孟莹[1]2000年在《雾化吸入雷公藤内酯醇治疗哮喘的实验研究》文中指出一、背景与目的 雷公藤可以降低哮喘模型的气道高反应性，减少炎症反应，对参与介导炎症反应的细胞因子起调节作用。目前动物实验多以腹腔内注射给药。本实验研究首次以雾化吸入雷公藤内酯醇作为治疗哮喘的手段，并对其作用机制进行初步探讨。二、材料与方法 60只豚鼠，体重250-300g，平均分为5组。10％卵清蛋白混悬液1ml腹腔内注射致敏。15天后以10％卵清蛋白雾化吸入，1次/日×7，诱喘制模。从诱发第一天起，在诱发前30分钟，雷公藤治疗组以雷公藤内酯醇（8ug/ml）雾化吸入3O分钟。激素治疗组以地塞米松腹腔内注射（1mg/kg体重）。雷公藤-激素治疗组以雷公藤内酯醇（8ug/ml）雾化吸入30分钟并地塞米松腹腔内注射（1mg/kg）。1次/日×7天。以正常组为对照。7天后，在诱发24小时后测定气道反应性（以PC_(20)值表示）；光镜及电镜下观察组织学改变，图象分析系统测定细支气管管壁面积及比例；利用膜片钳技术对支气管平滑肌细胞膜上的钾离子通道进行研究。三、结果 1、哮喘组气道反应性（PC_(20)）值（4.333E-2±1.966E-2）较正常对照组（0.3467±0.1573）明显增加（P＜0.01）。雷公藤治疗组PC_(20)（0.1333±4.131E-2）较哮喘模型组有所下降，但无明显差异（P＞0.05），地塞米松组（0.2000±9.798E-2）较哮喘组、雷公藤组明显降低（P＜0.01），地塞米松－雷公藤治疗组（0．1333 t 4．131E－2）恢复到正常对照组水平（po．316，＞0．05）。 2、哮喘组细支气管管壁厚度、比例（58597．84土2302o．87：o．857o士 4．27E－2）明显大于正常对照组（30626．51士 14085，43：0．5764 f6．60E－2）（fkl．of），雷公藤治疗组（40641．36土15398．66；0．6929土0．126）、地塞米松治疗组（33721．64土8556．53；0．6884土4．68E－2）、雷公藤－地塞米松治疗组（26981．68土77始．沁；o．5996土7．82卜2）依次明显减少（peo．of人雷公藤－地塞米松治疗组降至正常水平（PO．631，＞0．05；poo．465，＞0．05）。 3、电镜结果示：哮喘模型的毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞的基膜明显增厚，11型肺泡上皮细胞的绒毛倒伏，排列紊乱，部分甚至坏死脱落，肺泡上皮细胞之间的紧密连接结构变得松散，电子密度降低、模糊，并有大量的嗜酸性粒细胞浸润至肺泡隔及肺泡腔内；而雷公藤治疗后可见基底膜增厚的程度明显减轻，11型肺泡上皮细胞的绒毛有部分恢复，但是较为纤细，紧密连接增强，并有部分＊型肺泡上皮细胞增生，仍有少量嗜酸性粒细胞的浸润。 4、支气管平滑肌膜上的钾离子通道在膜电位二－30mV时，哮喘组通道电流幅度、电导值（－2．狈土0．36pA；肠．8土5．6ps）较正常对照组卜3．04土0．32p山76土5．1的）降低o＜o．01）雷公藤治疗组（一2．51土0．43PA；38．2士8．6PS）与哮喘组没有明显差异（NO．05）。当膜电位由－50mV升至 omV时，正常组开放时间常数中的长成分由 12．64t2．68升至43．22Lujo，哮喘组由2．68L二刀0升至12．94d5．4o沪功乃1），雷公藤治疗组由2．54if．88升至12．94＊6刀0，与哮喘组没有明显差异（NO．05）。三者均随着去极化程度的增加而增加，但是哮喘组、雷公藤治疗组本身及所增加的数值较正常对照组低（＜o乃1）。当膜电位由－50mV升至omV时，正常组开放概率由0．265t0．066升至0．943L0刀68，哮喘组由0．00410．004升。至o．28肚o．082 （＜o．01），雷公藤治疗组由o．00成o＊06升至o．274土＊＊so，与哮喘组没有明显差异（HO．05）。三者均随着去极化程度的增加而增加，但是哮喘组、雷公藤治疗组本身及所增加的数值较正常对照组低（P＜刀 1）。 四、结讼 ·4· 雾化吸入雷公藤内酯醇对哮喘有一定治疗作用；与地塞米松有协同 或相加作用；雷公藤内酯醇可能不是通过支气管平滑肌细胞膜上的钾离 子通道起作用。
莫碧文, 王昌明, 张珍祥, 徐永健, 熊维宁[2]2007年在《雷公藤对哮喘大鼠气道重构及磷脂酰肌醇3激酶表达的影响》文中研究指明目的:探讨雷公藤内酯醇对哮喘气道重构及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为5组(n=8):A组(正常对照组);B组(哮喘4周组);C组(哮喘6周组);D组(给药4周组);E组(给药6周组)。测定气道反应性并观察气道壁嗜酸性粒细胞浸润;图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数量;免疫组织化学染色、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K蛋白及mRNA表达。结果:①B组、C组PI3Kp85α的蛋白及mRNA表达水平显著高于A组(P均<0.01),E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低(P<0.01、P<0.01、P<0.05);②B组及C组支气管壁厚度、支气管壁平滑肌厚度、支气管壁平滑肌细胞核数量均较A组明显增加(P均<0.01),而E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低(P均<0.01);③B组、C组的气道反应性均高于A组(P均<0.01),E组较B组、C组、D组均显著降低(P<0.01、P<0.01、P<0.05)。结论:气道平滑肌增生是气道重构的一个显著特征,PI3K可能在此起促进作用。雷公藤内酯醇可能通过下调PI3K的表达而减轻哮喘气道高反应性及抑制气道平滑肌增生,对哮喘气道重构有一定治疗作用。
