（1济宁市第一人民医院血液内科 272000；2济宁市第一人民医院检验科272000）
【摘要】目的：通过对老年（年龄≥60岁）急性髓系白血病患者外周血中调节性T细胞的表达水平及特点的研究，探究其可能具有的临床意义。方法：选自2012年7月至2013年12月收住我院的首次确诊老年急性髓系白血病患者计52例以及老年健康志愿者计52例、中青年健康志愿者计52例。在签署知情同意书后，收集三组共计156份外周血标本，使用流式细胞术检测标本的CD4+细胞及CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达水平。给予足疗程常规化疗后，再次收集老年急性髓系白血病组外周血进行流式细胞术测定标本中调节性T细胞的表达水平。结果：三组被试外周血中CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达水平以其所占CD4+T细胞比例作为标准，其中老年AML组、老年组、中青年组的CD4+CD25+CD127-调节性T细胞分别为7.913±1.692%、6.804±1.315%、5.734±1.036%；老年AML组指标高于老年组及中青年组，中青年组指标最低，差异具有统计学意义。化疗敏感的AML患者计17例，其中CR后复发的患者计10例；化疗敏感的AML患者较难治AML患者的外周血调节性T细胞水平低，差异具有统计学意义；CR后复发患者的表达水平较长期CR患者高，获得长期CR患者的外周血调节性T细胞水平与正常老年对照组相当，均具有统计学意义。结论：老年髓系白血病患者外周血调节性T细胞的表达水平与疾病的的发展和预后存在一定联系，可作为临床对于预后及疗效评价的标准之一。
【关键词】老年患者；急性髓系白血病；调节性T细胞；预后评估
【中图分类号】RA 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）36-0039-02
急性髓系白血病是我国成人急性白血病的常见类型，近年来在老年人群中发病率呈增高趋势，而对于其发病机制的研究一直未见突破性进展。有研究表明，免疫衰老可能是其中一种重要的致病机制[1]；特别是对于CD4+CD25+调节性T细胞的研究提示其可抑制机体免疫，其表达水平的增高可降低对于肿瘤细胞的杀伤作用，增加免疫逃逸的发生率，而其表达水平的降低亦可诱导多种自身免疫性疾病，是机体重要的免疫调节细胞[2]。本研究通过对老年急性髓系白血病（AML）患者外周血中调节性T细胞的水平测定，探究其可能具有的临床意义，现报道如下。
1 临床资料
选自本院2012年7月至2013年12月收住入我科的首次确诊为急性髓系白血病患者计52例，患者年龄均≥60岁，平均年龄在64.5岁；其中男性35例，女性17例。全部患者均做骨髓细胞学检查、流式细胞学、染色体分析及融合基因分析，且符合急性髓系白血病诊断标准[3]，按照FAB标准可分为：M1型3例，M2型21例，M4型6例，M5型22例。以及同时招募的健康志愿者共计104例，其中老年健康志愿者52例，平均年龄为64.7岁，男女比例为2：1；中青年健康志愿者计52例，年龄在24至45岁之间，平均年龄为32.5岁，男女比例为2：1。
2 方法
2.1 标本与试剂
在告知研究相关事项后，所有被测试者均签署知情同意书。采集外周血时间为每日10点前，收集后的标本最迟在24小时内进行检测。流式细胞术使用美国BD公司生产的FACScalibur 流式细胞仪，及该公司生产的荧光标记的抗人CD4抗体及抗人CD25抗体等试剂，抗人CD127抗体来自eBioscience公司，且在使用前均需确定其效价符合相关规定。
2.2 数据收集
使用流式细胞术检测156例标本中的CD4+细胞及CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达水平。给予足疗程常规化疗后（化疗时间为6-8个月，至少化疗6个周期，平均化疗6.5周期），再次收集老年急性髓系白血病组外周血进行流式细胞术测定标本中CD4+T细胞及CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达水平。
2.3 统计学处理
使用SPSS15.0 统计软件对收集来的数据进行分析，计量资料以均数±标准差（χ±s）表示，计量资料采用两独立样本t 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。
3 结果
3.1初治老年AML组与对照组比较
