山东省滨州华海白癜风医院 山东滨州 256600
摘要：目的：建立黑素再生合剂中主要成分补骨脂素与异补骨脂素的最佳提取工艺。方法：在传统的水煎煮提取方法上采用L9¬¬（34）正交试验对提取条件进行优化，确定黑素再生合剂中补骨脂素与异补骨脂素有效成分的最佳提取工艺。采用高效液相色谱法分析各提取条件对补骨脂素与异补骨脂素的影响。结果：十倍水，煎煮三次，每次两小时的提取方法为最佳方法。结论：建立了黑素再生合剂中主要有效成分的最佳提取工艺，证明了提取条件中提取次数对补骨脂素转移率的影响最大。
关键词：正交试验；黑素再生合剂；提取工艺；研究
黑素再生合剂为我院制剂，由补骨脂、丹参、黄芪、蒺藜等十一味药材提取制备而成，具有活血通络，养血祛风，补肝肾阴虚的功效，主要用于治疗各种类型白癜风，疗效显著[1]，。本文采用HPLC法测定，以出膏率和补骨脂转移率为考察指标，用正交实验法对黑素再生合剂的提取工艺进行了优选。
1.仪器与试药
1.1仪器
日本岛津LC-15C型高效液相色谱仪，岛津AUW120D分析天平，WondaSil C18（5μm，4.mm×150mm）
1.2试药
补骨脂，丹参，黄芪，蒺藜等十一味药材均购自安徽亳州，补骨脂素（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110739-200814）；异补骨脂素：（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110738-201012）；甲醇为色谱纯；水为纯化水。
2.方法与结果
根据处方中药材有效成分的性质特点及“混煎增溶”的原理，黑素再生合剂的提取工艺定为传统方法水煎法，以加水量、提取时间、提取次数为考察因素，出膏率和补骨脂转移率为考察指标，补骨脂以补骨脂素与异补骨脂素[2]含量之和计。
2.1药材提取工艺研究优选
2.1.1 因素水平的选择
水提取的主要影响因素为加水倍数，提取时间，提取次数。现按三因素三水平选L9¬¬（34）表安排正交实验，各因素水平见表1。
2.1.2样品制备
2.1.2.1正交实验样品的制备：按处方比例称取0.1倍处方量的药材，按照正交实验表顺序回流提取，提取液滤过，滤液过0.45μm微孔滤膜作为正交实验样品。
2.1.2.2药材对照药品的制备：取补骨脂粉末（过3号筛）0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取2小时，放冷，转移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，补足失重，0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.1.3含量测定
色谱条件：样品中补骨脂素和异补骨脂素采用HPLC法测定，选用WondaSil C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为甲醇-水（45：55）；检测波长246nm；流速1mL/min；柱温：30℃；进样量20μL。测定结果见表2，方差分析见表3，4。
2.1.4结果分析
由表3出膏率方差分析结果可以看出，因素A（加溶剂量）、B（提取时间）、C（提取次数）对于干膏收率影响大小为C>A>B，即提取次数、加溶剂量、提取时间，C因素有显著性差异。由表4水提取补骨脂素与异补骨脂素转移率方差分析结果可以看出，因素A（加溶剂量）、B（提取时间）、C（提取次数）对于补骨脂素与异补骨脂素转移率影响大小为C>A>B，即提取次数、加溶剂量、提取时间，C因素有显著性差异。由表2直观分析表明，最佳工艺为A3B3C3，即：十倍水，煎煮三次，每次两小时。
2.2最佳工艺放大验证
最佳工艺放大验证：按处方称取3份药，按优选的工艺条件进行验证试验，结果见表5，其出膏率和补骨脂素与异补骨脂素转移率均处于较高水平，说明该提取工艺合理、稳定、可行。
3.讨论
黑素再生合剂处方中补骨脂为君药，其有效成分补骨脂素与异补骨脂素为脂溶性成分，按照常理采用水煎煮的方法，转移率应该很低，但是与其余十味药材混合煎煮后，测得混煎液补骨脂转移率较高，说明传统的多味药材混合煎煮方法适用于黑素再生合剂。
参考文献：
[1].成爱华，韩梅海.内服外用治疗白癜风426 例临床观察[J].中国中医药信息杂志，2000，8：70.
[2].中国药典2010年版一部[S].2010：129.
论文作者:成爱华,韩梅海,崔国涛,吴本英
论文发表刊物:《健康世界》2015年1期
论文发表时间:2015/9/21
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