韩青[3]2003年在《雷公藤内酯醇干预对哮喘豚鼠肺组织病理及内皮素1系统表达影响的研究》文中研究说明目的：①观察哮喘豚鼠血浆和肺组织中内皮素1(endothelin-1，ET-1)及肺组织中ET-1、ETA、ETB和ECE的mRNA表达的动态水平变化，以及哮喘豚鼠肺组织的病理变化。②研究雷公藤内酯醇(triptolide,TP)干预对血浆、肺组织ET-1水平及肺组织中ET-1、ETA、ETB、ECE的mRNA表达和肺组织病理变化的影响。③分析肺组织的病理改变与肺组织ET-1水平变化及TP干预的关系。 方法：108只豚鼠随机分为对照组(C)、哮喘组(A)和干预组(T)。其中对照组分为正常对照组(C_0)、DMSO对照组(C_D)及致敏不诱发哮喘的哮喘对照组(C_A)和致敏不诱发哮喘的干预对照组(C_T)，哮喘组和干预组依次分为0h组(A_0、T_0)、2h组(A_2、T_2)、4h组(A_4、T_4)、8h组(A_8、T_8)、12h组(A_(12)、T_(12))、24h组(A_(24)、T_(24))、2周组(A_(2w)、T_(2w))；0～24h哮喘和干预组又称为急性组，2周哮喘组和干预组又称为慢性组。建立豚鼠哮喘模型，诱喘后用放射免疫法测定血浆和肺组织匀浆中ET-1水平，逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测ET-1、ETA、ETB和ECE的mRNA表达量。并取肺组织常规切片染色，进行气道壁、气道和血管平滑肌及肺泡壁的图象分析并进行炎性细胞分类计数。 结果：诱喘后哮喘组各指标均有不同程度的升高，TP可不同程度的抑制这种改变。 1、血浆ET-1水平比较：(1)各哮喘组和干预组与正常对照组比较：诱喘后8h哮喘组显著升高，随后又迅速下降。慢性哮喘组和各干预组均无明显改变。(2)哮喘组间比较：8h哮喘组显著高于0、2、4h哮喘组，其余各哮喘组间无显著差异。(3)干预组间比较：8h干预组显著高于4h干预组，而其他各组间无显著差异。(4)哮喘组与同时段干预组间比较：8h哮喘组显著高于8h干预组，而其他时段哮喘组与干预组间无显著性差异。 2、肺组织ET-1水平比较：(1)各哮喘组和干预组与正常对照组比较：2～24h急及慢性哮喘组均显著升高，以4h最为显著。TP干预后，2、4、8h仍显著高于对照组，但12h以后明显下降，与对照组无显著差异，慢性组更是接近于正常对照组。(2)哮喘组间比较：首次诱喘0～8h 山京K木【人个，讪1／”广什沦义逐渐增高，sh达高峰，随后逐渐下降，但到 24h时仍高于对照纽。O）干预组间比较：首次诱喘4h达高峰，］填后下降。2周时下降更明显。料）哮喘组与同时段干预组间比较：首次诱喘oh已有显著差异，4、sh差异更加明显，慢性组间差异最显著。 3、同组血浆和肺组织叮－1水平比较：就所讥］数值比较，正常对照组肺组织日下1显著低于血浆。门）哮喘组：Zh肺组织＊11水平已显著高于血浆，4h最为显著，12h时肺组织 ET刁水平虽仍高于血浆，但已无显著差异。到24h时肺组织ET刁水平甚至略低于血浆。慢性哮喘组血浆与肺组织盯刁水平无显著差异。o厂P干预后4h时肺组织 ET－l水平才显著高于血浆，sh肺组织盯J水平迅速下降，到 12、24h已接近于正常对照组水平。 4、肺组织中日＊、＊TA、＊＊B和mE的基因衣达匕权厂－：Ctin）：门）哮喘组各指标均有不同程度的升高。首次诱喘后，ET刁、ETATAmRNA和 ECEmRNA 匀在 Zh 升高最明显，分别达峰值 0．95。0．12、0．64土0．13、O．7 2土0．门，较正常对照组显著增加（P＜O．01），卉分别于24h、12h、sh降低至接近正常水平。ETBmRNA升高不明显。哮喘两周组除ECE＜RNA夕1、，各指标均显著增加（P＜O．OI－O．OS）。（2）较同时段哮喘组，各干预组均下降。ET刁mRNA和ETAmRNA：2《 干预组及慢性于预组分别显著低于同时段哮喘组；ETBmRNA：急性哮喘组与干预组间均无显著差异，慢性干预组较慢性哮喘组显著降低。ECEmRNA：2－4h哮喘组显著高于正常对照组。慢性干预组除 ECEmRNA外均显著低于慢性哮喘组。 5、急、慢性哮喘组肺组织病理变化的比较：各哮喘组段、细支气管壁内及周围大量炎性细胞特别是嗜酸性粒细胞浸润，PMN亦明显增高。管腔内气道粘膜脱落，可见大量分泌物。慢性哮喘纽段、细支气管及血管平滑月几增生肥厚。各干预组炎性细胞减轻，管腔内炎性渗出物减少或消夫，慢性哮喘组气道及血管平滑肌增生肥厚等被抑制。另外，DMSO对照组与4h哮喘组间、慢性干预组与正常对照组间各指标均无显著差异。 6、以上各指标，DMSO对照组与4h哮喘纽相似，正常对照组致敏 山仙门’【人，｝M卜学仆沦义不诱发哮喘的哮喘对照组及致敏不诱发哮喘的干预对照组和慢性干预纽相 丫。 7、相关性分析 肺组织ET刁 水平与气道炎性细胞总数、LC 计数显著正相关（r＝斗50，P＜0＊队r＝斗m，P＜0＊队r＝斗14，P＜0＊01），与日11mRNA、＊Am＊NA、＊ EmRNA衣达亦显者正相关（r二石08，P＜O刀01；r＝．560，P＜0＊0！；f＝0．267，P＜0＊ 1）。 结论 哮喘时血浆和肺组织日T叫显著增加，肺组织ECE、日T刁及其受体基因表达亦有不同程度的升高，肺组织炎性细胞特别是EOS浸润显著增办，并有气道及血管重塑；TP
