于君丽[1]2002年在《钙离子和维生素D_3对宫颈癌细胞增殖的影响》文中认为前言 钙离子(Ca~(2+))是细胞内最普遍而重要的信号转导成分，细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]_i)的变化在调控细胞的基因转录，DNA合成、DNA修复以及有丝分裂等一系列生理病理过程中起着重要作用，与细胞增殖、基因突变以及肿瘤细胞的发生发展密切相关。研究表明，低Ca~(2+)易诱发恶性肿瘤，维生素D_3(VD_3)一方面作为促进钙吸收的活性物质，通过与钙的协同效应发挥抗肿瘤作用；另一方面，VD_3通过与维生素D受体(VDR)的结合，改变基因转录的速度，从而调节细胞的增生、分化和凋亡。本实验研究拟通过四甲基唑盐比色法(MTT)及同位素放射自显影法(ARG)检测Ca~(2+)及VD_3对人宫颈癌细胞增殖的影响，探讨Ca~(2+)和VD_3在宫颈癌细胞增殖过程中的调控作用。 材料与方法 1．实验材料 人宫颈癌细胞株Hela细胞为中国医科大学细胞生物实验室惠赠；人宫颈癌组织取材于中国医科大学附属第一医院妇产科；~3H-TdR，原子核乳胶购于中国原子能研究所；HPMI1640培养基购于life technology USA；96孔培养板、MTT、胰酶购于华美生物工程公司；新生小牛血清购于天津生化制品厂。其它试剂均达分析纯。 2．实验方法 2．1 细胞实验部分 Hela细胞株在含10％小牛血清的RPMll640培养液中（内含0．1％青霉素、链霉素）培养并置于 5％CO卜95％空气＊7℃孵箱内，待细胞长满后，用 0．25％胰酶消化，传代培养。将 Hela细胞制成 lx 10’cells／Inl细胞悬液，置 96孔培养板内，100冲孔，，37℃，5％CO。条件下培养24 ／J’时，进行下述实验。实验分为：不同 Ca卜浓度处理组；VD。处理组；Cak与VD。协同处理组；维拉帕米（VP）与 Ca人共同作用组JP与 VD。及 Caz”共同作用组等实验组，同时设立空白对照组。对照组只加人RPMll640培养液，最后使各孔的终体积相等。37t下继续培养，分别在培养的6在4／8＊2小时后加人 ig／L的 MrIT；20wIL，继续培育4小时，弃去培养液，加入二甲基亚现，＊0卜V孔，微振荡15分钟，置酶标仪上，在波长为490urn时测吸光度则D）值。 2．2 临床标本实验部分 在无菌条件下取新鲜的宫颈癌组织快速放人4℃含RP－Mll640培养液的平M中，在 5分钟内将材料分切成 lx 3nun的小块。将标本放人含10％小牛血清RPMll640培养液的培养皿中继续培养。实验分组为：肿瘤细胞对照组；高 Ca厂作用组；VD。作用组；高 Ca卜十VD3组；Ca卜通道阻滞组 1：VP＋Ca卜；Ca卜通道阻滞组人VP＋Caz”＋VD如对照组为单纯 nyMll640培养液，最后使各平皿中溶液的终体积相等。将培养皿置于 5％CO卜95％空气。37℃孵箱内，培养72小时。将各培养皿中的液体及标本收集于小瓶中，并做好标记，向各小瓶中加人’H－TdR人 pCirlnl，将小瓶放人37t恒温箱内的磁力搅拌器上，缓慢搅拌90分钟，取出小瓶后去掉上清液，在常温下用10nd不含小牛血清的培养液冲洗叁次。经梯度酒精脱水、浸腊、包埋、切片制成 7 pm的石蜡切片，暗室内涂乳胶，放人4℃冰箱内曝光ZI天，经显影、定影＼染色＼封片后于显微镜下观察细胞标记情况。在各组切片中，随机取5个视野，计数每100个细胞中标记细胞的个数。 ·二· 结 果 1．