宗秀红 信聪玲 王黎明（青岛大学医学院/ 黄岛区中医医院 山东青岛 2 6 6 0 0 0 ）
【摘要】目的：探讨子宫内膜样腺癌和卵巢子宫内膜样腺癌（原发双癌）两部位癌组织通过在c-myc 和k-ras 分子机制发生癌变的分子通路是否相同。方法：按子宫内膜和卵巢原发性双癌诊断标准收集青岛大学医学院附属医院妇科自2005 年1 月至2013 年1 月间收治的子宫内膜和卵巢原发双癌患者的石蜡标本共16份。其临床- 病理分期均为Ⅰ期，病理类型分别为宫腔子宫内膜样腺癌和卵巢子宫内膜样腺癌。采用免疫组化PV-6000 二步法分别检测c-myc 和k-ras 在此两部位癌组织中的表达。结果：子宫内膜和卵巢两部位癌组织c-myc 蛋白免疫表型表达相同者10 例（62.5%），两部位癌组织c-myc 蛋白免疫表型差异表达者6例（37.5%）。C-myc 蛋白免疫表型在两部位癌组织中的表达差异无统计学意义(P ＞ 0.05); 子宫内膜和卵巢两部位癌组织k-ras 蛋白免疫表型表达相同者11 例（68.75%），两部位癌组织k-ras 蛋白免疫表型差异表达者5 例（31.25%）。C-myc 蛋白免疫表型在两部位癌组织中的表达差异无统计学意义(P ＞ 0.05)。结论：子宫内膜和卵巢两部位原发癌组织的子宫内膜样两部位癌组织发生癌变是通过c-myc 分子机制发生癌变的，也就是其癌变分子通路也可能相似。通过K-ras 分子机制发生癌变的分子通路不相似. 需进一步研究证实两部位癌组织可能有同源性。
【关键词】 子宫内膜癌 卵巢癌 原发双癌 c-myc k-ras 免疫组化【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）36-0029-02目前, 子宫内膜和卵巢原发性双癌已经为人们所认识[1-2], 但是由于病例数少, 在临床诊断上还是有相当大的困难。M a tlock[3-4] 等认为,子宫内膜与卵巢在胚胎发生过程中密切相关, 并具有相同的对癌基因的“易感区域”。当这一基因发生突变时, 便会发生子宫内膜和卵巢原发性双癌。最新研究表明，高级别卵巢浆液性癌多为输卵管起源[5-6]，亦有形态学和分子遗传学的证据提示卵巢子宫内膜样腺癌可能与子宫内膜异位病灶有关。
资料与方法一、资料来源1、研究对象：收集青岛大学医学院附属医院2005 年1 月至2013年1 月期间收治的子宫内膜癌和卵巢癌原发双癌患者的手术病理标本共16 份。所选标本均严格参照Young 和Scully[8] . 在1987 年提出的子宫内膜和卵巢原发性双癌的诊断标准：(1) 两个癌灶没有直接联系，如输卵管内肿瘤等；(2) 无子宫肌层浸润或只有浅肌层浸润；(3) 无淋巴和血管浸润；(4) 肿瘤主要存在于卵巢实质和子宫内膜；(5) 两个肿瘤常局限于原发部位或仅伴微小转移；(6) 子宫内膜肿瘤常伴有内膜不典型增生；(7)卵巢肿瘤常为单侧；卵巢内可有子宫内膜异位。参照子宫内膜癌和卵巢癌的FIGO 分期标准[9-10], 本研究所收集患者临床- 病理分期均为Ⅰ期，病理类型均为子宫内膜样腺癌和卵巢子宫内膜样腺癌，所有病理标本均经资深妇科病理医师再次核实。固定蜡块包埋组织标本16 例。患者年龄37 岁—57 岁，中位年龄47 岁，所有患者均有完整的临床病理资料，术前均未接受任何治疗，术后均经病理检查证实。
2、主要试剂：免疫组化P V -6000 试剂盒、D A B 显色剂购自北京中山金桥生物技术有限公司，兔抗人c -my c 单克隆抗体（R a b b i tAnti-noclonalc-myc Monoclonal Antibody）（ZA-0555，工作液）、兔抗人k-ras 单克隆抗体(Rabbit Anti-k-ras)（ZA-0343，工作液），均购自北京中山金桥生物技术公司。所有操作均严格按说明书进行。
二、研究方法免疫组织化学（immunohistochemistry IHC）石蜡标本连续切片，厚4uM，脱蜡和水化；抗原修复。c-myc 单克隆抗体、k-ras 单克隆抗体均采用抗原热修复，3%H2O2 去离子水孵育5 分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS 冲洗。滴加一抗，37℃孵育2 小时，PBS 冲洗3 次。滴加通用型IgG 抗体-HRP 多聚体，37℃孵育15 分钟，PBS 冲洗3 次。
DAB 显色（阳性为棕黄色颗粒），蒸馏水冲洗，苏木素复染，反蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。每批切片中均设阳性对照和阴性对照，用已知乳腺癌阳性切片作为阳性对照，P B S 代替一抗作为阴性对照。
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1、结果判定c -my c 以细胞核或细胞浆棕黄色染色为阳性。K- r a s 以细胞浆或胞膜棕黄色染色为阳性。c-myc、K-ras 染色阳性标准参照文献[11-12]。