徐丽[4]2012年在《天贝汤对支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响的实验研究》文中进行了进一步梳理目的：支气管哮喘（bronchial asthma，简称哮喘）是以气道炎症、气道重塑、可逆性气道阻塞、气道高反应性为主要特征的由多种因素引起的一种气道慢性炎症性疾病，是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的一种呼吸系统疾病。近二十年来，随着工业化和全球污染的加剧，在世界范围内哮喘的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，全球患者约3亿左右，严重威胁着人们的身体健康和生存质量。加之哮喘病程绵长难愈，给社会带来了严重的经济负担。所以，哮喘已成为严重的公共卫生问题而引起了世界各国的极大关注。到目前为止，全身或局部应用糖皮质激素仍然是治疗哮喘的首选，但长期应用副作用明显。中医中药防治哮喘应该受到重视，特别是在减少副作用，预防复发等方面与西药比较有一定的优势。本文还概述了历代中医学家对哮喘的病名、病因病机、辨证施治的认识，对中药及中医药治疗哮喘的现代临床与机理研究作了全面总结。阐述了哮喘的现代流行病学、病因病机等。天贝汤是导师郭振武教授的临床经验方，具有宣肺降气、化痰平喘之功。本课题在建立大鼠支气管哮喘模型的基础上，予天贝汤进行干预，通过对本动物实验的观察，选择与哮喘发病机制相关的多项指标，探讨天贝汤对支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的作用和机制，为中医中药临床治疗支气管哮喘提供理论依据。材料与方法：72只健康雄性SPF级Wistar大鼠，体重240±20g，实验动物许可证号SCXK(京)2009-0004，随机分为正常对照组、哮喘模型组、天贝汤高剂量组（以下简称为高剂量组）、天贝汤中剂量组（以下简称为中剂量组）、天贝汤低剂量组（以下简称为低剂量组）、小青龙对照组（以下简称为小青龙组），每组12只。天贝汤组成：麻黄、茯苓、清半夏、川贝、天麻等组成，小青龙胶囊组成：麻黄、白芍、细辛、干姜、炙甘草、桂枝、半夏、五味子。将上方加水煎煮三次合并后过滤。低温(4℃)放置备用。天贝汤高、中、低剂量组，给药剂量分别是：高剂量组9ml/kg,中剂量组4.5ml/kg，低剂量组2.25ml/kg，小青龙组给药剂量0.972g/kg。从第15天开始给药，直至处死，每日1次灌胃，连续6周。各组参照吕国平等介绍的方法，分为致敏和激发两步。除正常对照组外，实验第1d和第8d共2次每只大鼠腹腔注射新鲜配制的含10%卵蛋白的生理盐水1ml（内含卵蛋白100mg，氢氧化铝100mg和灭活百日咳杆菌6×109个）致敏，致敏15d后各组灌胃后1小时后将大鼠放入不完全封闭的雾化吸入箱内开始激发，用超声雾化器喷入含1%卵蛋白激发，每次雾化20分钟，每日1次，激发6周，激发后以大鼠烦躁、打喷嚏、咳嗽、抓鼻、大小便失禁、呼吸幅度加深及喘促发作、紫绀等哮喘发作症状，认为哮喘造模成功。正常对照组以生理盐水代替卵蛋白进行腹腔注射及雾化吸入，雾化流量及时间同前。第一部分天贝汤对支气管哮喘大鼠支气管病理组织学观察末次喷雾激发后18-24h内予乙醚麻醉动物，以固定板固定后打开并暴露胸腔，开胸结扎，剥离肺组织，取出肺组织，于4℃4%多聚甲醛固定，脱水、包埋、切片，HE染色观察。第二部分各组大鼠体重和被激发时的表现的变化第三部分天贝汤对支气管哮喘大鼠肺组织核因子-κB（NF-κB）的影响核因子-κB（NF-κB)是一种具有多种功能的核转录因子，具有广泛的生物学活性，不仅参与哮喘的气道炎症反应，还参与哮喘气道重塑的过程。动物分组、模型建立、用药情况及数据统计处理同前。动物麻醉完全后，取肺组织于4%多聚甲醛固定，脱水、包埋、切片，行免疫组织化学ABC法染色。一抗选用兔抗p52(N F-кB的一个亚单位)多克隆抗体(武汉博士德生物工程公司)稀释度1∶100;用SABC法试剂盒进行操作,操作步骤按试剂盒说明书进行。主要操作步骤如下：石蜡切片常规脱蜡脱水，3%H2O2溶液灭活内源性过氧化物酶，热修复1h。滴加山羊封闭血清，湿盒孵育，加入一抗（1:100稀释）湿盒孵育1h，4℃冰箱内过夜，PBS漂洗，加入生物素化二抗37℃孵育，PBS漂洗5min，3次。⑧滴加ABC复合物37℃孵育30min，PBS漂洗5min，3次。⑦二氨基联苯胺(DAB)光镜下显色5-15min，终止呈色反应。苏木精衬染，常规裱片、封片和观察。计算机图象处理软件半定量测定NF－κB表达。第四部分天贝汤对支气管哮喘大鼠血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响。