M’IT比色法检测不同药物对Hela细胞增殖的影响 各组药物作用于Hela细胞6 ／J’时后对其增殖的影响与对照组相比无统计学意义；而作用24 ／J’时后，10mM，20mM的h‘均使细胞的生长速度减慢，抑制率分别为10％，15％；随着作用时间的延长，进一步抑制其生长速度；72h后，10mM在0mM的Cak对He－la细胞的抑制率分别达15％30％。而ZInM的Cah在各个时间点对Hela细胞的生长速度均无显着影响。加 VD。于各浓度的Ca卜中，作用于 Hela细胞，24小时后，Hela细胞的生长速度减慢，抑制率分别为5％在0％J4％，且随着作用时间的延长，抑制率增加，72 ／J’时后各组的抑制率分另为12％J2％j4％。Ca卜对Hela细胞增殖的抑制作用具有浓度、时间依赖性，VD。对其有协同效应。VP可桔抗hh对Hela细胞增殖的抑制作用，而对VD。的作用不明显，提示外钙内流是高钙引起的抑制细胞增殖作用的一个主要途径，而VD3起的抑制细胞增殖的作用则与外钙内流不甚相关，提示可能有其它机制的参与。 2．同位素放射自显影检测不同药物对宫颈癌组织细胞标记率的影响 如照片所示，与对照组（Pie．l）相比，20mM Ca八（Pie．2）可使细胞的标计率下降，但100nM VD／Pie．3你对细胞的标记率无显着的影响，但可促进 20mM Cah的作用，与 CaZ”协同进一步使细胞的标记率下降瞩．4人 如图H．5所示JP可桔抗 Cak降低细胞标记率的作用，使之与对照组相比较无显着差别，说明高钙引起的外钙内流作用被VP阻断后其抑制细胞增殖的作用随之被取消，若 VP与 Ca人及VD。同时作用，则VP不能完全阻龈者引起的抑制细胞增殖的作 ·3·用，说明 VD。协同
于君丽, 刁尧, 郭科军, 于成国, 关福兰[2]2005年在《钙与维生素D_3抑制人宫颈癌细胞和组织增殖作用的相关性研究》文中进行了进一步梳理目的:检测不同浓度与作用时间的钙离子(Ca2+)对HeLa细胞增殖与宫颈癌组织3H-TdR掺入的影响,同时检测维生素D3(VD3)的协同作用与维拉帕米(VP)的拮抗作用,探讨Ca2+抑制宫颈癌细胞与组织增殖的可能作用机制。方法:应用MTT法检测HeLa细胞在各作用因素存在时的增殖水平;应用同位素放射自显影检测新鲜人宫颈癌组织在各刺激因素存在时的3H-TdR掺入水平。结果:Ca2+具有抑制HeLa细胞增殖和宫颈癌组织3H-TdR掺入作用,VD3可明显协同增强Ca2+的抑制作用,VP可明显拮抗Ca2+的作用、部分拮抗VD3的协同作用。结论:Ca2+具有剂量与时间依赖性抑制宫颈癌细胞与组织增殖的作用,其作用机制与促进细胞外钙内流相关;VD3的协同抑制作用不仅与促进细胞外钙内流相关,还存在其它机制有待探讨。
孙子茜[3]2017年在《活性维生素D调节DDX4抑制卵巢癌侵袭的研究》文中认为实验目的:观察活性维生素D对卵巢癌的影响,研究活性维生素D通过调节DDX4抑制卵巢癌侵袭的作用。研究方法:在SKOV3细胞培养基中加入不同浓度的活性维生素D(50ng/ml,100ng/ml,200ng/ml,400ng/ml,800ng/ml),并用CCK-8试剂盒检测活性维生素D对SKOV3细胞增殖的影响,从而确定100ng/ml浓度的活性维生素D进行后续实验。同时,利用si-RNA技术敲减SKOV3中DDX4的表达,并且经qPCR分析敲减的效率后,最终确定siDDX4-121来完成后续实验。对于不同处理后的SKOV3细胞,采用Western blot和qPCR的方法分别从蛋白水平和mRNA水平检测活性维生素D对DDX4表达的影响。此外,利用Transwell的方法检测不同处理对SKOV3细胞的侵袭性的影响。结果:1.在体外实验中应用活性维生素D后,SKOV3细胞的侵袭性下降;2.敲减DDX4后,SKOV3细胞的侵袭性下降;3.体外实验中应用活性维生素D后,SKOV3细胞中DDX4的表达量在蛋白水平及mRNA水平上均降低。结论:维生素D不仅能够抑制卵巢癌细胞的增殖,还可通过下调DDX4的表达影响卵巢癌细胞的侵袭。由此推断,维生素D在抑制卵巢癌转移的治疗中存在着不可忽视的潜在价值。
