药艾条的显微鉴别与薄层色谱鉴别论文_周雨晴1,杜沛霖2,梁迪3,秦丽2,桂裕昌1,许建

(1广西中医药大学第一附属医院 广西 南宁 530023)

(2广西中医药大学 广西 南宁 530200)

(3广西中医药大学附属国际壮医医院 广西 南宁 530001)

(4广西医科大学第一附属医院康复医学科 广西 南宁 530021)

【摘要】目的:建立药艾条的显微鉴别和薄层鉴别方法,以提高其质量控制标准。方法:对药艾条内容物进行显微观察和薄层色谱法,对药艾条进行定性鉴别。结果:药艾条经显微鉴定发现其石细胞、射线细胞、嵌晶纤维、木薄壁细胞、非腺毛、气孔等特征明显,可作为确定其含有艾叶、桂枝、海风藤、地枫皮、千斤拔、横经席、战骨等中药的标准;战骨、桂枝、横经席、艾叶薄层色谱斑点清晰。结论:建立的药艾条的显微鉴别和薄层色谱法可以作为本品质量标准的制定提供参考依据。

【关键词】药艾条;显微鉴别;薄层色谱鉴别;质量标准

【中图分类号】R284.1 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752(2017)35-0321-03

Microscopic and TLC identification of medicine moxa

Zhou Yuqing1,Du Peilin2,Liang Di3,Qin Li2,Gui Yuchang1,Xv Jianwen4.

1 The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Guangxi Nanning 530023,China;2 Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Guangxi Nanning 530200,China;3 International Zhuang Medical Hospital Affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Guangxi Nanning 530001,China;4 Department of Rehabilitation Medicine,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,GuangxiNanning 530021,China,China.

【Abstract】Objective To establish the quality standard for compound moxa by microscopic identification and thin layer identification. Methods Microscopic characteristics of the compound moxa were studied based on its powder and TLC was adopted to identify the compound moxa. Results The stone cells, ray cells,embedded fibers,wood parenchyma cells, glandular hairs, stomatal Could be found in the powder of compound moxa,which belonged to the Artemisiae Argyi Folium, Cinnamomi Ramulus, Piperis Kadsurae Caulis, Illicium difengpi K. I.B. et k.I.M., Flemingia philippinensis, Calophyllum membranaceum Gardn. Et Champ, Premna fulua Craib. TLC spots of Prenna fulva Craib,Cinnamomi Ramulus, Calophyllum membranaceum Gardn.et Champ, Artemisiae Argyi Folium were clear. Conclusion The established quality standards of compound moxa were convenient,rapid and accurate and can be applied for effective control of the quality of the compound moxa.

【Key words】Medicinal Moxa Stick;Microscopicindentification;TLC;Qualitystandard

自拟复方壮药艾条,由艾叶,桂枝,横经席,海风藤,地枫皮,千斤拔,红鱼眼,战骨,七叶莲,走马胎共十味中药卷制成药艾条。本品除具有常规艾条的补益肝肾、活血化瘀、通络止痛、散寒湿等功效等作用[1],方中壮药横经席[2]、红鱼眼[3-4]、七叶莲[5]、地枫皮[6]和千斤拔[7]均有较强的抗炎镇痛作用,且千斤拔[8]还起到调节免疫的功能,而战骨具有抗氧化作用[9],另外海风藤有一定抗风湿的作用[10-11],共拟复方尤其善于治疗强直性脊柱炎。本实验采用显微鉴别法和薄层鉴别法对该药艾条内容物进行研究,以利为本品质量标准的制定提供参考依据。

1.实验材料、试剂与仪器

1.1 实验材料与试剂

艾叶20000g、战骨1250g、桂枝1250g、横经席1250g、千斤拔500g、七叶莲500g、走马胎500g、海风藤500g、地枫皮500g、红鱼眼500g,以上药材均购自南宁市景昌中药饮片有限公司。以上十味,艾叶碾成艾绒;其余九味粉碎成细粉,过筛,混匀。取艾绒20g,均匀平铺在一张长28cm、宽15cm的白棉纸上,再均匀散布上述粉末8g,将棉纸两端折叠约6cm,卷紧成条,粘合封闭,低温干燥,制成1000支,即得。

柚皮素对照品(上海融禾医药科技有限公司,批号:160629)、桂皮醛对照品(中国食品药品检定研究所,批号:110710-201619)、藤黄酸对照品(中国食品药品检定研究院,批号:111966-201401)、桉油精对照品(中国食品药品检定研究所,批号:110729-201513)、水合氯醛、丙三醇、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚(30~60℃)、二乙胺、环己烷、丙酮、三氯化铝、二硝基苯肼、香草醛均为分析纯,国药集团化学试剂有限公司提供。