气道重塑是慢性哮喘反复发作的重要病理生理基础，它与哮喘肺功能损害及气道高反应性密切相关。细胞外基质(ECM)的沉积和降解的失衡是导致气道壁结构异常、间质增生和肺实质破坏的重要原因，ECM主要由基质金属蛋白酶（MMPs）来降解,其中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是锌依赖性蛋白酶，MMP-9催化集团区含有3个重复的类Ⅱ型纤维连接蛋白结合区，决定了它对明胶和弹力纤维的底物特异性，主要降解Ⅳ型以及Ⅴ型胶原。近来研究表明MMP-9在支气管哮喘患者的气道炎症和气道重塑中发挥重要作用。动物分组、模型建立、给药情况及数据统计处理同第一部分。动脉血血清中MMP-9、TIMP-1含量检测：采用双抗体夹心法ABC-ELISA法测定MMP-9、TIMP-1含量，具体方法如下。①建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中加入样品稀释液100μl，第一孔加入标准品100μl，混匀后用加样器吸出100μl，移至第二孔，如此反复行对倍稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸出100μl弃去，使之体积为100μl，第八孔为空白对照。②加样：待测样品孔中每孔加入待测样品100μl。③将反应板充分混匀后放置37℃120分钟。④洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。⑤每孔中加入第一抗体工作液50μl，将反应板充分混匀后置37℃60分钟。⑥用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。⑦每孔加酶标抗体工作液100μl，将反应板置37℃60分钟。⑧用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次。每孔加入底物工作液100μl，置37℃暗处反应5-10分钟。每孔加入1滴终止液混匀，在492nm处测吸光值。以标准品2000、500、250、125、62、31、0ng/ml之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线，根据样品OD值在该标准曲线上查出MMP-9的含量，TIMP-1方法同MMP-9。第五部分天贝汤对支气管哮喘大鼠肺组织表面相关凋亡基因蛋白Fas和Bcl-2表达的影响动物分组、模型建立、用药情况及数据统计处理同前。动物完全麻醉后，取肺组织，加入Trizol充分匀浆，提取总RNA，采用RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中相关凋亡基因蛋白Fas和Bcl-2表达的变化。统计学方法：数据采用均数±标准差（—x±s)表示，用SPSS统计软件处理，统计方法采用单因素方差分析及LSD检验。显著差异水平以0.05和0.01为标准。结果：1.天贝汤对哮喘大鼠支气管-肺组织病理学的影响肺组织肉眼形态观察:正常对照组:肺组织颜色淡红，肺组织柔软而富有弹性，表面光滑。哮喘模型组:肺组织过度膨胀，部分肺组织颜色变深，呈暗红色，质地稍硬，表面有呈颗粒状的瘀点。天贝汤各剂量组和小青龙组肺组织颜色稍暗，膨胀不明显，无瘀斑瘀点。光镜观察：正常对照组：大鼠支气管内及其周围无明显的炎性细胞浸润，支气管壁完整光滑，细胞排列规整，平滑肌层厚度正常，支气管粘膜规整，管腔内无脱落上皮细胞。模型组：支气管管壁及伴行的动脉周围有大量嗜酸性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，管腔内容物增多，微血管渗漏，可见管腔内炎性分泌物增多，有的小支气管甚至被粘液栓及炎性细胞所堵塞。杯状细胞增生，气道上皮指状增生，平滑肌层增厚，排列紊乱，支气管粘膜水肿增厚，上皮脱落，上皮下纤维化，支气管粘膜皱壁增多、延长。高剂量组：嗜酸性粒细胞及淋巴细胞等炎性细胞浸润明显减少，几乎消失，水肿明显消失，管壁和平滑肌层厚度接近正常对照组,逐渐恢复，支气管粘膜规整，支气管管腔内偶见脱落上皮细胞及粘液。中剂量组：嗜酸性粒细胞及淋巴细胞等炎性细胞浸润有所减少，管壁和平滑肌层厚度有所减少，气管管壁结构层次清楚，支气管管腔内偶见脱落上皮细胞及黏液，管腔渗出物逐渐吸收。低剂量组：支气管周围嗜酸性粒细胞及其他炎性细胞浸润略微减少，管壁和平滑肌层厚度略减少，管腔内偶见脱落上皮细胞及黏液。小青龙组：黏膜下层见轻度充血水肿及少量炎症细胞，管腔内见炎性渗出物，粘膜增生，支气管腔内少量脱落细胞和粘液。2.各组大鼠体重和被激发时的表现的变化体重：激发后各组大鼠体重均增。空白组大鼠体重与其余各组有差异，高于其余各组(p<0.01)；高、中、低剂量组，小青龙组及模型组之间无统计学意义(p>0.05)。被激发时的表现：空白组大鼠表现活泼好动，动作灵敏，毛色光滑，呼吸平稳。模型组大鼠在吸入OVA后不久即出现过敏症状如：躁动不安，搔抓、舔肢体、打喷嚏等，继而大鼠反应迟钝，出现呼吸急促，呼吸困难(明显的腹式呼吸)，伴轻度紫绀，部分大鼠可闻及响亮的呼气相喘鸣音和不规则呼吸。与哮喘模型组比较，高、中剂量组症状减轻，无呼吸急促，无紫绀，无呼气相喘鸣音；低剂量组和小青龙组呼吸稍急促，无紫绀，喘鸣音减轻。