袁晓燕1 刘胜男2
（１攀枝花市中心医院 617000）
（2攀枝花市药品检验所 617000）
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）22-0126-02
甘蔓清脂胶囊为由绞股蓝、山楂叶等药味组成，具有降脂清浊之功效,用于高血脂症的辅助治疗。其中绞股蓝和山楂叶采用大孔吸附树脂进行分离纯化。大孔吸附树脂多含有未聚合单体、交联剂、分散剂和防腐剂等成分，这些有机物作为医药材料进入人体后可能会损害人体健康[1]，依据国家药品注册管理办法规定，应对中药提取物中因使用大孔树脂而可能引入残留溶剂进行检查，并对其残留量加以控制。根据中国药典[2]和ICH(人用药品注册技术规范国际协调会)药品中有机溶剂残留量测定的技术指导原则，对本品中大孔树脂有机残留物进行测定。顶空进样法可消除溶剂的干扰，可以对更多残留物进行测定。本试验建立了同时分离测定7种大孔树脂残留物的顶空气相色谱法，提高了分析方法的准确度和精密度。在此条件下对本品中的大孔树脂有机残留进行了测定，方法简便，重现性好。
1.仪器与试药
Agilent 7890A气相色谱仪，氢火焰离子化检测器（FID），7694E顶空进样器；北京中惠普分析技术研究所SPB-3全自动空气源；北京中惠普分析技术研究所SPH-300A氢气发生器；苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯、二乙烯苯（购于天津市光复精细化工研究所，均为色谱纯），二甲基亚砜为色谱纯（成都科龙），其余试剂均为分析纯，甘蔓清脂胶囊（自制，批号为20130401，20130502，20130611）。
2.方法与结果
2.1 测定条件
2.1.1顶空条件顶空平衡温度：90℃；平衡时间：30 min。
2.1.2色谱条件：色谱柱：以键合/交联聚乙二醇为固定相的毛细管色谱柱（DB-WAX，柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.15μm，Agilent公司）；柱温为程序升温，初始温度为60℃，保持16分钟，以每分钟20℃升温至200℃，保持2分钟；用氢火焰离子化检测器检测，检测器温度300℃；进样口温度240℃；载气为氮气，流速为每分钟1.0ml；顶空进样，进样体积1ml；理论板数以邻二甲苯峰计算应不低于40000。在此色谱条件下，对照品、样品色谱峰，分离度、峰形均良好，符合定量分析要求，色谱图见图1。
2.2 标准溶液的制备
精密称取苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1, 2-二乙基苯和二乙烯苯对照品适量，加二甲基亚砜制成每1ml中分别含苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1, 2-二乙基苯和二乙烯苯2.014 3μg、20.141μg、20.926μg、19.852μg、20.013μg、20.387μg和20.178μg的溶液，作为对照品贮备液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取本品0.1g，置20ml顶空瓶中，精密加2%Na2CO3的25%二甲基亚砜溶液5ml，密封，超声振摇处理，溶解，即得。
2.4 检测限、定量限试验
精密吸取上述对照品贮备液适量，加2% Na2CO3的25%二甲基亚砜溶液逐级稀释，当信噪比约为S/N=3时得到7种溶剂的最低检测限；当信噪比约为S/N=10时得到7种溶剂的定量限，结果见表1。
2.5 重复性试验
精密称取本品0.1g，置20ml顶空瓶中，精密加2%Na2CO3的25%二甲基亚砜溶液5ml，密封，超声振摇处理，溶解，一式六份，依法处理，进样测定，结果苯、甲苯、邻二甲苯、苯乙烯，1, 2-二乙基苯，二乙烯苯均未检出，可检出对二甲苯，峰面积在检出限和定量限之间，含量小于0.0004%。结果见附图1。
3.讨论
3.1 样品处理方法的确认
本品主要含山楂叶总黄酮和绞股蓝皂苷类成分，山楂叶总黄酮在水中溶解性较差，故选择以混合溶液作溶剂，同时由于本品含皂苷类成分，皂苷类成分在振摇中会产生大量持久性泡沫，故取样量不宜过大，且不宜剧烈振摇，防止大量泡沫产生，测试中选择了试样加溶剂密封后，采用超声处理并轻轻振摇以利于充分溶解。
3.2 样品溶剂的选择
顶空法测定大孔树脂残留物常用的溶剂有水、二甲基甲酰胺和二甲基亚砜 [3-5]，因二甲基甲酰胺对化合物有很强的溶解能力[6]，沸点相对较高，不容易对待测成分产生干扰，故首先采用二甲基甲酰胺溶液作为溶剂。结果有部分样品不溶，且不同批次的二甲基甲酰胺可能会在色谱图中段出现干扰峰，故放弃。参照中国药典一部P.378灯盏花素检查项下方法，采用2%Na2CO3的25%二甲基亚砜溶液作溶剂，结果样品能完全溶解，溶剂无干扰。
3.3 顶空平衡条件的考察
考察平衡时间延长至45min，结果显示与平衡30min无差异，故平衡时间采用30min。又考察了平衡温度，将设置为98℃，结果显示虽然待测组分峰面积明显增加，检测灵敏度提高，但对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的保留时间明显提前，分离度下降明显，可能原因为顶空温度增高导致水汽进入色谱柱以致柱效降低。
【参考文献】
[1] 屠万倩，李昌勤．大孔吸附树脂在中医研究领域中应用的进展［J］．中医研究，2006，19 ( 4)：61．
[2] 中国药典. 2010．Vol Ⅱ(二部)：附录61.
[3] 中国药典. 2010．Vol Ⅱ(二部)： 98．
[4] 许勇，郏征伟，钱大公等．顶空气相色谱测定灯盏花素提取物中大孔树脂有机溶剂残留物［J］．中成药，2011，33 (8)：1351．
[5] 李丽敏，钱大公，王珂等．顶空气相色谱测定三七叶苷中大孔树脂有机溶剂残留物［J］．药物分析杂志，2007，27（5）：738．
[6] 张红，蒋进元，周岳溪等．N，N-二甲基乙酰胺在水体泥沙中的吸附及光解特性［J］．环境科学研究，2009，22(8)：902．
论文作者:袁晓燕1,刘胜男2
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第22期供稿
论文发表时间:2015/10/15
标签：甲苯论文; 色谱论文; 溶剂论文; 甲酰胺论文; 溶液论文; 残留物论文; 树脂论文; 《医药前沿》2015年第22期供稿论文;