（1.河北省廊坊市中医医院 河北 廊坊 065000）
（2.北京电子科技职业学院 北京 100029）
【摘 要】目的:探讨验方煎制中有效成分控制的影响因素。方法:利用高效液相色谱技术，以选定的验方药材中芍药苷和党参炔苷为评价指标，探讨提取方法、温度、溶剂、药材配伍等因素对其含量的影响。结果:50%乙醇、60℃水浴加热结合微波辅助法对药效成分保留效果最好，芍药苷和党参炔苷在验方中含量分别为42.15mg/g和0.67mg/g，在单一药材赤芍和党参含量分别为40.0mg/g和0.68mg/g。60℃以上水浴温度不利于芍药苷成分保留。药材配伍对党参炔苷含量影响较小，但对芍药苷含量影响显著。结论:验方煎制方法中采用有机溶剂提取、适当水浴加热及微波辅助法利于保留药效成份。不同的提取对象受到的影响因素及效果各不相同，煎制时应综合考虑药材配伍、提取对象理化性质、酸碱度等多种因素。
【关键词】芍药苷；党参炔苷；质量标准；HPLC
【中图分类号】R286 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）8-0427-02
现代中药质量控制和评价的手段有生物活性、效价检测等多种模式，虽然借鉴化学药品质量控制的模式具有一定的局限性，但对于许多临床疗效已经得到了充分验证的中医验方和经方来说，在煎制过程中最大限度的保留或提取其有效成分仍是质量控制的有效手段之一[1，2]。本文以某慢性乙肝验方为研究对象，为中药验方煎制中多种药效成份的最大化保留提供一定的参考依据。
1 材料与仪器
Agilent1200高效液相色谱分析仪（美国Agilent公司）、ZORBAXSBC18柱(4.6mmX150mm，5um)、KQ-50B超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）、MP17C-KE微波炉（美的公司）、Laborato4000effiencient旋转蒸发仪（德国海道夫仪器有限公司）。
芍药苷与党参炔苷标准品购于上海同田生物技术有限公司；中药材黄芪、党参、柴胡、赤芍、当归、白花蛇色草、五味子、甘草购于河北安国东方药城；乙腈、冰醋酸、乙醇均为色谱纯，购于Sigma公司；水为超纯水水（MILLIPORE公司的Milli-QA超纯水机制得）。
2 实验方法
2.1色谱条件
色谱柱：HypersilC18柱(5μm，250mm×4.6mmi.d)；流动相：A：乙腈，B：1%冰醋酸水溶液；采用梯度洗脱程序：0～8.0min，20%A；8.0～12.0min，30%A；12.0～22.0min，40%A；22.0～32.0min，12%A；流速：1.0ml/min；柱温为：25℃；检测波长：280nm。
2.2验方药材、赤芍与党参药材处理
选取验方主药材用于实验研究，将药材粉碎成细粉，过50目筛。按验方各药材用量准确称量（党参15g，黄芪30g，甘草10g、当归15g、五味子10g、赤芍20g、白花蛇舌草10g、柴胡10g），混合均匀备用。
准确称取5.000g验方预处理后药材，加50mL双蒸水，于60°C水浴中浸泡30min，微波炉小火（100W）5min。过滤后滤液减压回流至干，用流动相（乙腈：1%冰醋酸水溶液=1:4）溶解并定容至10ml，摇匀，待用。
单一赤芍与党参药材样品按同一方法处理待用。
2.3芍药苷与党参炔苷混合标准溶液
分别准确称取干燥至恒重的芍药苷、党参炔苷标准品各10mg，用流动相（20%乙腈和80%冰醋酸水溶液）溶解定容，配制成1mg/ml的标准溶液待用。
3 实验结果
3.1方法学考察
（1）线性关系考察。经计算芍药苷标准品回归方程为y=26.937x+0.4773，线性相关系数R?=0.9999。党参炔苷标准品回归方程为y=24.381x+2.501，线性相关系数R?=0.9998。结果显示芍药苷标准品在0.10~24.0μg范围内线性关系良好，党参炔苷标准品在0.03~24.0μg范围内线性关系良好。（2）精密度测定。芍药苷、党参炔苷峰面积的RSD值小于2.01%，表明仪器精密度良好。（3）重复性试验。芍药苷、党参炔苷含量RSD值小于3%，表明重复性良好。（4）加样回收率测定。结果显示芍药苷、党参炔苷平均加样回收率在99.1%以上，RSD为2.23%，回收率良好。
3.2验方样品、赤芍及党参药材药效成分分析
验方样品、赤芍与党参样品按步骤2.2和2.5方法处理后，按优化的色谱条件进行HPLC分析。谱图如图2所示。
4 讨论
验方或经方在实施治疗中常需结合病症在药材类型或用量方面予以加减，因而其中起主要作用的药效成分具有极大的差异，煎制过程应同时兼顾多种药效成分的保留。实验研究尽可能贴近传统中医对中药材的煎制方法，不考虑中药制剂过程中一些特殊的处理手段和方法。同时着重考虑了煎制过程中的影响因素，对药材产地、取样部位、采集时间等因素未列入观察范围。
5 结论
本文着重探讨了提取温度、提取溶剂、提取方法、药材配伍等对赤芍、党参及验方药材中芍药苷和党参炔苷成分的影响。实验结论显示，50%乙醇比双蒸水提取效果好，加热状态比常温状态效果好，微波提取效果亦好于其他提取方法。此外，多味药材的验方中药材配伍对药效成分的提取可能存在相互作用和影响。实际工作中对于复杂药材配伍的验方药材药效成分的提取，我们仍然需要考虑提取方法、温度、溶剂、酸碱度等多种因素，进行多次正交试验来确定验方煎剂的制取方法，以确保多种药效成分的最佳保留效果。研究工作对传统中医验方、经方等应用和制剂具有重要参考价值。
参考文献：
[1]梁小银，陈少旭，吴垠．中药制剂质量控制研究的发展趋势[J]．中国药房，2014，25（3）：280-283．
[2]肖小河，金城，赵中振，等．论中药质量控制与评价模式的创新与发展[J]．中国中药杂志，2007，32（14）：1377-1381．
[3]路晓钦，马增春，高月．四物汤药理研究进展[J］．中国实验方剂学杂志，2001，7(4)：56-59．
[4]于定荣，顾雪竹，张村，等．白芍中芍药苷提取工艺的对比研究[J]．中国实验方剂学杂志，2013，19（15）：49-51．
基金项目：
河北省廊坊市科技计划项目（2012013070）
作者简介：
安志英，本科学士，主管中药师，从事中药标准化和质量控制研究。
李浡，工学博士，副教授，从事生物化学及仪器分析研究。
论文作者:安志英1,李浡2
论文发表刊物:《河南中医》2015年8月供稿
论文发表时间:2015/10/22
标签：党参论文; 验方论文; 药材论文; 芍药论文; 赤芍论文; 药效论文; 方法论文; 《河南中医》2015年8月供稿论文;