1哈尔滨医科大学；2黑龙江省医院
【摘 要】目的：探讨成纤维细胞激活蛋白（fibroblast activation protein，FAP）对宫颈癌细胞增殖能力的影响。方法：宫颈癌Hela细胞体外培养，加入不同浓度的FAP（100和200 pmol/L）处理，用MTT法检测细胞增殖。结果：FAP处理后，宫颈癌Hela细胞增殖能力明显增强，其作用呈剂量和时间的依赖性。结论：FAP能够促进宫颈癌细胞的增殖。
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，且在发展中国家的发病率和死亡率远高于发达国家[1]。宫颈癌细胞的增殖、组织浸润和转移是宫颈癌最主要的生物学行为[2]。因此，找到影响宫颈癌发生发展、侵袭以及转移过程中的关键调节靶点，是促进宫颈癌防治的关键。
近年来的研究证实，肿瘤的生物学特性不仅由癌基因和抑癌基因来调控，还依赖于间质形成的微环境作用。肿瘤间质中的成纤维细胞上特异性表达的成纤维细胞激活蛋白（fibroblast activation protein，FAP）被证实参与多种肿瘤的发生和发展。例如，胃癌组织中FAP高表达患者的平均生存时间显著低于低表达者，进一步证实FAP能够促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭［3］。有报道指出肿瘤组织中FAP 的表达与宫颈癌的临床分期有关，提示FAP参与宫颈癌的进展［4］。然而，FAP对宫颈癌细胞生物学特性的影响目前尚无报道。本研究通过体外实验观察FAP对宫颈癌Hela细胞增殖的影响，探讨FAP在宫颈癌发生、发展中的作用。
1材料和方法
1.1 材料
宫颈癌细胞系Hela由哈尔滨医科大学转化中心惠赠。培养基、胎牛血清、双抗、胰酶等均购自美国Gibco公司，MTT试剂盒购自Sigma-AldrichCo.LLC.（USA）。
FAP蛋白购自Abnova公司。
1.2 MTT法检测细胞增殖
取对数生长期的Hela细胞接种于96孔板，培养12h。加入不同浓度FAP，分组包括：对照组、FAP 100pmol/L组和FAP200pmol/L组。分别于0h、12h、24h、48h 测量细胞增值情况。每孔加入20ul MTT，培养箱中孵育4h后吸出培养液，每孔加入DMSO 150ul，振荡10min后用酶标仪读取每孔490nm处的OD值。
2结果
为了观察FAP对细胞增殖能力的影响，应用 100和200 pmol/L 2个浓度的FAP在不同的时间点进行检测。结果显示不同浓度的FAP，对宫颈癌Hela细胞的增殖均有促进作用，且呈剂量和时间的依赖性（图1）。
3讨论
宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中仅次于乳腺癌和结直肠癌，位居第三[5]。据世界卫生组织统计，世界范围内每年新发的宫颈癌病例有80%发生在发展中国家，其中约有75 000 例来自中国[6]。尽管宫颈细胞学检查能够早期诊断和治疗宫颈癌，但当其发生浸润、转移后很难达到彻底根治，约29%～38%的宫颈癌患者在治疗后复发[7]。因此，探讨与宫颈癌浸润和转移有关的生物学指标，对于预测转移倾向、选择治疗方案，从而改善预后有重要意义。
越来越多的研究证实肿瘤的发生、发展是由肿瘤细胞和间质微环境的平衡状态来决定的，肿瘤细胞和间质成纤维细胞通过相互作用影响着肿瘤细胞的生长、分化以及侵袭［8］。成纤维细胞活化以后，能够分泌多种细胞外基质成分，如生长因子、胶原以及蛋白酶，包括FAP。FAP能够促进多种肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移[9]，但其在宫颈癌浸润、转移中的作用目前国内外尚无报道。我们前期的实验发现，FAP在正常子宫颈组织中不表达，在宫颈癌组织中高表达，且与患者的临床分期相关，提示FAP可能参与宫颈癌的发生、发展 [4]。本研究通过体外给予FAP刺激，观察宫颈癌细胞Hela增殖能力的变化，为宫颈癌浸润、转移的分子机制提供理论依据，为控制宫颈癌的浸润、转移提供新靶点。研究结果显示，不同浓度的FAP可呈剂量依赖性促进宫颈癌细胞的增殖，与国内外报道及本研究前期研究相一致。
综上所述，本研究结果表明FAP能够促进宫颈癌细胞的增殖和迁移，提示FAP在宫颈癌肿瘤生长和浸润转移中的重要作用，对宫颈癌浸润转移的诊断、治疗以及预后可能具有理论价值和临床意义。
参考文献：
[1]Machida H. Characteristics and outcomes of reproductive-aged women with early-stage cervical cancer：trachelectomy vs hysterectomy. Am J Obstet Gynecol. 2018. 219（5）：461.e1-461.e18.
[2]Machida H. Characteristics and outcomes of reproductive-aged women with early-stage cervical cancer：trachelectomy vs hysterectomy. Am J Obstet Gynecol. 2018. 219（5）：461.e1-461.e18.
[3]杨肖军. 成纤维细胞激活蛋白对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制研究. 武汉大学学报：医学版. 2016（6）：900-904.
[4]王秋艳. FAP和TGFβ1在宫颈癌中的表达及其意义. 肿瘤学杂志.2009；15（3）：179-181.
[5]CP，Yu JB. Impact of Widespread Cervical Cancer Screening：Number of Cancers Prevented and Changes in Race-specific Incidence. Am J Clin Oncol. 2016.
[6]Schlichte MJ，Guidry J. Cervical cancer：Can it be prevented? J Clin Med. 2015. 4：918-32.
[7]Hong JH. Recurrent squamous cell carcinoma of cervix after definitive radiotherapy. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2004；60：249-57.
[8]Han Y. Molecular mechanism underlying the tumor-promoting functions of carcinoma-associated fibroblasts. Tumour Biol. 2015；36（3）：1385-94.
[9]Goscinski MA. FAP-and uPA Show Different Expression Patterns in Premalignant and Malignant Esophageal Lesions. Ultrastruct Pathol. 2008；32（3）：89-96.
基金项目：黑龙江省卫生计生委科研课题（项目编号：2016-174）
论文作者:杨丹1（通讯作者）,康雪峰2,孙勇2,李霞1,高铁磊
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2019年第11期
论文发表时间:2019/12/4
标签：宫颈癌论文; 细胞论文; 肿瘤论文; 宫颈论文; 癌细胞论文; 纤维论文; 浓度论文; 《中国医学人文》(学术版)2019年第11期论文;