采用两级评分法进行判定。在200 倍视野下，每例标本随机选取５个视野，每个视野观察100 个细胞计数，根据阳性率和染色强度来作为结果判定的标准。细胞染色强度评分: 阴性为0 分, 淡黄色为1 分, 棕黄色为2 分,棕褐色为3 分,c-myc 阳性细胞平均百分数计算方法为：c-myc 阳性细胞计数<50% 为0 分，50% ～ 75% 为1 分,75% ≥为2 分。用阳性强度评分乘以阳性细胞评分结果≥ 2 分为阳性表达病例。K-ras 及P53 阳性细胞平均百分数计算方法为：对阳性细胞所占百分比进行评分1% -10%为1 分，11% -50% 为2 分，51% -74% 为3 分，≥ 75% 为4 分。两者乘积≥ 3 者为阳性。
2、统计学方法采用S P S S17.0 分析软件包进行统计学分析，计数资料比较用配对x2 检验计算P 值。
三、结果c-myc、K-ras 在子宫内膜和卵巢原发双癌中的表达 c-myc 阳性表达定位于细胞浆或细胞核，其结果。16 例子宫内膜和卵巢原发双癌中，10 例（62.5%）患者子宫内膜癌组织和卵巢癌组织两部位c-myc 蛋白免疫表型相同，其中7 例（43.75%）患者两部位癌组织中同时有C - m y c蛋白阳性表达，3 例（18.75%）患者两部位癌组织中同时无C - m y c 蛋白表达；高于C-myc 蛋白在两部位癌组织中差异表达者6 例（37.5%）；其中4 例（25%）患者子宫内膜癌组织阳性而卵巢癌阴性者，2 例（12.5%）患者子宫内膜癌组织阴性而卵巢癌阳性。经配对x2 检验计算P 值，P=0.687。K-ras 阳性表达定位于细胞浆或细胞膜。
四、讨论传统上理论认为卵巢癌起源于卵巢表面生发上皮[13-14]。近年来，随着病理学及分子生物学的发展，上皮性卵巢癌的卵巢外起源学说日益受到关注[15]。卵巢和子宫内膜同时存在癌变的情况, 临床上罕见, 不同肿瘤病因虽然不一样, 但其致瘤的机制归根结底都是作用于原癌基因和抑癌基因, 导致原癌基因活化、抑癌基因失活而引发细胞生长、增殖调节失控, 发生恶性转化而产生癌肿。从分子生物学角度看，细胞癌变是多因素、多阶段、多基因变异的结果。近年来, 随着卵巢癌卵巢外盆腔器官起源学说的提出，卵巢癌与输卵管之间的关系越来越得到许多学者的重视[16-18] 并证实卵巢浆液性癌可能源于输卵管伞端。亦有学者提出，卵巢子宫内膜样腺癌可能与子宫内膜异位有关[19], 但是卵巢子宫内膜样腺癌的发生否与异位于卵巢的子宫内膜相关尚待进一步研究证实。
本研究通过对c -my c 和k - r a s 两基因研究讨论原发子宫内膜样腺癌和卵巢子宫内膜样腺癌发病分子通路是否相同。C - m y c 属核转录因子类原癌基因，其编码的蛋白质在核内结合于D N A 链上，对转录过程实施调控。C-myc 基因是定位于染色体8 号长臂(8q24) 上, 约4kb, 属核转录因子类原癌基因, 其编码的蛋白质在核内结合于D N A 链上, 对转录过程实施调控[20]。而本研究中在同一患者的子宫内膜和卵巢两部位癌组织中同时检测c-myc 和k-ras 蛋白的表达，根据c-myc 和k-ras 免疫组化表达特征判断两部位癌组织发生癌变的分子通路是否相似。研究表明，c-myc 基因蛋白在同一患者两部位癌组织中的表达差异无统计学意义（P ＞ 0.05），并且，c-myc 蛋白在两部位癌组织中同时阳性表达者7 例（43.75%）高于同时阴性表达者3 例（18.75%）; k - r a s 蛋白在同一患者两部位癌组织中的表达差异无统计学意义（P ＞ 0.05），并且，k - r a s 蛋白在两部位癌组织同时阴性表达者9 例（56.25%）高于同时阳性表达者2 例（12.5%）。故由此推断，在宫腔和卵巢两部位同时原发的子宫内膜样腺癌患者中，两部位癌组织在c-myc 分子机制上发生癌变的分子通路相似，也就是子宫内膜癌与卵巢子宫内膜样腺癌可能同时通过c-myc 分子通路发生癌变，故我们推断卵巢子宫内膜样腺癌腔子宫内膜样腺癌可能有同源性。同时结果显示子宫内膜样腺癌和卵巢子宫内膜样腺癌与k-ras 分子通路关系不大，但卵巢子宫内膜样腺癌是否为子宫内膜异位起源，及其发生的分子机制尚待进一步探讨; 其次，本研究样本量相对较小，扩大样本量结果更可靠。
参考文献[1] Eifel P, HendricksonM, Ross J, et al. Simultaneous p resentation of carcinomainvolving the ovary and the uterine corpus[J]. Cancer,1982, 50: 163 - 170.[2] Ulbright TM, Roth LM. Metastatic and independent cancers of the endometriumand ovary: a clinicopathologic study of 34 cases[J]. Hum Pathol, 1985, 16: 28- 34.
论文作者:宗秀红 信聪玲 王黎明
论文发表刊物:《中外健康文摘》2013年36期
论文发表时间:2014-4-2
标签：卵巢论文; 子宫内膜论文; 阳性论文; 腺癌论文; 部位论文; 组织论文; 蛋白论文; 《中外健康文摘》2013年36期论文;