在高中低剂量组比较中，高剂量组较低剂量组比较有明显好转，没有呼吸急促和呼吸困难症状，大鼠毛色光泽较好，精神也较好。3.对哮喘大鼠支气管NF－κB表达的影响与正常对照组比较，模型组NF－κB表达明显增加，差异具有显著性意义（P<0.01）。与模型组比较，NF－κB在各治疗组阳性表达减少，高剂量组降低最明显（P<0.01），其次为中剂量组、小青龙组、小剂量组；与小青龙组对比，高剂量组NF－κB含量低，二者差异具有显著意义﹙p<0.01﹚。4.对支气管哮喘大鼠动脉血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的影响。与正常对照组相比，模型组大鼠MMP-9、TIMP-1含量明显升高，差异具有显著性意义﹙p<0.01﹚，证明哮喘模型建立成功；与模型组比较，各治疗组MMP-9含量均降低，高剂量组降低最明显﹙p<0.01﹚，其次为中剂量组、小青龙组，低剂量组次之。与小青龙组相比，高剂量组含量低，二者差异具有显著意义﹙p<0.01﹚。5.对支气管哮喘大鼠相关基因蛋白Fas mRNA、Bcl-2mRNA表达的影响。与正常对照组比较，模型组Bcl-2mRNA表达明显增多(P﹤0.01)，Fas mRNA表达明显减少﹙p<0.05﹚；与模型组比较，各治疗组Bcl-2mRNA表达减少，高剂量组减少最明显﹙p<0.01﹚，其次为中剂量组、小青龙组、小剂量组，与小青龙组比较高、中、低剂量组无统计学意义；与低剂量组比较，高剂量组Bcl-2mRNA表达强度低，二者差异具有显著意义﹙p<0.05﹚。与模型组比较，Fas mRNA在各治疗组表达有所增多,高剂量组增多最明显﹙p<0.05﹚，其次为中剂量组、小青龙组、小剂量组，但均无统计学意义；与小青龙组比较高、中、低剂量组均无统计学意义。与低剂量组比较，高、中剂量组、小青龙组均无统计学意义。结论：1.哮喘发病与痰、风等致病因素有关。风盛痰阻、气道挛急是哮喘发作的主要病机，治疗以宣肺降气、化痰平喘及调理脏腑并举。2.天贝汤具有宣肺降气、化痰平喘及调理脏腑的作用，对哮喘有确切的治疗作用。3天贝汤治疗哮喘的作用机制3.1对气道重塑的影响。对支气管-肺组织病理学观察结果显示，模型组支气管粘膜上皮部分脱落，黏膜下层充血水肿，嗜酸性粒细胞等炎细胞浸润，黏膜下平滑肌显著增生肥厚。与正常对照组相比，模型组出现气道重塑。经天贝汤治疗后，气管管壁结构逐渐恢复，炎症明显减轻，水肿明显消失，增生的平滑肌细胞基本恢复正常。提示天贝汤具有抑制哮喘豚鼠气道重塑，从而发挥平喘作用。其机制可能是通过减少气道EOS浸润，减少炎症介质分泌、释放，减轻炎性细胞渗出，抑制杯状细胞和平滑肌细胞增生，从而减轻气道炎症反应，抑制气道重塑。3.2天贝汤能降低支气管哮喘大鼠肺组织中NF－κB的含量，从而从细胞因子角度解释天贝汤对气道炎症的抑制作用。3.3天贝汤抑制气道重塑和细胞外基质沉积的作用可能与其降低动脉血清中MMP-9、TIMP-1含量有关。3.4天贝汤抑制气道炎症和气道重塑的作用可能与其降低肺组织中Bcl-2mRNA表达，增加Fas mRNA表达有关。4.天贝汤对实验性哮喘大鼠的平喘作用，具有剂量依赖关系，并且部分优于经典方剂小青龙汤，其机制有待于进一步深入研究。天贝汤通过多途径、多层次、多靶点抑制气道炎症和气道重塑，具有广阔的应用前景。
陶婧婧[5]2015年在《无创清醒挪威褐鼠过敏性哮喘模型建立及应用雷公藤多苷治疗的探索》文中提出目的建立卵蛋白(OVA)致敏激发后,在挪威褐鼠无创且清醒的状态下,可观察和记录到过敏性哮喘发作全过程即速发相(EAR)和迟发相(LAR)的动物模型。并应用此模型,研究雷公藤多苷(GTW)对过敏性哮喘EAR和LAR的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法第一部分：模型建立66只挪威褐鼠按致敏液(OVA和Al(OH)3)不同平均分为11组,单纯注射OVA的4组(0.01、0.1、1和10mg/只)；OVA混合Al(OH)3干粉的5组(0.1+100、1+100、10+100、1+52和1+4 mg/只)；OVA混合A1(OH)3胶体的1组(10+4 mg/只)；正常对照组1组。于第0天和第5天在每只动物背部选取2点进行皮下注射,对10个致敏组注射相应致敏液,对正常对照组注射生理盐水,每点均注射0.2m1。在第37天,所有动物雾化吸入5%OVA 10 min激发。然后立即放入体积描记器中连续记录16h呼气相延长参数(Penh)值,绘制Penh变化曲线,计算EAR Penh曲线下面积(AUC)、LAR AUC、EAR峰值、LAR峰值、LAR持续时间和EAR及LAR出现次数。采集第0、7、14、21、28、35、38天血清,用ELISA法检测血清中特异性IgE含量。HE染色观察肺病理改变。第二部分：药物治疗30只挪威褐鼠平均分为5组,即正常对照组、模型组和3个GTW组。采用OVA致敏激发挪威褐鼠,清醒动物体积描记器记录16 h反映气道阻力变化的Penh值,计算EAR AUC、LAR AUC、LAR持续时间,建立无创清醒挪威褐鼠过敏性哮喘发作全程记录模型。3个GTW组动物分别于第30至第37天灌胃给予GTW10、50和200mg·kg-1,每次2 mL,每天1次。正常对照组和模型组给予等量生理盐水。HE染色观察肺、肝和肾脏病理改变。