【摘要】 目的 研究并探讨养肝抗纤汤对肝纤维化大鼠肝脏Bcl－２、Bax、PCNA 表达的临床影响,并分析其研究价值.方法 将我院实验室选择的健康大鼠６０只作为研究对象,并且随机分为三组,即对照组、肝纤维化模型组、养肝抗纤汤组,每组大鼠２０只.将二甲基亚硝胺药物配置成浓度为０．５％的溶液,按照０．２毫升/１００克的用药剂量给大鼠腹腔内注射,连续注射四周进行造模.两个月后将所有大鼠处死,并且检查各组大鼠肝脏Bcl－２、Bax、PCNA 表达,同时再检查各组大鼠白蛋白、血丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶的水平含量.结果 养肝抗纤汤组大鼠肝脏Bcl－２、Bax、PCNA 的表达水平与其他两组大鼠相比,差异较大,P值小于０．０５,具有统计学意义.结论 养肝抗纤汤对肝纤维化大鼠肝脏Bcl－２、Bax、PCNA 的表达具有一定的抑制作用,并且会影响大鼠肝细胞的凋亡. 【关键词】 养肝抗纤汤; 肝硬化; 大鼠; 临床效果【中图分类号】R４４【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０１６２－０１
肝纤维化是一个复杂的过程,并且是由多种原因导致的慢性肝病向肝硬化发展的共同病理过程[１].抗肝纤维化治疗是治疗慢性肝病过程中重要治疗环节之一.现本文将研究养肝抗纤汤对肝纤维化大鼠肝脏Bcl－２、Bax、PCNA 表达的临床影响,如下文:
１ 资料与方法１．１ 基线资料 将我院实验室选择的健康雌性大鼠６０只作为研究对象,并且随机分为三组,即对照组、肝纤维化模型组、养肝抗纤汤组,每组大鼠２０只.对照组大鼠２０ 只,体重在７５ 克至９８ 克之间,平均体重为(８６．６６±２．５６)克.肝纤维化模型组大鼠２０只,体重在７４克至９７克之间,平均体重为(８５．９６±２．４９)克.养肝抗纤汤组大鼠２０只,体重在７６克至９９克之间,平均体重为(８６．４９±２．３９)克.将三组大鼠的一般资料进行对比,差异较小,P值大于０．０５,因_______此三组大鼠能够进行良好的比较、分析.
１．２ 临床方法
１．２．１ 一般试剂 兔抗大鼠多克隆抗体Bax,兔抗大鼠多克隆抗体Bcl－２,小鼠抗大鼠单克隆抗体PCNA,均产自武汉博士德公司;SA１０２２－ 兔Ig－G,SA１０２１－小鼠Ig－G,DAB显色试剂盒,均产自武汉博士德公司;广州市俪科贸易有限公司生产Masson 染色试剂盒;武汉博士德公司生产Poly－LLysine;上海海研生物技术中心生产LN 放免试剂盒、HA 放免试剂盒.其中养肝抗纤汤的主要成分为五味子５克,丝瓜络５克,女贞子８克,白芍８克,五味子５克,当归８克,郁金６克,枸杞子６克,鳖甲５克,鸡血藤５克,路路通４ 克等等[２].
１．２．２ 一般方法 将二甲基亚硝胺药物配置成浓度为０．５％的溶液,按照０．２ 毫升/１００克的用药剂量给大鼠腹腔内注射,连续注射四周进行造模.同时给对照组、肝纤维化模型组、养肝抗纤汤组大鼠,每周进行自来水、自来水、养肝抗纤汤灌胃,每周灌胃量为１０毫升/千克,连续灌胃四周.两个月后将所有大鼠处死,用浓度为１０％的水合氯醛０．３５ml/kg对大鼠进行麻醉,剖腹大鼠经下腔并进行采血,将大鼠肝组织取出,并用甲醛固定,脱水后用石蜡包埋.检查各组大鼠肝脏Bcl－２、Bax、PCNA 表达,同时再检查各组大鼠白蛋白、血丙氨酸转氨酶、透明质酸、天冬氨酸转氨酶、层粘连蛋白的水平含量[３].１．３ 观察指标 将对照组、肝纤维化模型组、养肝抗纤汤组大鼠的白蛋白、血丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶的水平含量进行比较;将对照组、肝纤维化模型组、养肝抗纤汤组大鼠的Bcl－２、Bax、PCNA 表达水平差异进行比较.１．４ 统计学处理 实验结束后,将三组大鼠的临床数据准确地录入到SPSS１５．０统计软件包进行测定.计量资料用(X±s)表示,用t检验.当p值小于０．０５时,表明差异存在着统计学意义.
