性。本资料中DEC有48.3%为ESBLs阳性株，比近年文献报道的高[11]，可能与本地区使用3代头孢菌素有关，因为长期使用3代头孢菌素、喹诺酮类药物，或者同类抗生素频繁更换，也可诱导大肠埃希菌产生超广谱β-内酰胺酶。
总之，对于腹泻患者，进行致泻性大肠埃希菌检测和药敏试验同时，应对菌株进行β-内酰胺酶筛选，为临床选用疗效肯定、针对性强的窄谱抗生素进行治疗提供可靠依据，以减少耐药菌株的产生，减轻儿童抗菌素用药选择的压力。
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论文作者:吴开进,钟立,熊利巧,林世恒,温庭伟
论文发表刊物:《医药前沿》2017年10月第30期
论文发表时间:2017/11/1
标签：大肠论文; 性大论文; 头孢菌素论文; 血清论文; 菌株论文; 儿童论文; 平板论文; 《医药前沿》2017年10月第30期论文;