温莹荧[4]2007年在《1.7-羟基-2-乙基-4’-甲氧基异黄酮衍生物的合成和药理活性初探 2.二苯基氧化膦的合成工艺改进》文中进行了进一步梳理异黄酮是一类分布较广的天然化合物，具有广泛的生理活性，是许多药用植物的有效成分之一，在心血管系统、内分泌系统、抗肿瘤以及抗骨质疏松症等方面的作用已经得到广泛的认同。本课题组曾在其结构修饰方面做了许多工作，并发现了2-甲基-7-哌啶乙氧基-4′-羟基异黄酮和2-乙基-7-哌啶乙氧基-4′-羟基异黄酮具有抗肿瘤活性。本论文作者延续本课题组对异黄酮的修饰思路，以两个药理活性较好的异黄酮化合物，即7-羟基异黄酮和7-羟基-2-乙基-4′-甲氧基异黄酮为母体，设计将吗啉、哌啶、腺嘌呤叁种碱性基团和母体在7位成醚，并对得到的化合物进行初步的药理活性筛选。采用如下的路线合成了母体。作者通过对文献的考察，设计了8个目标衍生物及相应的合成路线，最终按图1-2及图1-3路线合成了8个目标化合物。所获得的化合物结构分别经熔点、~(13)CNMR、~1HNMR或质谱确证。此外，还对几个以腺嘌呤取代的目标化合物(化合物5-8，见图3-2)的合成方法做了初步改进，简化了方法，提高了收率。在全过程中共合成了18个化合物，其中10个未见报道。另外还对8个目标衍生物进行了初步的药理活性试验，发现7-(2-腺嘌呤)乙氧基-2-乙基-4′-甲氧基异黄酮和7-(2-羟基-3-哌啶)丙氧基-2-乙基-4′-甲氧基异黄酮均有较好的抑制人乳腺癌MCF-7细胞和人宫颈癌hela细胞生长的药理活性。二苯基氧化膦是一种重要的有机合成中间体。目前工业生产的方法，总的来说，使用的试剂都十分昂贵，并且要求在绝对无水、无氧的条件下进行，大规模合成有一定难度。因此，改进二苯基氧化膦的合成方法，开发操作相对简单、成本较低的工艺路线，具有一定的实用意义。我们通过对文献的考察，设计以一锅煮法合成目标物，并对该方法的具体反应条件进行了探索。本方法以较为廉价的PCl_3、苯为原料，在AlCl_3的催化下，以一锅煮法合成目标物，提高产品收率到21％，且工艺路线较简化，但对目标物的精制方法还需进一步研究。
唐渊[5]2004年在《莪术醇对肝癌、结肠癌的影响及机理研究》文中研究指明化疗药物是治疗肿瘤的重要手段,具有显着的抗肿瘤作用;但同时对正常细胞也有明显的毒性作用,在临床使用中不良反应多而严重。因此,创制新型抗肿瘤药物十分必要。莪术油是传统中药莪术的挥发油,主要含莪术醇、β-榄香烯等成分,其中莪术醇含量最高。临床有报道莪术醇对宫颈癌有较好的疗效,且无明显不良反应。而β-榄香烯虽也有抗肿瘤作用,但同时具有多种副作用,限制了其应用。本实验自行提取莪术醇,制备莪术油和莪术醇的脂质体,并研究其对肝癌和结肠癌的作用及机理,为临床上利用莪术提取物治疗肿瘤提供理论依据。方法:实验采用低温结晶、回流的方法提取莪术醇;鉴定后利用机械分散和超声波结合法制备莪术醇脂质体和莪术油脂质体。体外培养HepG2肝癌细胞和HT-29结肠癌细胞。