２ 结果
２．１ 将三组大鼠的白蛋白、血丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶的水平含量进行比较:如表一所示.
３ 讨论
肝纤维化发生是一个复杂的多因素作用过程,并且是慢性肝病形成肝硬化的一个不可缺少的阶段.它涉及细胞和分子生物学事件,肝星形细胞(HSC)被激活为肌成纤维细胞,大量增殖并分泌大量细胞外基质是其最重要的机制.PCNA 存在于所有迅速增殖的细胞核中,它的出现明显与增殖有关[４].结缔组织生长因子(CTGF)与器官纤维化的发生有明显相关性.多种因素能够激活肝星形细胞大量合成蛋白多糖、胶原等系列细胞外基质,推动肝硬化以及肝纤维化的发展.肝星形细胞的活化是导致肝纤维化发生的重要因素,不仅降低了胶原合成,同时也抑制了肝星形细胞的增长[５]. 在中医思想中认为肝纤维化是由于湿热疫毒侵入体内以及情志失调导致的,使得患者气血阻络、肝肾血虚.养肝纤维汤在临床治疗肝纤维大鼠具有重要的治疗效果.通过肉眼观察三组大鼠的肝组织病理学可以发现,对照组大鼠的肝组织表面光滑,并且质地柔软[６].肝纤维化模型组大鼠的肝组织颜色暗淡、表面粗糙、质地坚韧,并且可以看见颗粒状小结节.养肝抗纤汤组大鼠的质地也较柔软且光滑.通过光镜可以清楚地观察,对照组大鼠的小叶结构正常,肝板呈条索状,并且以中央静脉为中心,向四周呈现放射状.大鼠的肝细胞索排列规则,板间略有不规则肝窦.在肝纤维化模型组大鼠中,大部分正常肝小叶消失或者被破坏,并且会有粗大胶原纤维条索包裹肝小叶.肝细胞有明显的浊肿,肝细胞索排列不规律,有大量的坏死出血,大量的炎性细胞浸润纤维隔内.养肝抗纤汤组大鼠的纤维组织增生以及肝细胞坏死的比例小于对照组大鼠,并且其肝小叶结构被破坏的程度较轻,肝细胞的水肿现象有一定的好转,纤维条索较窄、疏松,肝脏组织的炎症细胞被浸润的比例也相对减少. 通过本次研究内容可以发现,对大鼠实施了养肝抗纤汤治疗后,Bcl－２、PCNA 的水平得到了显著的提高,Bax的变化差异较小,说明大鼠经过养肝抗纤汤治疗后,降低了大鼠肝细胞的凋亡,提升了肝组织增殖的速度[７]. 综合上述分析内容可得,养肝抗纤汤不仅促进了肝细胞的增殖,同时抑制了肝细胞的凋亡,并且降低了肝细胞的炎症反应,使得肝细胞的数量比较容易维持在较恒定的水平,抑制了纤维化的进程,良好地改善了肝纤维化大鼠的预后情况.
参考文献[１] 叶伟东,许维丹．养肝抗纤汤对肝纤维化大鼠肝脏Bcl－２、Bax、PCNA 表达的影响[J]．中国中医药科技,２０１０,１７(５):３８９－３９０． [２] 梁梓宇,覃山羽,姜海行等．骨髓间充质干细胞诱导肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡和Caspase－３表达[J]．重庆医学,２０１０,３９(２０):２７２１－２７２３． [３] 杜宇琼,车念聪,赵晖等．黄芪对肝纤维化大鼠肝组织TIMP－１及MMP[ －１表达的影响[J]．北京中医药大学学报,２０１３,３６(１１):７７５－７７８． ４] 兰玲,于静,刘冉等．骨髓内皮祖细胞输注后在肝纤维化大鼠肝脏内的示踪研究[J]．中华器官移植杂志,２０１２,３３(１１):６８４－６８８． [５] 孙妩弋,桂双英,吴丽等．芍芪多苷对肝纤维化大鼠肝脏星状细胞基质金属蛋白酶１３及组织金属蛋白酶抑制因子１表达的影响[J]．中国中药杂志,２０１０,３５(１１):１４４７－１４５１． [６] 何志国,赵永忠,卢青等．荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体２、４表达的影响[J]．广东医学,２０１３,３４(１９):２９２６－２９３０． [７] 王志旺,王瑞琼,郭玫等．甘肃产藏药五脉绿绒蒿有效部位对肝纤维化大鼠抗氧化系统的影响[J]．中国老年学杂志,２０１３,３３(２０):５０４３－５０４６．
论文作者:周晓辉 赵凌杰
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/3/2
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