潘涛1 常明泉2（通讯作者）
（1湖北省郧西县人民医院 湖北 郧西 442600）
（2湖北医药学院附属太和医院 湖北 十堰 442000）
【摘要】 目的：建立HPLC法测定维地西林涂剂中阿莫西林含量的方法。方法：色谱柱为C18柱；流动相0.05moL·L-1磷酸二氢钾溶液-乙腈（97.5:2.5）；流速1mL·min-1；检测波长254nm，柱温30℃。结果：阿莫西林在0.05～0.45mg·mL-1范围内呈良好的线性关系，曲线方程为y=44.5799x+0.188,r=0.9999，平均回收率为 97.6%，RSD为0.99% (n=9)。结论：该法用于维地西林涂剂中阿莫西林含量的测定，方法简便，结果重现性好，适用于该制剂的质量控制。
【关键词】 维地西林涂剂；HPLC；阿莫西林
【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）23-0369-02
维地西林涂剂是太和医院的在研制剂，该制剂由阿莫西林、维生素B2、地塞米松、丁卡因和清鱼肝油组成，具有抗菌消炎、促进口腔溃疡愈合，减轻疼痛的作用，用于治疗口腔溃疡疾病。阿莫西林是一种最常用的半合成青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素，在该涂剂中主要用于抑制敏感细菌引起的感染，是该涂剂的主药成分，为了确保临床用药安全有效，本实验应用高效液相色谱法测定其含量，为该制剂建立系统质量控制方法奠定基础。
1.仪器与试药
戴安U-3000型高效液相色谱仪（美国戴安公司）; UP5200HE超声波清洗器（熊猫集团南京电子计量有限公司，500W，40KHZ）；FA2004电子天平（上海上皿电子天平厂，精度：0.0001g,）；PHSJ-4A型PH计（上海雷磁仪器厂）；WGA-UNI-10型超纯水器（功率：300W，北京普析通仪器有限责任公司）；阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，批号 130409-201011）；阿莫西林原料（哈药集团三精明水药业有限公司，批号：20140926）；维生素B2原料（华中药业股份有限公司，批号：20141207）；地塞米松原料（浙江仙居制药股份有限公司，批号：20130755）；2%丁卡因溶液（十堰市太和医院，批号：20150214）；清鱼肝油（厦门市鱼肝油制药公司，批号20140522 ）；维地西林涂剂（湖北医药学院附属太和医院，批号：20150507,20150508,20150509）；乙腈为色谱纯，氢氧化钾、磷酸二氢钾、甲醇、冰醋酸均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 维地西林涂剂的制备
将阿莫西林、地塞米松、维生素B2分别用乳钵研磨后过筛（80目）、称重，混合均匀，将丁卡因溶液与一定量清鱼肝油混合，混合液按等量递加法分3次加入药粉中研磨混合均匀，最后加清鱼肝油至全量，研磨均匀呈混悬液，即得。
2.2 阿莫西林含量测定
2.2.1色谱条件[2] 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 0.05moL/L磷酸二氢钾溶液（用2moL/L氢氧化钠溶液调节pH值至5.0）-乙腈（97.5：2.5）为流动相；流速:1mL·min-1,检测波长254nm,柱温30℃[1]。
2.2.2溶液的制备 （1）对照品溶液：精密称取阿莫西林对照品25mg于50mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度，即得0.50mg·mL-1的对照品溶液。（2）供试品溶液[3-4]：取维地西林涂剂适量，振摇使样品混合均匀，精密吸取混悬液1.0mL (约相当于阿莫西林25mg)于100mL容量瓶中，用流动相洗涤移液管3次，洗涤液并入上述容量瓶中，至移液管内壁无样品附着，再加流动相至约80mL，超声处理5min，放冷至室温，滤过，取续滤液，即得。（3）空白溶液：精密吸取不含阿莫西林的维地西林涂剂，按供试品溶液制备方法制备溶液，即得。
2.3.3系统适用性试验 分别取“2.2.2”项下的各溶液，在“2.2.1”色谱条件下取20μL进样，记录色谱图，结果对照品及供试品溶液在相同时间有同样吸收峰出现，空白溶液无吸收峰出现，说明制剂中的其它成份对阿莫西林含量测定无干扰，见图1。
A B C
A 对照品溶液 B 供试品溶液 C 空白溶液 1阿莫西林
