郴州市第一人民医院北院（儿童医院） 湖南 郴州423000
【摘要】目的：对遗传代谢病诊断和治疗中气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术的价值进行探讨。方法：选择收治1000例疑似遗传代谢疾病患儿，对其尿液进行去蛋白等处理后，应用GC-MS开展样本有机检测，通过 遗传代谢病软件分析获得数据，同时结合基因分析、串联质谱氨基酸和酰基肉碱检测结果开展进一步诊断。结果：119例患者确诊先天性遗传代谢疾病，主要为MMA（甲基丙二酸尿症）、PKU（苯丙酮尿症）等。94例继发性代谢障碍或感染，有多项或至少一项指标升高，但未发现显著先天性遗产代谢病指征，进一步开展生化、血液串联质谱等检查，45例继发性肝损伤、26例乳酸尿症、38例二羧酸尿症、20例酮尿症、6例高香草扁桃酸。经特殊饮食和药物治疗后，患儿尿中特异性指标水平恢复正常或显著下降。结论：在遗传性代谢病诊断中GC-MS是一种可靠方法，临床中可依据监测尿中特异性标志物水平变化确定治疗方案。
【关键词】遗传代谢病；气相色谱质谱；诊断；治疗
[Abstract] objective: to explore the value of gas chromatography-mass spectrometry (gc-ms) in the diagnosis and treatment of genetic metabolic diseases. Methods: 1000 children with suspected genetic metabolic disease were selected and treated with protein removal in their urine. Gc-ms was used to carry out sample organic detection. Data were obtained through genetic metabolic disease software analysis. Results: 119 patients were diagnosed with congenital genetic metabolic diseases, mainly including MMA (methylmalonate) and PKU (phenylketonuria). There were 94 cases of secondary metabolic disorder or infection, with multiple or at least one index increased, but no significant signs of congenital inherited metabolic disease were found. Biochemical and blood tandem mass spectrometry were further carried out, and 45 cases of secondary liver injury, 26 cases of lactic acid uria, 38 cases of dicarboxylate uria, 20 cases of ketonuria, and 6 cases of high vanillin mandelic acid were detected. After special diet and drug treatment, the level of specific indicators in the urine of the children returned to normal or significantly decreased. Conclusion: gc-ms is a reliable method in the diagnosis of hereditary metabolic disease, and the treatment scheme can be determined by monitoring the level of specific markers in urine.
【Key words 】 genetic metabolic disease; Gas chromatography-mass spectrometry; Diagnosis; treatment
遗传代谢疾病是基因突变造成的，患者会因酶缺失而出现生化物质代谢、合成、储存异常。该疾病通常在婴幼儿时期发病，并缺乏明显症状，经常被漏诊或误诊[1]。GC-MS检测是一种无创性检测技术，检测中对尿中小分子代谢物开展微量分析，相关研究认为该技术在遗传代谢疾病诊断和治疗中具有较高价值。本研究选择收治疑似遗传代谢病高危患儿1000例，对其开展GC-MS检测，现报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选择收治1000例疑似遗传代谢病患儿，所有患儿均于2015年1月至2018年12月在我院接受诊疗。患儿存在食欲匮乏、喂养困难、呕吐、恶心、肝脾大、腹泻、腹胀等症状；呼吸困难、语言发育迟缓、昏迷；肌张力及肌力低下；毛发及皮肤色素改变、容貌异常。其中包括女450例、男550例；年龄范围1~6岁，平均（2.7±1.3）岁。