1.2 实验仪器

数码显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司;型号:BA210Digital),载玻片,盖玻片,酒精灯,镊子,试管夹,火柴,硅胶G板(青岛海洋化工厂);电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司,SQP);超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,KQ5200B);离心机(上海安亭科学仪器厂,TGL-16G);紫外线分析暗箱(武汉药科新技术开发有限公司,YOKO-ZX);电热恒温鼓风干燥箱型(上海齐欣科学仪器有限公司,DHG-9240A)。

2.实验方法和结果

2.1 显微鉴别

取本品,撕去棉纸,置显微镜下观察:射线细胞经向纵断面呈类方形或长方形,壁连珠状增厚,常与木纤维连结(见图1)。纤维成束或单个散在,很多表面附着许多方晶,形成嵌晶纤维(见图2)。木薄壁细胞呈类方形或类长方形,具许多圆形纹孔,壁呈细小连珠状增厚,内含成片的淀粉粒(见图3)。石细胞(a)类方形、类圆形或不规则形,成群或单个散在,壁厚,有的三面增厚一面菲薄(见图4 )。石细胞(b)灰白色或淡黄白色,呈类三角形或不规则形,壁甚厚,层纹明显,胞腔较大且内含深红色物(见图5)。石细胞(c)淡黄绿色,类方形或不规则形,壁较厚,孔沟明显,纹孔极细密(见图6)。非腺毛(a)呈T字形,顶端细胞长而弯曲,柄2-4细胞(见图7)。非腺毛(b)由多个单列细胞组成,有的非腺毛壁上有细小疣状突起,有的呈塔形(见图8)。下表皮气孔(a)较多,气孔不定式,副卫细胞4~5个(见图9)。气孔(b)不定式,副卫细胞较多(见图10)。

由T字形毛弯曲可知含有艾叶。由粉末中的嵌晶纤维和嵌晶石细胞可确定本品含有海风藤。由常与木纤维连结的木射线细胞和一面菲薄的石细胞可知含有桂枝。由粉末中的石细胞(c)可知地枫皮的存在。由木薄壁细胞(a)可知该制剂中含有千斤拔。由非腺毛(b)和下表皮气孔(a)可确定横经席的存在。

由以上可知,其显微特征明显其鉴别要点为:(1)本品中桂枝、横经席、战骨、地枫皮、七叶莲、海风藤、千斤拔、走马胎、红鱼眼均具有石细胞,地枫皮石细胞较大,壁厚,层纹明显,胞腔内含有深红色物;桂枝石细胞单个散在或成群,三面壁厚一面菲薄;战骨石细胞为类方形、长梭形或不规则形,壁较厚,孔沟明显,纹孔极为细密,胞腔含深棕色物;海风藤石细胞嵌有方晶。可以通过对比它们石细胞的形状、颜色、胞腔层纹、纹孔及孔沟等加以区分。(2)艾叶与横经席都具有气孔,且气孔都为不定式,但艾叶多位于下表皮突起处,副卫细胞较多但横经席副卫细胞4~5个,可以区别。

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1战骨 取本品,撕去棉纸,称取内容物5g,加乙酸乙酯20ml,超声处理30min,滤过,浓缩滤液,1300r/min,离心10min,作为供试品溶液。按处方比例制备不含战骨的药艾条,取5g,同法制成缺乏战骨的阴性对照溶液。称取柚皮素对照品适量,加乙酸乙酯制成浓度为0.8mg/ml的柚皮素对照品溶液。照薄层色谱法[1],分别吸取供试品10μl、对照品5μl、阴性样品溶液10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯(10:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷1%三氯化铝乙醇溶液,于105℃烘箱加热20min左右,在紫外灯365nm下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同蓝色荧光斑点,阴性对照无此斑点。结果见图11(a)。

2.2.2桂枝 取本品,撕去棉纸,称取内容物5g,加乙醇20ml,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使其溶解,作为供试品溶液。按处方比例制备不含桂枝的药艾条,取5g,同法制成缺乏桂枝的阴性样品溶液。取桂皮醛对照品5μl,置于20ml容量瓶,用乙醇定容,制成0.25μl/ml的桂皮醛对照品溶液。照薄层色谱法[1],分别吸取供试品10μl、对照品3μl、阴性样品溶液10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,石油醚(30~60℃):乙酸乙酯(8:1)作为展开剂,展开,取出,晾干,喷1%二硝基苯肼乙醇溶液,于105℃烘箱加热使斑点显色清晰,至日光下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同蓝色荧光斑点,阴性对照无此斑点。结果见图11(b)。