检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酐(CR)、血清尿素氮(BUN)值,分析药物肝肾毒性。采用实时荧光定量PCR的方法(RT2 Profiler PCR Array Rat Allergy & Asthma)筛选差异表达基因。结果第一部分：模型建立除单纯注射OVA 0.01mg组外,其他各组大鼠血清特异性IgE含量均比正常对照组显著升高(P<0.05),且在致敏1周后IgE开始大量产生,直到第5周均呈持续增长趋势(以OVA 10+Al(OH)3100组为例)。观察到了哮喘发作的速发和迟发双相气道反应,其特点表现在Penh值的显著增高,且与正常对照组相比,模型组(以OVA 10+Al(OH)3100、OVA 10+Al(OH)3 gel 4组为例)的EAR峰值、LAR峰值、LAR持续时间、EAR AUC和LARAUC均显著增大(P<0.05)。模型组(以OVA 10+Al(OH)3100组为例)有以气道周围嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症表现。第二部分：药物治疗在给予GTW 50 mg·kg1治疗后特异性IgE含量比模型组显著降低(P<0.05)。给予GTW 10.50 和 200 mg·kg-1治疗后,EAR AUC.LAR AUC.LAR持续时间均比模型组显著降低(P<0.05)；生化指标ALT均比模型组显著升高(P<0.05),且随药物剂量增加,ALT数值增大；CR数值也均比模型组显著升高(P<0.05)；AST和BUN两个指标在给药后没有明显变化；均未对肝肾造成明显毒性病理改变。GTW能减轻肺部嗜酸性粒细胞浸润,且随剂量增加嗜酸性粒细胞数量减少。GTW能使过敏性哮喘中异常调节的基因发生明显改善,其中变化最明显的基因为Mmp9,在药物治疗后出现明显下调,且下调强度有剂量依赖性增强的趋势,在给予GTW 10、50和200 mg.kg1治疗后,下调3.62、7.67、38.15倍(P<0.05)。结论在OVA激发后观察到了哮喘发作全程,成功建立了非创伤性、清醒状态挪威褐鼠的过敏性哮喘发作全程记录模型。确立以稳定出现哮喘EAR和LAR的OVA 10+Al(OH)3100组方法为本模型的最佳造模方法。发现GTW能减轻哮喘发作时的EAR和LAR,对哮喘有治疗作用,其可能主要通过下调Mmp9的表达而达到治疗目的；同时也表明该模型可以作为一个较好的工具应用于哮喘治疗研究。
郭志宏[6]2007年在《雷公藤多甙对哮喘大鼠气道转化生长因子-β_1mRNA和Ⅲ型胶原表达的影响》文中提出目的:通过观察雷公藤多甙对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型气道壁厚度及转化生长因子-β_1mRNA(TGF-β_1mRNA)和Ⅲ型胶原表达的影响,探讨雷公藤多甙对哮喘大鼠气道重塑的作用及其作用机制。方法:选体重(180±10)g的健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、哮喘组和雷公藤多甙组,每组10只。以卵白蛋白(OVA)致敏并长期(10周)吸入激发,制备大鼠哮喘模型。采用逆转录—聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组肺组织的TGF-β_1mRNA含量,免疫组化方法检测气道壁Ⅲ型胶原的表达水平,HE染色病理组织切片测定气道壁的厚度。结果:(1)哮喘组肺组织TGF-β_1mRNA(0.388±0.035)和气道壁Ⅲ型胶原(22.93±3.12)表达水平明显高于雷公藤多甙组(0.337±0.062,19.50±2.95)和对照组(0.264±0.035,16.28±2.26),差异有统计学意义(P均＜0.05);雷公藤多甙组高于对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05)。(2)Pearson相关分析表明,所有肺组织TGF-β_1mRNA与Ⅲ型胶原的表达水平呈正相关(r=0.438,P＜0.05)。(3)哮喘组气道壁厚度(20.06±2.94)μm~2/μm明显高于雷公藤多甙组(15.89±2.26)μm~2/μm和对照组(11.64±2.43)μm~2/μm,差异有统计学意义(P均＜0.05);雷公藤多甙组高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:雷公藤多甙可降低哮喘大鼠气道壁厚度及其TGF-β_1 mRNA和Ⅲ型胶原的表达水平,其可能是通过降低TGF-β_1mRNA的过度表达,进而抑制Ⅲ型胶原的沉积,减轻气道重塑的发生。
