湖南省肿瘤医院 湖南长沙 410000
【摘 要】目的：对乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞分析检测方法进行对比研究分析。方法：在本文的试验当中是采取了回顾性的资料分析，分析在我院入院治疗的47例乳腺癌患者，其中有24例患者是早期原发性乳腺癌，其他23例患者是为转移性乳腺癌。在本次试验当中对乳腺癌患者的外周血循环进行检测是有着3种不同的分子学检测方法，检测患者单一逆转录荧光定量聚合酶链反应等诸多分子之间的阳性率，进行分析之后可以对比乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞的一致性。结果：在本次试验之后，通过三种不同的分子学检测方法检测到早期乳腺癌患者24例当中，检测到的患者早期乳腺癌阳性率是为16.6%，25%，33%。结论：不同的的分子学检测方法所得到的检出率不具有相关性，应该对CTC的数量以及自身的性质进行分析，找出导致CTC检出率具有差异性的原因。
【关键词】乳腺癌；外周血循环；分子学检测
乳腺癌在现今是导致女性死亡率最高的几种疾病之一[1]，随着对乳腺癌外周血循环的研究与分析导致对乳腺癌的检测方法出现了变革。RT–qPCR是较为常见的分子学检测方法[2]，所得到的数据也是较为准确的，RT–qPCR进行检测可以检测到原发性乳腺癌患者的检测率为10%到40%，而17%到90%是转移性乳腺癌患者的检测率。为了分析导致结果差异的原因，本文使用三种不同的分子学检测方法，现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料
采取了回顾性的资料分析，分析在我院入院治疗的47例乳腺癌患者，其中有24例患者是早期原发性乳腺癌，其他23例患者是为转移性乳腺癌。患者的年龄主要集中在32岁到57岁之间，在本次试验的47例患有乳腺癌的女性当中，年龄在18岁到29岁的患者有23人，占到多数。但是患者的年龄在本次试验当中对试验所得到的结果没有显著的影响，患者患有乳腺癌并且进行治疗的疗程基本相似，患者没有其他明显的转移疾病，并且没有其他肿瘤的患病历史，患者保持着较好的生活作息与习惯。
1.2试验方法
取患者静脉血，弃去最开始的1ml之后，对所采集到的样本用淋巴细胞的分离液进行分离，得到有核细胞。继而采用RT–qPCR法进行检测，分析CTC当中的BCL-2的表达情况，在分析仪上进行测定目标可以得到2ul缓冲液，使用RT–qPCR进行单一检测在目前是最为有效的一种方法。使用氯化镁，牛血清白蛋白等进行聚合，可以实现循环，循环条件为：95 ℃ 3 min；45个循环的95 ℃ 10 s，退火55 ℃ 20 s，延伸72 ℃ 30 s，β–actin为内对照。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆RT–qPCR多重检测所检测到的CTC可以得到较为显著的结果，RT–qPCR多重检测主要是对BCL进行多重检测，因此所得到的引物实际上是与其RT–qPCR检测所需要的引物之间有着显著的差异性，得到的检测结果也和RT–qPCR有所不同，多重检测之后可以得到扩增反应体系，2ulPCR可以合成缓冲液，所得到的缓冲液进行分析可以看到其中包含氯化镁2.5 μl（25 mmol/L），0.4 μl的脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy–ribonucleoside triphosphate，dNTP）（10 mmol/L），0.8 μl BSA（10 μg/μl），0.4 μl DNA聚合酶，1 μl 8种引物（10 μmol/L），8个双杂交探针0.5 μl（4 μmol/L）和DEPC–H2O（加至10 μl）。除了以上两种分子检测方法以外，还有最后一种分子检测方法，则是AdnaTest BreastCancer?试剂盒，相比较其他的检测方法，使用AdnaTest BreastCancer?试剂盒主要是对多重检测当中出现了逆转产物进行分析。
2结果
在本次试验当中，通过三种不同的分子学检测方法检测到早期乳腺癌患者24例当中，检测到的患者早期乳腺癌阳性率是为16.6%，25%，33%，可以看到患者检测结果是与本次试验之间有着较为显著的关系，三种分子学的检测方法之间是有着较为显著的区别，因此在试验当中所得到的差异是有着显著意义的。3种分子学方法检测健康体检者的CTC阳性率分别与良性乳腺癌和早期原发乳腺癌比较，之间的差异是具有统计学意义。在本次试验当中，可以看到，转移性乳腺癌的CTC阳性率与健康体检者、良性乳腺疾病及早期原发性乳腺癌比较，差异均有统计学意义。
使用RT–qPCR和AdnaTest BreastCancer?试剂盒进行检测之后，两种检测方法所得到数据接近一致的比例在47例当中为32例，所得到的比例为68%。两者之间存在着相关性。早期原发性乳腺癌当中，所检测到的数据表现为单一RT–qPCR与多重RT–qPCR，二者之间是存在着相关性，在本次当中原发性乳腺癌当中，两者方法检测HER-2之间是没有显著相关性。47例患有外周血循环肿瘤细胞，其中存在5例多重RT–qPCR阳性。3种分子学方法检测到的乳腺癌CTC，均不存在相关性。
3讨论
在本次试验当中对乳腺癌进行诊断与治疗当中，CTC取到了十分大的优势，可以看到乳腺癌的患者是具有肿瘤复发的风险，在这一情况下如何实现快速高效的检测是有着十分重要的意义[3]。在目前对CTC的检测方法具有多种多样的特性，但是无疑例外这些检测方法是借助引物扩增来对肿瘤细胞的存在进行证实[4]，因此具有高效率和高特异性的几个优点，但是在本文当中也发现了CTC检测所得到的结果具有显著差异性的原因，这是因为三种不同的分子学检测方法没有使用质量进行控制，这也导致检出的差异存在较大的问题。在本文当中如果发现了患者的CTC出现了破坏的现象，也就无法进行形态学的检查，这也就导致了如果出现了检测结果具有显著差异性，但是也无法有效地进行复核。在本文当中对外源性以及内源性的影响因素进行分析，所得到的结果可以表明，3中分子学检测方法是针对基因健康的女性，如果患者的基因出现了不稳定的情况，进行检测所得到的差异就会进一步扩大。在目前看来，分子检测方法需要在临床实践当中不断完善，才能够切实有效地发挥其应有的作用。
参考文献：
[1]缪苏宇，凌立君，崇梅红等.人乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞与Sipal基因多态性的关系[J].中华实验外科杂志，2012，29（8）：1601-1604.DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2012.08.063.
[2]孙昌瑞，邓君，冯林等.乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞分子学检测方法的对比研究[J].中华检验医学杂志，2015，（10）：666-671.DOI：10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2015.10.005.
[3]王蒙，杨超，刘运江等.原发性乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞及肿瘤干细胞的检测及临床意义[J].中国老年学杂志，2014，34（3）：623-625.DOI：10.3969/j.issn.1005-9202.2014.03.024.
[4]吴娜萍，肇毅，王珏等.联合多标志物检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞与分子分型的相关性及临床意义[J].中华实验外科杂志，2014，31（5）：935-937.DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2014.05.004.
论文作者:卜倩倩
论文发表刊物:《航空军医》2017年第4期
论文发表时间:2017/4/19
标签：乳腺癌论文; 患者论文; 检测方法论文; 分子论文; 肿瘤论文; 原发性论文; 细胞论文; 《航空军医》2017年第4期论文;