【关键词】橘皮；黄酮类化合物；提取条件；解酒
【课题项目】长沙医学院大学生创新创业训练计划项目；项目编号：长医教(2019) 61号-111
1材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1材料
24只雄性小白鼠，若干橘子皮，蒸馏水，肝素，10％、30%、50％的乙醇，10％的酒精，0．3 mL .50 s／L NaN02 溶液，11.55g Tris，0.1mol/l Hcl，NaoH，0．3 mL 100 g／L Al(NO2)3，4.299gNAD+，60.24mgADH，芦丁。
1.1.2仪器
酒精灯，烧杯，玻璃棒，试管，灌胃器，铁架台，漏斗，离心机，分光光度计，注射器(取血)，圆底烧瓶、锥形瓶，夹子，冷凝管，胶头滴管，沸石，水浴锅，蒸发皿，三脚架，石棉网，温度计，比色卡，牛角管，滤纸，移液枪，分析天平。
1.2 黄酮类化合物的提取
取若干橘子皮，将其粉碎榨汁，提取液经离心，以体积分数为50%的乙醇作为溶剂加热提取橘子皮中的黄酮类化合物，回流提取3次，并用比色法测定黄酮类化合物的含量，过滤、浓缩、再离心后得到的黄酮类化合物，平均分为0.1ml和0.2ml各8组。
1.3 黄酮类化合物含量测定
标准曲线的制作：称取芦 丁20 mg，用10％乙醇溶液定容至25 mL，备用。取7支具塞试管，分别加入0、0．5、1．0、1．5、2．0、 2．5、3．0 mL芦丁标准溶液，用30％乙醇溶液补足体积至5 mL，混匀，各加入0．3 mL .50 s／L NaN02 溶液，混匀，静置5 min，加0．3 mL 100 g／L Al(NO2)3溶液，混匀后静置6 min，加人4 mL l mol／L NaOH溶液，再加入0．4 mL 30％乙醇溶液使总体积为10 mL，混匀后静置10 min，用 UVl000紫外。可见分光光度计在510 nm处测量吸光度。以吸光度(A)为横坐标，芦丁质量浓度 (p芦丁)为纵坐标绘制工作曲线。用最小二乘法作线性回归，得芦丁浓度Y与吸光度值x的关系曲线，回归方程为：Y=0.768x-0.0012，相关系数R2=0.9999，相关系数R2=0.9999同法测定样品液中黄酮的含量为：
黄酮含量／(mg·g-1)=
其中：X是1 mL提取液中总黄酮的质量(mg)；V1是提取液总体积(mL)；Vg是测定用样品液体积 (mE)；W是总质量[2]。
1.4 芦丁标准曲线的制作
表1 芦丁浓度和吸光度测量结果
图1 芦丁测定标准曲线
1.5 小白鼠的灌胃
把24只雄性小白鼠等分为3组，使用10％酒精以每次0.13ml/10g为标准进行灌胃。实验分三组，第一组加蒸馏水，第二组加一倍的黄酮类化合物，第三组加两倍的黄酮类化合物。每天中午进行灌胃，半个小时过后眼部取血。
1.6 测定小白鼠体内酒精含量
1.61 试剂R1的配制
将11.55 gTris溶于90mL蒸馏水中，检测前与18ml 0.1 mol/L HCL混合均匀，用NaOH滴定至pH10.5，得到Tris-HCL缓冲液。4.299gNAD+溶于108 mL Tris-HCL缓冲液中，混合均匀，得到Rl。试剂R2配制：将60.24mg的ADH溶于24mL蒸馏水中，得到R2。
1.62 取血
血液置于肝素钠抗凝管内,3000r/min离心6min，取上清液为样品。然后按如表步骤加入试剂，混匀，延迟30s后在波长340nm处，连续监测60s各管吸光度变化，并计算平均每分钟吸光度变化率△M/min。乙醇浓度：ALC(mmo/L)=(样品管△A/min)/标准管△A/min)×乙醇标准液浓度。
1.63按照下表2加入试剂
1.7 统计学分析
本研究采用均数±标准差（）对定量资料进行统计描述，不同组间的差异性采用方差分析。假设检验水准均设为双侧α=0.05。上述分析均采用SPSS22.0软件包实现。
2 结果与分析
2.1 黄酮类化合物浓度测定
根据3.1公式测定黄酮类化合物含量=6.843X2.039+0.056=14.009 mg/ml
2.2 乙醇浓度结果分析
研究结果显示，第1组的乙醇浓度平均为1.90±0.017 mmo/L，第2组平均为1.672±0.014 mmo/L，三组比较差异有统计学意义(P<0.001),第1组乙醇浓度>第2组>第3组。
表3 不同组间乙醇浓度分析结果
3结 论
橘皮提取物黄酮类化合物具有解酒作用，并且在适当的范围内，黄酮类化合物含量越高，解酒效果越好。
根据乙醇在肝脏中的代谢机制特点，当前解酒饮品的解酒功效主要表现在以下2个方面:①抑制乙醇在胃肠道的吸收并加速乙醇在胃内的代谢，从而降低血液中乙醇的浓度;②增加肝脏内乙醇代谢相关酶类的活性，如乙醇脱氢酶(ADHD、乙醛脱氢酶(ALDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),加快乙醇在肝脏内的氧化代谢速率，消除代谢产生的自由基和脂质过氧化物对机体的损伤。
酒精主要在人体的肝脏中代谢缓慢，因为酒精中毒就是在第一个反应中快速生成了大量的乙醛，容易产生乙醛大量积累而中毒。因此，如何加速氧化和代谢在第一个反应生成的乙醛，是解决酒精中毒的关键[1]。该实验利用橘子皮来提取黄酮类化合物，方法容易，材料简单，经费消耗低，而且能高效率提取黄酮类化合物来制作解酒产品。
【参考文献】
[1] 范丽，国内天然解酒饮品研究现状，农产品加工（上半月），2015, (5)：73-74,76
[2] 王芳 淡小艳，橘皮黄酮提取的响应面优化及抗氧化活性研究，浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华，2012，35(1) ：92-98
论文作者:吴建波
论文发表刊物:《中国医学人文》2019年11期
论文发表时间:2019/11/29
标签：乙醇论文; 黄酮论文; 浓度论文; 类化合物论文; 芦丁论文; 溶液论文; 光度论文; 《中国医学人文》2019年11期论文;