图1高效液相色谱图
2.3.4曲线方程的建立 分别取“2.2.2”项下对照品溶液(0.50mg·mL-1)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL于10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得0.05、0.15、0.25 、0.35、0.45mg·mL-1的溶液，各溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，在“2.2.1”色谱条件下进样，重复操作3次，以峰面积为纵坐标，浓度为橫坐标进行线性回归,得曲线方程为：y=44.5799x+0.188,r=0.9999，结果阿莫西林在0.05～0.45mg·mL-1浓度范围内呈良好的线性关系。
2.3.5精密度试验 取浓度为0.25mg·mL-1的对照品溶液，在“2.2.1”色谱条件下连续进样6次，记录峰面积，结果RSD为0.59%。表明仪器精密度良好。
2.3.6稳定性试验 取“2.2.2”项下的供试品（批号为20150507）溶液在“2.2.1”色谱条件下分别在0,2,4,6,12 h进样，测定阿莫西林峰面积，计算含量，结果RSD为1.31%，表明含阿莫西林在12h内稳定。
2.3.7重复性试验 取同一批号（20150507）的维地西林涂剂6份，每份1ml，按“2.2.2”项下供试品溶液方法制备溶液，在“2.4.1”色谱条件下测定峰面积，计算含量，结果为24.99 mg·mL-1，RSD为1.08%。
2.3.8回收率试验 分别精密吸取”2.2.2”项下已测知含量的维地西林涂剂0.5mL于100mL容量瓶中, 用流动相洗涤移液管3次，洗涤液并入上述容量瓶中，至移液管内壁无样品附着，共9份，分别按80%、100%、120%各精密加入阿莫西林对照品溶液，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备溶液，在“2.2.1”条件下进样，测定峰面积，计算阿莫西林回收率，结果见表1。
表1 维地西林涂剂中阿莫西林回收率实验结果（n=9）
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3.讨论
维地西林涂剂组方中的阿莫西林是目前临床应用最为广泛的抗生素之一，抗菌谱广，可有效控制各种致病菌的感染[5]；维生素B2能帮助消除口腔内、唇、舌的炎症；地塞米松为糖皮质激素类药物，具有抗炎、抗过敏作用，能够促进溃疡部位愈合；丁卡因为局麻药，能缓解口腔溃疡的局部疼痛症状。由以上四种成分与清鱼肝油制备而成的维地西林涂剂具有协同增效的作用。综合多因素考虑，选择阿莫西林做为该制剂的定量控制指标。
因阿莫西林在水中微溶，在清鱼肝油中不溶且为分散混悬状态，在磷酸盐缓冲液(pH=5) 中的则可完全溶解, 样品在溶剂中的溶解程度对测定结果影响较大[6-7]，故含量测定制备供试品溶液时，必须用流动相反复冲洗移液管内壁，至无残留物为止，为加速其在流动相中的溶解，取样后先应用超声处理后再定容。该方法用于维地西林涂剂中阿莫西林的含量测定，方法简便、结果重现性好，适用于该制剂的质量控制。
【参考文献】
[1]鲁海燕，张龙，冯锁民，孙文基.中药治疗口腔溃疡的研究进展[J].齐齐哈尔医学院学报,2009,30(19):354-356.
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[3]湖北省医院制剂规范[S],1999年版：132-133.
[4]周妮，宋金春.复方阿莫西林胶囊的制备与质量控制[J].医学导报，2012，4（4）：491-493.
[5]陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学，人民卫生出版社，2004年6月第15版:52-52.
[6]张美怡，林祖文，张俊芳.HPLC法测定阿莫西林胶囊的含量不确定度分析.中国药师，2009，12（8）：8-10.
[7]秦莉.注射用阿莫西林钠舒巴坦钠含量测定[J].广东药学院报，2007，17（3）：188-189.
论文作者:潘涛1,常明泉2（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2016年8月第23期
论文发表时间:2016/8/10
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