用生长曲线和MTT法观察莪术醇、莪术油和β-榄香烯对两种细胞生长的影响;用Hoechst 33258/PI双染色、激光共聚焦观察法和DNA凝胶电泳法测定细胞凋亡情况;分别采用RT-PCR、免疫组化法测定HepG2细胞和HT-29细胞中COX-2 mRNA和VEGF mRNA表达情况、荷H22细胞小鼠肿瘤组织中COX-2和VEGF的表达情况。结果:自行从莪术油中提取出莪术醇,得率为2.574%。莪术醇和莪术油脂质体颗粒大小主要集中在直径100~1000nm,包封率分别为86.2%和74.5%。生长曲线显示27 μg/ml莪术醇可明显减少第6、7天时HT-29细胞数和第6天时HepG2细胞数;MTT法也显示莪术醇(9～80μg/ml)可剂量依赖性地抑制HepG2细胞和HT-29细胞的生长。莪术油和β-榄香烯也可抑制HepG2细胞和HT-29细胞的生长。100mg/kg莪术醇可显着抑制荷瘤小鼠肿瘤增长,抑制率为51.03%(p<0.05),且与莪术油和β-榄香烯相比,差异不显着。27 μg/ml莪术醇,27 μg /ml莪术油,10 μg /ml β-榄香烯作用于HT-29和HepG2细胞12h,均可引起两者产生DNA“梯状带”的凋亡现象。用Hoechst 33258/PI双染色及激光共聚焦观察凋亡细胞,结果显示,莪术醇、莪术油、β-榄香烯都可引起HepG2和HT-29细胞凋亡率明显增加(p<0.01),其凋亡率分别为30.2%、12%、25.2%和38%、22.4%、44%。<WP=9>在荷瘤小鼠肿瘤组织中,VEGF和COX-2都有表达,在细胞浆中呈棕色颗粒或团块。莪术醇(100 mg/kg)可明显减少COX-2和VEGF的表达,抑制率分别为31.5%(p<0.01)和43.0%(p<0.01),效果优于莪术油。莪术醇(9,27,80 μg/ml)、莪术油(9,27,80 μg/ml)和β-榄香烯(10,30 μg/ml)能显着降低HepG2细胞和HT29细胞VEGF mRNA表达量(p<0.05)。80 μg/ml的莪术醇、80 μg/ml莪术油、30 μg/ml和10 μg/mlβ-榄香烯可明显减少HepG2细胞COX-2的表达量(p<0.05)。80μg/ml和27μg/ml的莪术醇、30 μg/ml和10 μg/mlβ-榄香烯显着降低HT29细胞COX-2的表达量(p<0.01);而莪术油各剂量无明显效果。结论:成功地从莪术油中提取出莪术醇,并制备成莪术醇和莪术油脂质体。莪术醇能明显抑制体外培养的HT-29和HepG2细胞生长,抑制作用呈时间剂量依赖性。莪术醇能明显抑制 H22荷瘤小鼠肿瘤的增长。莪术醇在体外可诱导HT-29和HepG2细胞凋亡。莪术醇可明显抑制 H22荷瘤小鼠肿瘤组织中VEGF和COX-2的表达。莪术醇在体外可抑制HT-29和HepG2细胞COX-2 mRNA和VEGF mRNA的表达。
参考文献：
[1]. 钙离子和维生素D_3对宫颈癌细胞增殖的影响[D]. 于君丽. 中国医科大学. 2002
[2]. 钙与维生素D_3抑制人宫颈癌细胞和组织增殖作用的相关性研究[J]. 于君丽, 刁尧, 郭科军, 于成国, 关福兰. 中国医科大学学报. 2005
[3]. 活性维生素D调节DDX4抑制卵巢癌侵袭的研究[D]. 孙子茜. 苏州大学. 2017
[4]. 1.7-羟基-2-乙基-4’-甲氧基异黄酮衍生物的合成和药理活性初探 2.二苯基氧化膦的合成工艺改进[D]. 温莹荧. 四川大学. 2007
[5]. 莪术醇对肝癌、结肠癌的影响及机理研究[D]. 唐渊. 第叁军医大学. 2004
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