王晓岩[7]2009年在《中药喘息康颗粒治疗支气管哮喘的药效学研究及对哮喘豚鼠的干预作用》文中提出支气管哮喘(bronchial asthma,简称哮喘)是由多种炎症介质、炎症细胞和细胞因子参与的一种气道慢性炎症性疾病,是当今世界范围内严重威胁人类健康的主要慢性疾病之一,近年来在许多国家的发病率呈上升趋势。中药喘息康颗粒(Chanxikang Keli,CXKKL)是吉林省中医药科学院呼吸科的经验方,具有温肺散寒,化痰平喘,临床主治哮喘,症见呼吸急促,喉中哮鸣有声,胸膈满闷等以寒哮等为主要临床表现者,在临床上取得了较好的疗效。本实验对中药喘息康颗粒治疗支气管哮喘的药效学及对哮喘豚鼠模型哮喘机制进行干预的研究,研究喘息康颗粒对支气管哮喘的药理作用,并初步探讨其机制。研究结果表明,喘息康颗粒能延长由组织胺和氯化乙酰胆碱混合液喷雾所致豚鼠哮喘的引喘潜伏期,增加小鼠气道内酚红排出量,减轻小鼠二甲苯耳水肿反应及角叉菜胶致大鼠足肿胀,减轻大鼠被动皮肤过敏反应,使二氧化硫引起小鼠咳嗽的潜伏期明显延长和咳嗽次数明显减少。另外,本实验还对哮喘豚鼠模型哮喘机制进行干预治疗研究,研究结果提示:喘息康颗粒能改善哮喘症状;减少外周血中嗜酸性粒细胞数;减轻哮喘豚鼠支气管周围肺组织的病理变化,降低豚鼠血清和肺泡灌洗液中IL-4含量,升高IFN-γ含量,与模型组比较具有极显著性差异;升高豚鼠血清中Eotaxin含量,降低豚鼠肺组织中MMP-9及TIMP-1含量,增强豚鼠肺组织中IFN-γ基因表达,抑制豚鼠肺组织中IL-4基因表达,从而发挥抗炎、平喘作用,取得较好的疗效。
李颖[8]2007年在《雷公藤甲素对变应性鼻炎大鼠iNOS和Eotaxin及NF-κB影响的研究》文中研究表明背景和目的变应性鼻炎(Allergic rhinitis，AR)是发生在鼻粘膜的变态反应性疾病，鼻粘膜的高反应性和高分泌性是其主要特点，以鼻痒、喷嚏、鼻漏、鼻塞为主要症状。广泛的炎症介质包括趋化因子(Chemokine)、酶等在鼻粘膜中的高表达是变应性鼻炎显著的病理特征，更是其发病机制中的重要环节。但是，这些炎症介质在变应性鼻炎鼻粘膜中高表达的分子机制并不十分清楚。近年来研究表明，这些炎症介质的高表达是受某些转录因子调控的。其中，核因子-κB(Nuclear factor-κB, NF-κB)在慢性炎症性疾病中对许多炎症介质具有直接调控作用。雷公藤甲素(Triptolide, TP)具有广泛的免疫抑制作用，其突出特点是它有激素样作用而无激素样副作用，已成功应用于支气管哮喘的临床治疗。本实验拟通过AR大鼠模型观察NF-κB与Eotaxin及诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase, iNOS)之间的关系以及TP对NF-κB、Eotaxin和iNOS的作用，从而探讨TP治疗AR的可能机制；同时与激素类药物作比较，为TP在AR临床治疗的应用前景提供实验依据。材料与方法48只健康SD大鼠随机分成四组：卵清蛋白(Ovalbumin, OVA)致敏组，雷公藤甲素(Triptolide, TP)处理组，地塞米松(Dexamethasone, DM)处理组和生理盐水(Sodium chloride, SC)组，参照安云芳造模方法并予改良，用卵清蛋白按照基础致敏和激发两个阶段建立AR大鼠模型，TP处理组、DM处理组和SC组分别用TP、DM和SC在激发前30分钟腹腔注射和鼻腔滴入。模型成功后，10％水合氯醛腹腔内注射麻醉，心脏放血法处死大鼠，取各组大鼠鼻粘膜组织，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，制成4-6μm切片，用多聚赖氨酸处理玻片，粘铺切片。对各组鼻粘膜组织切片分别行HE染色和甲苯胺蓝染色以进行病理观察；用免疫组化技术观察鼻粘膜组织iNOS、Eotaxin以及NF-κB的表达情况，光镜下任选5个视野，计算机图象分析阳性区的灰度值，计算其平均值作为该片的代表值。实验数据采用统计软件包SPSS11.0，统计学分析采用单因素方差分析并继以最小显著差(LSD)t检验比较组间差异，相关分析采用直线相关分析法。结果(1)动物行为观察：OVA致敏组大鼠烦躁不安、鼻痒、喷嚏、流涕症状明显；TP处理组和DM处理组少量模型动物有轻微症状，神智安静；SC组动物未见上述症状。(2)鼻粘膜HE染色镜下观察：OVA致敏组大鼠鼻粘膜肿胀增厚，腺腔及小血管管腔扩张，杯状细胞增多。在粘膜及粘膜下层，小血管及腺体周围，有大量炎性细胞浸润；TP处理组和DM处理组炎症表现较轻；SC组无明显炎症表现。EOS计数：OVA致敏组：9.10±0.76；TP处理组：3.93±0.51；DM处理组：4.01±0.59；SC组：0.52±0.43；OVA致敏组鼻粘膜嗜酸性粒细胞细胞数较SC组显著升高(P＜0.01)。TP和DM组可显著降低致敏大鼠鼻粘膜嗜酸性粒细胞的细胞数(P＜0.01)。(3)鼻粘膜甲苯胺蓝染色镜下观察：OVA致敏组大鼠鼻粘膜肿胀增厚，腺腔及小血管扩张，在粘膜及粘膜下层可见肥大细胞沿血管壁广泛浸润。TP处理组和DM处理组病理改变较OVA组减轻；SC组仅见少量肥大细胞沿着小血管壁散在分布。肥大细胞计数：OVA致敏组：22.71±1.20；TP处理组；11.28±1.36；DM处理组：10.73±0.81；SC组：1.35±0.76；OVA致敏组鼻粘膜肥大细胞细胞数较SC组显著升高(P＜0.01)。TP和DM组可显著降低致敏大鼠鼻粘膜肥大细胞的细胞数(P＜0.01)。(4)免疫组化检测结果：①鼻粘膜组织中iNOS的检测结果：iNOS主要表达于上皮、腺体、血管内皮、平滑肌和炎性细胞中，胞浆着色，呈棕黄色。鼻粘膜组织中iNOS阳性区的灰度值为：OVA致敏组：92.41±12.23；TP处理组：53.54±5.60；DM处理组：59.32±9.50；SC组：37.54±6.02。②鼻粘膜组织中Eotaxin的检测结果：Eotaxin主要表达于上皮细胞、腺体细胞和一些炎性细胞中，胞浆着色，呈棕黄色。