大兴安岭地区食品药品检验检测所165000
摘要：使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统对经提取的猪肉样品提取液进行固相萃取—洗脱液浓缩—溶剂置换过程，简单高效，重现性好；经高效液相色谱检测克伦特罗，准确快速，标准曲线线性系数为：R2=0.9998，回收率高达89.53%，RSD：1.04%。
关键词：克伦特罗 固相萃取 定量浓缩 高效液相色谱
盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，猪食用后在代谢过程中促进蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解，提高了猪肉的瘦肉率，因此称为瘦肉精。它用量大、使用的时间长、代谢慢，所以在屠宰前到上市，在猪体内的残留量都很大。这个残留量通过食物进入人体，就使人体渐渐地中毒，积蓄中毒。如果一次摄入量过大，就会产生异常生理反应的中毒现象，因此而被禁用。某些国内养猪户不顾农业部的规定，为了使猪肉不长肥膘，在饲料中掺入瘦肉精。
本实验使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统进行样品前处理工作，样品经提取、初步净化后，全自动完成猪肉样品的固相萃取-洗脱液浓缩-溶剂置换过程，最终样品可直接用于液相检测，极大的简化实验人员的工作步骤，液相色谱检测准确，样品测定平行性好，回收率高。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
LabTech PrepElite-VS 全自动固相萃取-定量浓缩仪
LabTech LC600二元梯度高效液相色谱系统
1.2 试剂
乙酸乙酯
10% 碳酸钠溶液
0.1 mol/L 的盐酸溶液
2.5 mol/L 氢氧化钠溶液
甲醇（色谱级）
4% 氨水甲醇
去离子水
2 实验方法
2.1 提取方法：
将50 g 猪肉，平均分成10份，准确进行称重。取其中5份加入15 mL 乙酸乙酯、3 mL 10% 碳酸钠溶液置于50 mL 离心管中，10,000 rpm 下均质2 min，6,000 rpm 下离心2 min，将上清液转入另一离心管中。用15 mL 乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L 的盐酸溶液，涡旋混合1 min，然后在6,000 rpm 下离心1 min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5 mol/L 氢氧化钠溶液调节pH 5.2。取另外5份，破碎后加入1.0μg/mL克伦特罗标准液1mL，按上述方法进行提取操作，作为加标样品。
2.2 样品净化
SPE 小柱： ProElut PXC 90 mg/6 mL
a 活化： 依次加入4.5mL 甲醇、4.5 mL 水和4.5 mL 30 mmol/L 盐酸，对SPE柱进行活化；
b 上样： 将提取液加入小柱中，流出液弃去；
c 淋洗： 依次用4.5 mL 水和4.5 mL 甲醇淋洗，氮气吹干10min；
d 洗脱： 7.5 mL 4% 氨水甲醇洗脱；
e 在线浓缩 50 oC 下在线浓缩，进行流动相（甲醇+水=35:65）置换，自动定容到1mL。
2.3 样品检测
2.3.1液相色谱条件
色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm
流动相：甲醇：水=35:65
流速：1mL/min
进样量：20μL
紫外检测器：244nm
2.3.2 标准品及样品测定
克伦特罗标准溶液的配置：准确称取克伦特罗标准品用甲醇配成浓度为25μg/mL的标准储备液，用流动相甲醇+水（35:65）稀释浓度为0.025μg/mL、0. 05μg/mL、0.25μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL标准液。
将浓缩后的试样采用0.45μm的针筒式微孔过滤膜过滤，滤液待进行液相色谱测定。
吸取50μL标准溶液及试样液注入液相色谱仪，进行定性、定量分析。
3 结果和讨论
3.1 克伦特罗标准品的液相色谱图
3.2克伦特罗标准品标准曲线
克伦特罗标准品浓度：0.025μg/mL、0. 05μg/mL、0.25μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL，线性方程为：Y=361552X-4061.8，线性系数为：R2=0.9998。
3.4 未加标样品检测结果
未加标样品检测结果见图5所示，经计算，未加标样品未检出克伦特罗成分。
4 结语
本实验采用LabTech全自动固相萃取-定量浓缩系统进行猪肉样品前处理，自动化程度高，可以解决传统固相萃取步骤操作繁琐，溶剂挥发，过柱流速难以控制等问题。同时，收集到的洗脱液可以在线浓缩、溶剂置换、定容过程，极大的简化了繁琐的样品前处理工作，保护操作者免受各种有机溶剂毒害，同时回收率稳定，可靠，回收率高达89.53%。
采用高效液相色谱方法对样品中克伦特罗进行定性、定量检测，方便快速，标准曲线线性系数为R2=0.9998，对加标样品和未加标样品进行精确浓度检测，准确计算回收率，仪器操作简单，稳定性高，RSD为1.04%。经检测，猪肉样品中未检出克伦特罗。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典. 2015 年版, 二部
论文作者:张静
论文发表刊物:《中国医学人文》2017年第4期
论文发表时间:2017/7/19
标签：样品论文; 乙酸乙酯论文; 色谱论文; 甲醇论文; 克伦论文; 标准论文; 溶液论文; 《中国医学人文》2017年第4期论文;