陈永锋[1]2003年在《NF基因表达产物在大鼠脑的分布》文中研究说明为了解NF1基因表达产物蛋白质神经纤维素及NF2基因表达产物蛋白质Merlin在大鼠脑中的分布，本实验利用兔抗Merlin抗体、兔抗神经纤维素血清及小鼠抗胶质纤维酸性蛋白单克隆抗体，分别通过免疫荧光组织化学法及免疫组织化学ABC法，观察了10只成年雄性SD大鼠脑中神经纤维素及Merlin的分布。其结果如下： (1)神经纤维素阳性免疫反应较强的脑区和核团有：大脑皮质、海马结构CA1-CA3区、海马齿状回、丘脑前核群、丘脑内侧核群、丘脑中线核群及下丘脑室周核、室旁核等；呈中等阳性免疫反应的有：杏仁核、下丘脑前区、下丘脑外侧区、下丘脑后区及小脑的蒲肯野氏细胞层、颗粒层等；阳性免疫反应较弱的脑区和核团有：尾壳核、屏状核、苍白球、疆内侧核、疆外侧核、外侧膝状体核、内侧膝状体核、隔外侧核、隔内侧核、叁叉神经脊束核、蜗神经背侧核、蜗神经腹侧核、前庭上核、前庭内侧核、巨细胞网状核等。 (2)Merlin阳性免疫反应较强的脑区和核团有：大脑皮质、杏仁核、丘脑前核群、丘脑内侧核群、丘脑中线核群、脑干前庭内侧核以及小脑皮质颗粒层等;呈中等阳性免疫反应的有:海马结构、隔外侧核、隔内侧核、下丘脑室周核、室旁核、背内侧核、腹内侧核等;阳性免疫反应较弱的脑区和核团有:尾壳核、屏状核、苍白球、下丘脑外侧前核、下丘脑背侧核、叁叉神经脊束核、前庭上核、前庭脊核、动眼神经核及巨细胞网状核等。 (3)神经纤维素和Merlin除在神经细胞胞浆中有表达外，在细胞核内也有分布，在部分细胞还能见到突起染色。在星形神经胶质细胞中未能观察到神经纤维素及Merlin的阳性免疫反应信号。 由此认为神经纤维素和Merlin在正常大鼠脑中有广泛的表达，但在表达强弱上，在不同脑区以及在神经细胞与神经胶质细胞之间存在着明显的不均匀性。本实验结果为进一步研究NF基因的功能提供了形态学基础。
姚小梅[2]2003年在《NF-κ Bp65，I-κ B_α及COX-2在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用》文中认为缺血性脑血管病是导致死亡和能力丧失的主要原因，在中国更是如此。由于脑缺血再灌注后有害的生化级连反应，使得临床溶栓治疗并未达到预期效果，因而有必要研究局灶性脑缺血再灌注的理论基础。本课题关注在局灶性脑缺血再灌注后转录因子NF-κBp65激活，I—κB_α解离和下游基因COX-2表达在脑缺血再灌注损伤的炎症和细胞死亡机制中的作用，探讨核因子信号转导对脑缺血再灌注损伤后新疗法产生的理论基础和实用价值。 第一部分：局灶性脑缺血再灌注损伤模型的建立与病理形态学发现 目的：建立大鼠脑缺血2h再灌注不同时程实验动物模型，探讨其病理形态学H&染色及电镜超微结构特点。 方法：成年雄性Wistar大鼠，使用线栓法行大脑中动脉闭塞(MCA_o)，造成局灶性脑缺血2h再灌注3h，15h，24h，48h模型，假手术组不插入线栓。按规定时间点断头取脑后，行病理学H&E染色，观察病理组织形态学特点。采用电镜技术研究脑缺血再灌注后电镜超微结构的特异改变。博士研究生学位论文中文摘要 结果: 1.所有局灶性脑缺血再灌注模型在麻醉苏醒后均表现为局灶性神经功能 缺陷，表现为偏瘫、行走时向右侧旋转或倾倒，有的表现Horner’S征。 再灌注后3小时，神经功能缺陷部分恢复。这些表现与临床局灶性脑 缺血再灌注溶栓治疗的病人相似。因而这一模型与人类缺血性脑血管 病近似，对于研究人类脑缺血再灌注的病理生理机制和评价卒中治疗 的有效性，有重要价值。 2.H&E染色研究将胞浆均质红染，细胞核固缩，细胞膜和细胞结构破坏 的嗜伊红神经元，视为神经元死亡的标志。局灶性脑缺血2h再灌注后 3h，缺血侧纹状体区死亡神经元<24%。