鼻粘膜组织中Eotaxin阳性区的灰度值为：OVA致敏组：98.23±11.23；TP处理组：55.21±8.26；DM处理组：58.73±10.65；SC组：38.36±5.89。③鼻粘膜组织中NF-κB的检测结果：NF-κB主要表达于鼻粘膜组织上皮细胞、腺体细胞和血管周围的炎性细胞，胞浆、胞核均着色，呈棕黄色。鼻粘膜组织中NF-κB阳性区的灰度值为：OVA致敏组：97.10±11.16；TP处理组：60.08±6.47；DM处理组：64.48±10.13；SC组：38.75±7.47。iNOS、Eotaxin和NF-κ3中，OVA致敏组或SC组与其它三组比较均有统计学意义(P＜0.01)；TP处理组和DM处理组比较无统计学意义(P＞0.05)。(5)相关性分析：OVA致敏组大鼠鼻粘膜组织中iNOS的表达强度与Eotaxin的表达强度呈强烈正相关(r=0.886，P＜0.01)；OVA致敏组大鼠鼻粘膜组织中NF-κB的表达强度与iNOS、Eotaxin的表达强度呈强烈正相关(r=0.818，r=0.908，P＜0.01)。结论(1) TP对OVA致敏的变应性鼻炎大鼠模型症状有明显的控制效果。(2) TP可显著降低变应性鼻炎大鼠模型鼻粘膜嗜酸性粒细胞和肥大细胞的浸润。(3) TP可显著抑制变应性鼻炎大鼠模型鼻粘膜组织中iNOS、Eotaxin以及NF-κB的表达。(4) TP可通过抑制NF-κB的活性从而抑制iNOS、Eotaxin的表达，抑制NF-κ3的活性可能是TP药理作用的机制之一。(5)和DM处理组相比，TP在控制变应性鼻炎大鼠模型的症状、降低鼻粘膜嗜酸性粒细胞和肥大细胞的浸润、抑制鼻粘膜组织iNOS、Eotaxin的表达以及NF-κB的活性方面，两者无明显差异。
贺彬, 彭向东[9]2005年在《治疗支气管哮喘中药研究进展》文中指出支气管哮喘是一种慢性变应性炎症,其发病机制十分复杂,涉及了变态反应、炎症、气道痉挛等一系列病理变化过程,临床表现为反复发作的喘息和呼吸困难。现代研究表明:肥大细胞、B淋巴细胞分泌的IgE、嗜酸性粒细胞(EOS)和T淋巴细胞为主的炎症细胞及其分泌的白细胞介
杜强[10]2005年在《雷公藤多甙对哮喘大鼠细胞间粘附分子-1和核因子-κB表达的影响》文中指出研究背景:细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在哮喘的发病过程中,尤其是在哮喘气道炎症的早期阶段具有重要作用,雷公藤多甙作为传统中药雷公藤的提取物,已广泛用于哮喘的临床治疗,体外研究表明雷公藤能够抑制12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)诱导的人类正常支气管上皮细胞ICAM-1的的表达。 核因子-κB(NF-κB)是一种调控基因表达的DNA结合蛋白,可通过调控细胞因子和粘附分子基因的表达,参与机体的各种炎症和免疫反应,莫碧文等采用雷公藤内酯醇治疗哮喘豚鼠发现其对NF-κB具有抑制作用,ICAM-1是NF-κB的下游基因,雷公藤对哮喘的治疗作用可能与抑制受NF-κB调控的ICAM-1的表达有关。 目的:观察哮喘大鼠支气管上皮核因子-κB(NF-κB)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)蛋白和其mRNA的表达、肺组织炎性细胞浸润变化,探讨雷公藤多甙(TII)干预后的影响。 方法:18只Wistar大鼠随机分为哮喘组(A组),雷公藤多甙治疗组(T组)和正常对照组(C组),采用免疫组织化学方法分别分别观察NF-κB、ICAM-1在三组大鼠支气管上皮的表达,原位杂交方法观察ICAM-1mRNA在三组大鼠支气管上皮的表达。
参考文献：
[1]. 雾化吸入雷公藤内酯醇治疗哮喘的实验研究[D]. 孟莹. 第一军医大学. 2000
[2]. 雷公藤对哮喘大鼠气道重构及磷脂酰肌醇3激酶表达的影响[J]. 莫碧文, 王昌明, 张珍祥, 徐永健, 熊维宁. 中国应用生理学杂志. 2007
[3]. 雷公藤内酯醇干预对哮喘豚鼠肺组织病理及内皮素1系统表达影响的研究[D]. 韩青. 南京医科大学. 2003
[4]. 天贝汤对支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的影响的实验研究[D]. 徐丽. 辽宁中医药大学. 2012
[5]. 无创清醒挪威褐鼠过敏性哮喘模型建立及应用雷公藤多苷治疗的探索[D]. 陶婧婧. 北京协和医学院. 2015
[6]. 雷公藤多甙对哮喘大鼠气道转化生长因子-β_1mRNA和Ⅲ型胶原表达的影响[D]. 郭志宏. 山西医科大学. 2007
[7]. 中药喘息康颗粒治疗支气管哮喘的药效学研究及对哮喘豚鼠的干预作用[D]. 王晓岩. 吉林大学. 2009
[8]. 雷公藤甲素对变应性鼻炎大鼠iNOS和Eotaxin及NF-κB影响的研究[D]. 李颖. 郑州大学. 2007
[9]. 治疗支气管哮喘中药研究进展[J]. 贺彬, 彭向东. 中南药学. 2005
[10]. 雷公藤多甙对哮喘大鼠细胞间粘附分子-1和核因子-κB表达的影响[D]. 杜强. 南京医科大学. 2005
标签：呼吸系统疾病论文; 哮喘论文; 雷公藤论文; 对照组论文; 雾化吸入论文; 雾化治疗论文; 支气管哮喘症状论文; 小青龙论文; 呼吸道疾病论文; 支气管炎论文;