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【摘 要】目的 建立HPLC 法测定醋酸阿托西班的异构体。方法 色谱条件为：安捷伦1260；用Chiralcel OD-RH色谱柱（150×4.6mm，5μm）为填充剂；以三氟醋酸溶液（取水2000ml，用稀的三氟醋酸调pH至3.2）-乙腈-甲醇（75∶15∶10）为流动相；流速为每分钟0.5ml；检测波长为220nm；柱温为40℃，进样量20μL。结果：方法的验证该分析方法适用于醋酸阿托西班异构体测定的检验。结论：该方法简便、准确，可以作为醋酸阿托西班异构体测定的检验。
【关键词】HPLC；醋酸阿托西班；测定
[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2018）23-0344-01
醋酸阿托西班为一个环九肽，是子宫催产素受体的竞争性拮抗剂，在早产治疗中已发展成为一种新的宫缩抑制剂。可以延迟分娩，使母亲有足够的时间服用类固醇促使胎儿肺成熟。醋酸阿托西班是催产素拮抗剂，代表一种新的抗分娩药[1]。其中Tyr、Asp、Cys、Pro、Orn含有一个手性中心，Ile和Thr含有两个手性中心，又因Pro为环状氨基酸，可能存在顺反异构现象（主要以反式结构存在）。这些氨基酸在上保护过程中或者在肽序列偶联中可能发生消旋而生成非对映异构体杂质，而有些异构体化学性质与主成分非常相似，在纯化过程中很难有效去除，通过开发有效的检测方法，对产品中含有的异构体杂质进行控制。 一般多肽异构体采用旋光的方法进行控制，但灵敏度低，不能准确定量，产生质量风险。本文只针对醋酸阿托西班异构体进行方法的开发。
1、材料与方法
2.3试剂与仪器
乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。
高效液相为安捷伦1260，电子分析天平赛多利斯公司CPA225D。
1.2方法
1.2.1 色谱条件 用纤维素三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）凃敷硅胶（Chiralcel OD-RH色谱柱，150×4.6mm，5μm）为填充剂；以三氟醋酸溶液（取水2000ml，用稀的三氟醋酸调pH至3.2）-乙腈-甲醇（75∶15∶10）为流动相；流速为每分钟0.5ml；检测波长为220nm；柱温为40℃，进样量20μL。
1.2.2 供试品溶液及对照品
取醋酸阿托西班适量，精密称定，加三氟醋酸溶液（取水2000ml，用稀的三氟醋酸调pH至3.2）制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液。
杂质A为D-Pro异构杂质即c[MPa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys]-D-Pro-Orn-Gly-NH2。
杂质B为D-Asn异构杂质即c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-D-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH2。
杂质C为D-Asn异构杂质即c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-D-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH2。
2 结果与讨论
2.1定位试验与空白干扰试验
由试验结果可知：阿托西班出峰时间为12.873min，杂质B出峰时间为15.770min，杂质A出峰时间为16.854min，杂质C出峰时间为17.034min，空白溶剂对各个杂质峰及主峰的测定未造成干扰，阿托西班对杂质A、杂质B、杂质C的测定均无影响。
2.1检测限与定量限试验
醋酸阿托西班检测限为0.02μg/ml，定量限为0.06μg/ml，相当于供试品浓度的0.002%和0.006%；杂质A检测限为0.73μg/ml，定量限为0.24μg/ml，相当于供试品浓度的0.073%和0.024%；杂质B检测限为0.01μg/ml，定量限为0.03μg/ml相当于供试品浓度的0.001%和0.003%；杂质C检测限为0.01μg/ml，定量限为0.03μg/ml，相当于供试品浓度的0.001%和0.003%；说明该方法的检测灵敏度高，能有效检测出产品中的痕量杂质。
2.2线性关系与范围试验
取流动相作为空白溶剂。
线性溶液的制备：分别精密量取上述醋酸阿托西班、杂质B、杂质A、杂质C制成1ml中含50μg贮备液，并分别取贮备液各1m、1ml、3ml、1ml、1ml、3ml，分别置同一100ml、50ml、100ml、25ml、20ml、50ml量瓶中，加三氟醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液。结果以浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析，求出线性方程及相关系数（r）。
表1 醋酸阿托西班异构体方法学醋酸阿托西班线性关系
试验结果表明：通过改变色谱条件中的流速、流动相比例、柱温，由结果表明，改变流动相的流速、流动相比例、柱温对有异构体的测定均无影响，表明该方法的耐用性较好。
2.4样品测定
测定法 取本品适量，精密称定，加三氟醋酸溶液（取水2000ml，用稀的三氟醋酸调pH至3.2）制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，精密量取适量，用三氟醋酸溶液定量稀释制成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。精密称取杂质B、杂质C和杂质A适量制成每1ml中含10μg对照品混合溶液。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质B、杂质C和杂质A按外标法计算，均不得大于对照溶液主峰面积（0.10%）。
试验结果表明：对本品三批（161101批、170301批、170302批）加杂质B均未检出、杂质A均未检出和杂质C均未检出。
[参考文献]
[1] 朱国栋.阿托西班及弥新平用于早产儿的治疗.世界核心医学期刊文摘妇产科学分册，2006，(2)：58
论文作者:吴莲容,彭涛
论文发表刊物:《医师在线》2018年23期
论文发表时间:2019/4/9
标签：杂质论文; 醋酸论文; 溶液论文; 西班论文; 色谱论文; 定量论文; 方法论文; 《医师在线》2018年23期论文;