局灶性脑缺血2h再灌注后48h， 皮层和纹状体死亡神经元数目增加到50一74%。 3.局灶性脑缺血2h再灌注后24h海马损伤的电镜研究，发现神经元和血 脑屏障均发生改变。发现脑微血管内皮细胞和周细胞出现水肿，内皮 细胞核固缩，内皮细胞连接的间隙和通透性增加，严重缺血部位可见 连接内皮细胞的基质和基膜的完整性缺失，血管腔内可见成熟淋巴细 胞，微血管周围胶质细胞的伪足肿胀、进行性退变，微血管腔狭窄。 自毛细血管内皮细胞向管腔内伸出许多突起，这一代偿增加了接触面 积，可能对血液和神经元之间的营养传递有益，这可能是代偿修复和 血管再生的机制之一。 结论:总之，我们所建立的WIStar大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的局灶性 神经功能缺损与人类缺血性脑血管病相近，是研究脑缺血再灌注损伤 的病理形态学机制的良好模型。
陶陆阳[3]2003年在《不同程度脑外伤后Bcl-2、Bax、Caspase-1、Caspase-3,NF-κB表达变化与细胞凋亡及其相互关系的实验研究》文中研究表明前言 脑外伤(traumatic brain injury,TBI)是暴力因素所致各器官损伤中引起死亡的主要原因之一，在暴力死中占首要位置。脑外伤后并发一系列的病理、生理、生化方面的改变，统称为继发性改变，如蛛网膜下腔出血、脑血管痉挛、颅内血肿、脑水肿、脑循环障碍、脑脊液的分泌吸收障碍、脑代谢障碍、内分泌障碍及脑缺血损害等，造成脑的二次损伤和多次损伤。脑外伤后脑组织发生的这些改变由许多基因、细胞因子参与调节并影响着损伤程度，除脑水肿外，脑损伤程度主要取决于细胞因子，这些因子包括肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)，B细胞淋巴瘤／白血病-2(B-cell lymphoma／Leukemia-2,Bcl-2)基因中的Bcl-2、Bax，CED基因家族中的半胱天冬酶(cystein-dependent aspartate-specific protease,caspase)等，它们都与脑损伤后的神经细胞死亡有关，控制着引起细胞死亡的不同层面。 程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)参与了神经细胞损伤的发病机制。细胞进行PCD通常经过一个严格的形态学变化被称之为凋亡(apoptosis)。控制细胞凋亡的基因包括Bcl-2等位基因家族和促进细胞凋亡的蛋白激酶caspase家族。Bcl-2家族即促进(如Bax)又阻止(如Bcl-2和bcl-xl)细胞凋亡，两组成员的相互作用决定细胞是否进行PCD。细胞核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一类普遍存在的细胞转录因子，功能性NF-κB复合物存在于神经系统的各种类型的细胞中，包括神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞中，在神经细胞变性和凋亡过程中起十分重要的作用。 TBI的形成机制、损伤形成时间、损伤程度分析以及预后判断一直受到法医及临床工作者的重视，其中损伤程度的判定成为实际案例中判定案件性质及量刑的主要依据，成为法医病理学工作者亟待解决的一个重要的科研课题。大量实验证明TBI后的严重损害是由于继发损伤造成的，因此，继发性损害程度影响着TBI的预后。然而原发性损伤程度和继发性损伤程度之间的关系，细胞凋亡与损伤程度的关系，对调节继发性损伤的基因和细胞因子的检测能否用来判定脑损伤程度和判断预后等研究尚未见报道。 