2.2.3横经席 取本品,撕去棉纸,称取内容物10g,加甲醇30ml,密塞,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使其溶解制成供试品溶液。按处方比例制备不含横经席的药艾条,取10g,同法制成缺乏横经席的阴性样品溶液。称取藤黄酸对照品约0.4mg,加甲醇2ml,制成每1ml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[1],分别吸取供试品20μl、对照品10μl、阴性样品溶液20μl,点于同一硅胶G薄层板上。以三氯甲烷-甲醇-二乙胺(15:1:1)作为展开剂,展开,取出,晾干,于105℃烘箱加热20min左右,置紫外灯光(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同蓝色荧光斑点,阴性对照无此斑点。结果见图11(c)。

2.2.4艾叶 取本品,撕去棉纸,称取内容物3g,加石油醚(30~60℃)35ml,置水浴加热回流30min,滤过,滤液挥干,残渣加正己烷1ml,溶解,作为供试品溶液。按照药艾条制备方法,制备不含艾叶阴性对照品,取3g,同法制成阴性样品溶液。取桉油精对照品,加正己烷制成每1ml含1μl的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[1],吸取上述3种溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-石油醚(30~60℃)-丙酮(6:10:1)为展开剂展开,取出,挥干溶剂,喷1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至斑点显色。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,且阴性无干扰。结果见图11(d)。

图11 战骨、桂枝、横经席、艾叶薄层色谱图

a.战骨;b.桂枝;c.横经席;d.艾叶 1.供试品 2.对照品 3.阴性对照

3.讨论

3.1 对自拟药艾条中艾叶、海风藤、桂枝、千斤拔、横经席,地枫皮等进行了显微鉴别研究,其显微特征明显。通过观察比对石细胞、射线细胞、嵌晶纤维、木薄壁细胞、非腺毛、气孔等专属性特征,可定性检查出药艾条制剂中的艾叶、桂枝、海风藤、地枫皮、千斤拔、横经席、战骨等七味药材。

3.2 对药艾条进行了薄层色谱鉴别研究,确定了战骨、桂枝、横经席、艾叶的薄层鉴别方法,其方法简便易行,分离斑点清晰,阴性对照无干扰,重复性好,专属性强。

3.3 本文建立了自拟药艾条的显微鉴别和薄层鉴别方法,其方法简单有效,结论可靠,可作为其质量标准参考依据。然而,仅有显微鉴别和薄层鉴别研究的定性研究还不够,未来还需进行定量研究,进一步提升本品药艾条的质量标准。

【参考文献】

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2015年版

[2]韦健全,罗莹,黄健,等.横经席抗炎镇痛作用及急性毒性的实验研究[J].时珍国医国药,2012,23(03):639-641.

[3]黄彬彬,马健雄.壮药红鱼眼三萜类成分镇痛和抗炎活性实验研究[J].中国药业,2013,22(18):17-18.

[4]蔡小玲,秦贻强,李江.红鱼眼醇提物的急性毒性及抗炎作用[J].中国医院药学杂志,2011,31(23):1931-1933.

[5]章立华,刘力,林小凤,等.七叶莲挥发油的GC/MS分析和抗炎镇痛作用研究[J].安徽农业科学,2014,42(23):7732-7735.

[6]宁德生.壮药地枫皮抗炎活性成分研究[A].中国植物学会民族植物学分会、中国科学院昆明植物研究所.第八届中国民族植物学学术研讨会暨第七届亚太民族植物学论坛会议文集[C].中国植物学会民族植物学分会、中国科学院昆明植物研究所:,2016:2.

[7]杜沛霖,周雨晴,黄贵华,等.千斤拔属植物的化学成分?药理作用?临床应用研究进展[J].安徽农业科学,2017,45(06):109-111.

[8]卓燊,秦海洸,陈君,等.千斤拔对小鼠免疫功能的调节作用[J].时珍国医国药,2014,25(11):2641-2643.

[9]黄琼,陈丽芬,林翠梧,等.药用植物战骨中黄酮类化学成分及抗氧化作用研究[J].时珍国医国药,2009,20(11):2706-2708.

[10]刘艳菊,文莉,黄丽,等.海风藤挥发油抗风湿作用的药效学[J].中国医院药学杂志,2007,(02):218-219.

[11]秦晴,阙金花,张玉琴,等.海风藤正丁醇提取物抗类风湿作用药效学研究[J].亚太传统医药,2015,11(04):13-15.

论文作者:周雨晴1,杜沛霖2,梁迪3,秦丽2,桂裕昌1,许建

论文发表刊物:《医药前沿》2017年12月第35期

论文发表时间:2018/1/11

标签:;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  

药艾条的显微鉴别与薄层色谱鉴别论文_周雨晴1,杜沛霖2,梁迪3,秦丽2,桂裕昌1,许建
下载Doc文档

猜你喜欢