1.2方法
1.2.1标本采集 采集10ml新鲜尿液，应用无菌尿试管盛装并送检，若无法立即送检则加2滴氯仿，在零下20摄氏度条件下保存。
1.2.2标本处理 以3000r/min速度离心标本10分钟，将杂质和蛋白质去除，取上清液进行尿肌酐测定。取含有0.2mg肌酐的尿液量加入20uL尿素酶，反应30分钟，反应条件为37摄氏度电热恒温箱，除去尿素后加入内标液，内标液依据肌酐值计算，总体积3ml，再次加入2.5mol/L氢氧化钠溶液400uL和5%盐酸羟胺溶液500uL，混匀后常温放置1小时，加入6mol/L盐酸溶液350uL，去除过量氢氧化钠，加入乙酸乙酯后离心5分钟，吸取另一试管有机相，重复1次后与萃取后有机相合并，加入无水硫酸将残留水分去除，离心后转移出上清液，于60摄氏度恒温条件下吹干氮气，加入100uLBSTFA+10%TMCS硅烷化试剂，于80摄氏度条件下恒温衍生30分钟，然后进行检测。
1.2.3 GC-MS分析参数 DB25色谱柱（0.25mm×30m×0.25um）；100摄氏度柱箱中放置4分钟，每分钟升温4摄氏度，逐渐调整温度至280摄氏度，保持10分钟，每分钟升温10摄氏度，调整温度至300摄氏度，保持10分钟，以将残留杂质去除；控制气体进样线速度每秒43厘米，分流比20:1；质谱扫描50~500amu，接口温度280摄氏度，离子源温度200摄氏度。
2结果
2.1 遗传代谢疾病病种、发病率和代谢谱
确诊先天性遗传代谢疾病患者119例，主要为MMA（甲基丙二酸尿症）、PKU（苯丙酮尿症）等。见表1。
继发性代谢障碍或感染患者94例，升高指标多项或一项以上，但未发现显著先天性遗产代谢病指征，进一步开展生化、血液串联质谱等检查，45例继发性肝损伤、26例乳酸尿症、38例二羧酸尿症、20例酮尿症、6例高香草扁桃酸。见表2。
2.3疾病治疗检测、转归及随访
1例MMA新生儿死亡，2例释放，其余均接受对症治疗、随访和跟踪。经特殊饮食和药物治疗后，患儿尿中特异性指标水平恢复正常或显著下降。
3讨论
临床中存在多种先天性代谢疾病，不同疾病具有不同临床症状及表现，并且临床表现通常缺乏特异性，这大幅增加了疾病诊治难度。当前临床采用酶学检验、基因检验、生化代谢物质检测等方法进行诊断，不同方法特点不同，其中酶学检验虽然可靠，但对人员、设备要求较高，并且会产生较大痛苦，而基因检测需消耗大量人力物力[2]。
近年来GC-MS开始应用于临床，其具有高效能、高灵敏度、高分辨率、高选择性、分析速度快等优势，已经成为诊断遗传代谢病的重要方法[3]。针对部分疑似代谢疾病患者应用该方法，利用有机酸萃取法结合尿素酶预处理，解决了单纯应用有机酸萃取或尿素酶处理无法检出氨基酸、酰基甘氨酸、半乳糖酸的问题，疾病检出率更高。实际中如果单用串联质谱检测MMA，通常和丙酸血病难以有效区分，但GC-MS可通过检测甲基丙二酸或甲基枸橼酸进行有效区分[4]。本研究1000例患者中检出119例阳性患者，阳性率11.9%。并且该项技术还能够对各项感染性疾病、继发性代谢障碍进行辅助诊断，继发性感染初期患者缺乏明显症状，生化检测、血串联检测正常，但尿液中部分指标会上升[5]。本研究中检测出45例继发性肝损伤、26例乳酸尿症、38例二羧酸尿症、20例酮尿症、6例高香草扁桃酸。并且GC-MS也能够对疾病治疗情况进行检测，本研究中经特殊饮食和药物治疗后，患儿尿中特异性指标水平恢复正常或显著下降，临床中可依据检测结果监测疾病治疗情况。
综上所述，在遗传性代谢病诊断中GC-MS是一种可靠方法，临床中可依据监测尿中特异性标志物水平变化确定治疗方案。
参考文献：
[1]高平明.尿素酶预处理-气相色谱-质谱技术筛查遗传性代谢病高危儿[J].实用儿科临床杂志,2017,27(20):156.
[2]杨艳玲.气相色谱-质谱联用分析在遗传代谢病筛查和诊断中的应用[J].中国医刊,2016,41(2):34-35.
[3]张磊.广州增城区新生儿主要遗传性代谢病筛查结果分析[J].深圳中西医结合杂志,2017,27(12):138-139.
[4]唐建平.970例新生儿遗传性代谢病筛查及分子诊断结果分析[J].安徽医药,2017,21(5):876-879.
[5]高氨血症患儿102例尿液气相色谱-质谱分析[J].实用儿科临床杂志,2009,24(20):1554-1556.
论文作者: 蔡芳, 蒋林
论文发表刊物:《总装备部医学学报》2019年第04期
论文发表时间:2019/6/28
标签：摄氏度论文; 疾病论文; 色谱论文; 患儿论文; 质谱论文; 遗传性论文; 方法论文; 《总装备部医学学报》2019年第04期论文;