本研究拟建立不同程度的脑外伤动物模型，应用HE染色和免疫组织化学染色方法，从形态学上研究不同程度脑外伤的损伤分布以及Bcl一2、Bax、caspase一1、caspase一3和NF一KB这些凋亡相关因子表达的变化和阳性细胞分布与损伤分布的关系，同时应用细胞凋亡的形态学检测方法(末端脱氧核昔酸转移酶介导的生物素脱氧尿嗜吮核昔酸缺口末端标记法;Terminal deoxynueleoti勿1 transferase一mediated biotinylated dUTP niek一end协eling，TuNEL)研究凋亡细胞的时空分布与脑外伤程度以及上述细胞因子分布和表达变化之间的关系;应用Westem blot方法检测Bcl一2、Bax、casPase一1、casPase一3和NF一KB激活和酶原裂解情况，从蛋白质水平研究脑外伤程度及经过时间与上述活性细胞因子变化的关系;应用RT一PcR方法研究Bel一2、Bax、easpase一l、easpase一3和NF一KB mRNA表达变化与脑外伤程度和经过时间的关系。以期为判定脑损伤程度、形成时间和临床治疗TBI病人提供一定的实验性理论依据，并从分子水平研究脑损伤程度、继发性脑损伤、细胞凋亡、细胞凋亡相关因子之间相互关系的可能机制。实验材料与方法 实验材料 1.实验动物 健康Wistar大鼠54只，雌雄不限，体重1 809一2809，由中国医科大学实验动物中心提供。 2.主要试剂. 鼠抗人Bel一2(e一2)单克隆抗体(产品编号:s。一7352，Santa Cruz Bio-teChnolo盯U.s.A) 鼠抗人Bax(B一9)单克隆抗体(产品编号:sc一7450，Santa CruzBi。-technofogy U.S.A) 兔抗人caspase一lp10(M一20)多克隆抗体(产品编号:sc一514， SantaCruz Bioteehnolo盯U.S.A) 鼠抗人caspase一3(cpp一32)单克隆抗体(产品编号:BA0588，武汉博士德公司) 鼠抗人NF一KB颐5(F一6)单克隆抗体(产品编号:se一8008，SantaCo BIOteehn01o留U.S.A) 辣根过氧化物酶标记或碱性磷酸酶标记的羊抗鼠或羊抗兔艳G以及免疫组织化学S一p试剂盒、DAB试剂盒均购于北京中山生物技术有限公司;十二烷基磺酸钠(sodium dodeeyl sulfate，SDS)和丙烯酞胺(ae单amidestandard，AS)购于法国Biomol公司;甲叉双丙烯酞胺购于美国Sino公司;Bel一2、Bax、eas衅e一1、easpase一3和NF一KB的mRNA引物均由北京奥科生物工程公司合成;RNA裂解液购于华美生物工程公司;PCR试剂盒购于日本TAKARA公司。Te丽耐deo材Inucleotidrl Transferase(TdT)、Tris、p一琉基乙醇、四甲基乙二胺(N，N，N’，N’一tetr别rne吻l一e吻len。ai俪ne，，rE MED)购于美国Promega公司;DIG一dUTp购于德国B .M公司;Anti-DIG一Biotin、Westem blot显色剂购于美国51目叮a公司。SABC和TUNEL染色试剂盒购于中国BOS几R公司。标准参照蛋白、小牛血清白蛋白购于华美公司 3.主要仪器 oly哪us显微镜(BX51，日本) 图像分析仪(Metamo印h/Dplo/BX51，美国/?
参考文献：
[1]. NF基因表达产物在大鼠脑的分布[D]. 陈永锋. 四川大学. 2003
[2]. NF-κ Bp65，I-κ B_α及COX-2在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用[D]. 姚小梅. 天津医科大学. 2003
[3]. 不同程度脑外伤后Bcl-2、Bax、Caspase-1、Caspase-3,NF-κB表达变化与细胞凋亡及其相互关系的实验研究[D]. 陶陆阳. 中国医科大学. 2003