山东明人福瑞达卫生材料有限公司 山东济南 250104
摘要：目的 对麝香壮骨膏的微生物限度检查方法进行验证，建立合适的检查方法。方法 按照《中国药典》2010年版微生物限度检查法进行验证，金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌均为薄膜过滤法。结果 阴性对照组未检出，试验组均检出阳性菌，符合验证要求。结论 该方法消除了样品的抑菌性，可用于该品种的微生物限度检查。
关键词：麝香壮骨膏；微生物限度检查；方法验证
Abstract：Objective The method for microbial limit tests of musk Zhuanggu plaster to verify，to establish the appropriate inspection methods.Methods According to the microbial limit test method in 2010，Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa were all membrane filtration method.Results The negative control group was not detected，the test group was positive bacteria，in accord with the verification requirements.Conclusion The method can eliminate the antimicrobial activity of the sample，and it can be used for the microbial limit test of the variety.
Key words：Musk Zhuanggu plaster；Microbial limit test；Methodology Verification
橡胶膏剂是指药材提取物或药物与橡胶等基质混匀后，涂布于裱背材料上制成的传统外用制剂。具有疗效确切、粘附性强、不污染衣物、携带使用方便、透皮吸收、无痛苦等优点，在外用药市场中占有重要地位。麝香壮骨膏具有镇痛、消炎作用，用于风湿痛、关节痛、腰痛、神经痛、肌肉酸痛、扭伤、挫伤。《中国药典》2010年版规定微生物限度：每10cm2不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。由于含有具有抑菌作用的成份，对微生物限度的检测结果有影响，因此，对方法学进行验证，消除抑菌性，建立合适的的麝香壮骨膏控制菌的检查方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 SW-CJ-1F净化工作台（苏州净化设备厂）；303-1型电热恒温培养箱（上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司）；YXQG02型电热压力蒸汽消毒器（山东新华医疗器械股份有限公司）；CS202A型电热保温干燥箱（重庆试验设备厂）；YP2102电子天平（上海光正医疗仪器有限公司）；HTY-300型微生物限度过滤支架（杭州泰林生物技术设备有限公司）。
1.2 试药 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、铜绿假单包菌[CMCC（B）10104]均由山东省食品药品检验研究院提供，传代次数不超过5代。培养基为营养肉汤培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基，均由北京三药科技开发公司生产。麝香壮骨膏（批号为20150312、20150313、20150314）均为本公司生产。
2 方法[1]与结果
2.1 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时。用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10-100cfu的菌悬液。
2.2 供试液的制备 取100cm2的供试品，去掉保护层，放置在无菌玻璃片上，粘贴面朝上。用无菌纱布覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（含10ml聚山梨脂80）中，用力震荡至少30分钟，制成1︰10供试液。
2.3 控制菌检查方法的验证
2.3.1 金黄色葡萄球菌
试验组：取供试液10ml，注入微生物限度薄膜过滤器中，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液500ml分5次冲洗，在最后一次冲洗液中加入金黄色葡萄球菌的试验菌液1ml，取出滤膜，加入100ml营养肉汤培养基中。
阴性对照组：取10ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，注入微生物限度薄膜过滤器中，用上述缓冲液500ml分5次冲洗，取出滤膜，加入100ml营养肉汤培养基中。
阳性对照组：用上述缓冲液500ml分5次冲洗微生物限度薄膜过滤器，在最后一次冲洗液中加入金黄色葡萄球菌的试验菌液1ml，取出滤膜，加入100ml营养肉汤培养基中。
将上述三组培养物，于30℃～35℃培养18～24小时，必要时延长至48小时。分别划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基的平板上，30℃～35℃培养24～72小时，观察菌落形态。结果见表1。
结果表明：用薄膜过滤法，冲洗量为500ml时，阴性对照组未检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌，试验组、阳性对照组均检出阳性菌，药品对控制菌的抑菌性被消除，符合方法的验证要求。
3.讨论
因橡胶膏剂中除了主要药用成份外，基质主要为橡胶、松香、凡士林、羊毛脂等高分子材料，因此选择合适的溶剂制备供试液很关键，一般溶剂不易使背衬层、药物层分离，故选用PH为7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（含有10%聚山梨脂80）作为溶剂，选用振荡法，振荡30分钟[2]，使膏药中可能存在的菌体沉降入供试液中。
膏药成份中的冰片具有抑菌作用，对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等均有抑菌及杀灭作用，影响控制菌的检查结果，采用薄膜过滤法，冲洗量为300ml时，药品对控制菌的抑菌性没有完全消除，冲洗量为500ml时才完全消除[3-4]。所以本实验采用了薄膜过滤法，用500mlPH为7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，试验组阳性菌生长良好，显示抑菌作用消除。
本实验建立的方法有效、可行，可用于麝香壮骨膏的微生物限度检查。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中国药典2010年版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2]房 霞.麝香壮骨膏控制菌检查的方法学验证[J].中国药物经济学，2014，12：241-242.
[3]任安民，由亚宁，王小亮，等.贴膏剂微生物限度检查法研究[J].药物鉴定，2010，19（8）：40-41.
[4]欧阳卫，张文婷，鄢雷娜，等.伤湿解痛膏微生物限度检查方法的验证[J].中国药事，2014，28（12）：1303-1305.
论文作者:王,春,马,双,王,焕,鲁英姿
论文发表刊物:《健康世界》2015年15期
论文发表时间:2016/5/25
标签：微生物论文; 培养基论文; 限度论文; 葡萄球菌论文; 缓冲液论文; 氯化钠论文; 麝香论文; 《健康世界》2015年15期论文;