以CD4+T细胞作为门值，三组被试外周血中CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达水平见下表。其中老年AML组、老年组、中青年组的CD4+CD25+CD127-调节性T细胞占CD4+T细胞比例分别为7.913±1.692%、6.804±1.315%、5.734±1.036%；可知老年AML组指标高于老年组，并显著高于中青年组，三组被试比较中指标最低为中青年组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
三组外周血中调节性T细胞表达水平比较（占CD4+T细胞比例）
3.2化疗后缓解与复发者相互对比
给予足疗程常规化疗后，对于化疗敏感的老年AML患者计17例，在随后一年的随访中获CR后复发的患者计10例。比较他们的外周血调节性T细胞水平，可知对于化疗敏感的AML患者较难治AML患者的外周血中CD4+CD25+CD127-调节性T细胞水平低，差异具有统计学意义。获CR后复发患者的CD4+CD25+CD127-调节性T细胞表达水平较长期CR患者高，差异具有统计学意义。
3.3化疗后AML组与对照组比较
化疗后，老年AML组患者可分为长期CR、CR后复发和难治AML，其中获得长期CR患者的外周血调节性T细胞水平与正常老年对照组相当，差异不具有统计学意义；而CR后复发患者与难治AML的外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞表达水平较正常老年对照高，差异具有统计学意义。
4 讨论
免疫衰老是近年来研究的一个热点，是指在人类生命进程中随着年龄增长，免疫系统退行性变，逐渐失去其功能，从而造成严重感染、恶性肿瘤等发生率上升。在衰老相关研究中发现调节性T细胞在老年人外周血中的表达水平显著高于中青年人，调节性T细胞的表达水平存在年龄的正相关，且CD4+CD25+调节性T细胞具有免疫抑制与免疫无能性。免疫抑制性是指其水平的增高可降低对于肿瘤细胞的杀伤作用，增加免疫逃逸的发生率，而其表达水平的降低亦可诱导多种自身免疫性疾病。在本次研究中，也得出了相似的结论，老年健康组的外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞表达水平高于中青年健康组。
已有研究证实，肿瘤相关的特异性免疫抗原并非突变基因表达的异常产物，而是正常机体内具有的成分，所以肿瘤相关免疫也可以看做是自身免疫的一部分。而本研究中，老年AML患者在治疗前外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞表达水平显著高于老年健康组，是否提示CD4+CD25+CD127-调节性T细胞与肿瘤的发病相关，还需要进一步的实验证明。但在随后给予的足疗程化疗中，对于化疗敏感的老年AML患者CD4+CD25+CD127-调节性T细胞表达水平显著低于难老年AML患者，可以作为评估化疗是否敏感的一项依据，特别是对于化疗方案的选择、更换等具有一定的意义。而在随后一年的随访中，CR后复发的患者共计10例，长期CR的患者共计7例。通过对CR后复发和长期CR的患者的对比，发现两者的调节性T细胞表达水平存在差异；且与发病之前相比，无论是长期CR还是CR后复发的患者外周血调节性T细胞的表达水平都大幅下降，考虑与化疗诱导T细胞凋亡有关；但CR后复发患者的外周血调节性T细胞水平仍高于老年健康组，而长期CR患者的调节性T细胞表达水平和正常老年对照组相当，提示化疗缓解后长期CR的患者其免疫功能部分恢复，能对化疗后残存的可能引起复发的白血病细胞进行杀灭。
综上，老年髓系白血病患者外周血调节性T细胞的表达水平与疾病的的发展和预后存在一定联系，可作为临床对于预后及疗效评价的标准之一。
参考文献
[1]徐文鑫，翁开枝．免疫细胞在白血病免疫治疗应用中的研究进展[J]．医学综述，2006,12(12):739-742
[2]闫 峰, 黄振平. 调节性T细胞与免疫耐受[J]. 医学研究生学报, 2009, 22 ( 10) : 1093-1097.
[3]张之南, 沈悌. 血液病诊断及疗效标准,第3版[M].北京:科学出版社,2007:106-116.
论文作者:张海国1,张成芳
论文发表刊物:《中外健康文摘》2013年第42期供稿
论文发表时间:2014-4-25
标签：细胞论文; 老年论文; 患者论文; 水平论文; 外周血论文; 免疫论文; 统计学论文; 《中外健康文摘》2013年第42期供稿论文;