一、双载体固定化中国红豆杉细胞的初步研究（论文文献综述）
潘亚华[1]（2016）在《固定化海南粗榧细胞培养体系的研究》文中进行了进一步梳理利用海南粗榧细胞固定化培养方式进行三尖杉类碱生产是海南粗榧细胞研究领域的重要方向之一。本文就固定化海南粗榧细胞体系的建立及其生长代谢特性；固定化海南粗榧细胞培养的条件优化；以及不同种龄的海南粗榧悬浮细胞对固定化培养细胞生长和产物合成的影响进行了研究,主要结果如下：1.通过文献参考及预实验初步建立固定化条件为：海藻酸钠溶液浓度为20g/L、CaCl2溶液浓度为0.02g/mL、接种量为0.10g/mL、包埋密度为0.2g/mL摇床转速120r/min悬浮细胞种龄为15d。在此条件下固定化海南粗榧细胞进行培养,并对其生长规律及产物合成规律进行了研究。结果表明固定化海南粗榧细胞生长周期为40d,其中0--15d固定化细胞生长停滞；15--30d细胞缓慢生长,至30d左右生物量不再增加,细胞褐化严重。固定化细胞在停滞期只消耗少量的糖,进入缓慢生长时期培养基残糖浓度下降速度加快。海南粗榧悬浮细胞被固定化后,细胞活力大幅下降,在随后的固定化培养过程中其活力逐渐升高。在此条件下固定化海南粗榧细胞培养的0--15d,培养物中产物量逐渐增多,第15d产量最大,15--30d培养物中产物产量逐渐降低。2.对海南粗榧细胞固定化培养的培养条件进行优化与研究,研究结果表明：包埋过程中凝胶球硬度随着海藻酸钠溶液的浓度升高而升高,海藻酸钠溶液浓度为20g/L时,固定化细胞培养物获得最大三尖杉酯碱产量,海藻酸钠溶液浓度过低影响包埋效果,海藻酸钠溶液浓度过高时细胞活力过低,不利于产物的合成；包埋过程中CaCl2溶液浓度为浓度为0.023g/mL时,固定化细胞培养物获得最大三尖杉酯碱产量；随着接种量的增加,固定化细胞合成三尖杉酯碱的量先增加后降低,接种量为0.1g/mL时固定化培养15d后获得最大产量；当包埋密度为0.2g/mL时,固定化细胞培养物合成三尖杉酯碱的量最大；随着摇床转速升高,固定化海南粗榧细胞活力增加,培养基褐化值减小,但对固定化细胞产物的合成有一定的促进作用。在优化条件下固定化细胞培养可以重复利用三次,每次换液量为70mL,产三尖杉酯碱效率为0.032mg/L·d-1,产高三杉酯碱效率为0.014mg/L·d-1。3.研究不同种龄海南粗榧悬浮细胞被固定化培养后细胞生长及产物合成情况。研究结果表明种龄越年轻的细胞被固定化后细胞活力越高,糖耗速度也较快,相应的生长速度也较快,但其产物的合成能力较差。种龄较大的细胞被固定化培养后培养基中酚含量更高,培养基褐化程度越大,但其细胞活性、细胞生长速度以及糖耗速度均处于较低的水平。因此种龄为15d的细胞进行固定化培养后能在最短的时间内生产最多的三尖杉酯碱。
贾鑫[2]（2009）在《新型功能化聚乙烯醇的制备及性能研究》文中研究指明聚乙烯醇是一种化学性质稳定,有良好的耐酸、耐碱、耐干热性能,溶于水但几乎不溶于有机溶剂的用途相当广泛的水溶性高分子聚合物,性能介于塑料和橡胶之间,它的用途可分为纤维和非纤维两大用途。近年来,由于PVA的产量急剧扩大,加上煤,电,石油等资源的日趋紧张,主要原料价格持续高涨,产品利润率逐渐降低。因此,只有加强PVA产品的应用开发,拓宽应用领域,研发科技含量高,附加价值高的下游产品,延长产品链,聚乙烯醇生产企业才能提高核心竞争能力,实现行业的可持续发展。本文简述了聚乙烯醇的基本特性及在传统领域中的应用;并综述了近年来在新领域中的拓宽及功能化,在此基础上提出了两种有效的功能化途径:一是通过和无机物复合形成新的高性能纳米复合材料;另外是通过利用聚乙烯醇本身的特性,进行功能化后运用于固相有机合成。在此思路的指导下,制备了四种新型的功能化聚乙烯醇材料,并研究了其性质,主要结论如下:一、通过和硅烷偶联剂乙烯基三乙氧基的偶联反应,成功地对纳米二氧化硅进行了表面乙烯基化,并研究了此反应的可控性,通过不同的反应条件,可以使乙烯基含量达到1.956到8.922 mmol/g之间;通过醋酸乙烯酯和乙烯基化后的纳米二氧化硅共聚,并直接进行醇解反应,FT-IR及聚合物中硅元素分析证明成功的制备了聚乙烯醇/二氧化硅纳米复合材料;特性粘度及醇解度的研究表明,少量二氧化硅的引入影响了聚乙烯醇的一些特征性能;热性能和机械性能的研究表明,通过共价键和聚合物连接,少量的纳米二氧化硅就能很大程度的提高了聚合物的热性能和机械性能。复合物的起始热分解温度从250.1℃上升至261.1℃;玻璃化转变温度从71.0℃上升到91.2℃:而在800℃时的残留率从3.53%增加到16.72%。同时,杨氏模量从36.3MPa上升至52MPa,拉伸强度从16.4MPa上升至30.2MPa。二、用DMSO插层的高岭土作为中间体,成功地通过客体置换法使得醋酸乙烯酯单体进入高岭土层间,经DMSO插层后,高岭土的层间距由原来的0.72 nm增大为1.13 nm,经过醋酸乙烯酯插层后,其层间距进一步增大为1.44 nm。DMSO和醋酸乙烯酯的插层率分别为72%和78.6%;通过经典的自由基溶液聚合,合成了聚醋酸乙烯酯/高岭土插层聚合物,该聚合物通过直接醇解后到了聚乙烯醇/高岭土插层聚合物:FT-IR和XRD表征证明了这个结果,所得聚乙烯醇/高岭土插层聚合物的热性能较纯的聚合物有了很大的提高,复合物的起始热分解温度从240.1℃上升至262.5℃;玻璃化转变温度从61.2℃上升到81.5℃;而在800℃时的残留率从3.68%增加到22.72%。三、成功的应用悬浮交联的方法从线性的聚乙烯醇出发制备了交联的PVA小球,然后用阴离子聚合的方法,以环氧乙烷为单体,使得PVA表面接枝上了PEG链段,制备了新型的PVA-g-PEG树脂,并用FT-IR,NMR表征了其结构;用SEM,光学显微镜研究了PVA小球和PVA-g-PEG树脂的形貌特征,用DSC和TGA研究了其热性能;在不同溶剂中的溶胀性能的研究表明,PVA-g-PEG树脂在溶胀性方面具有广泛的溶剂适用性,其在各种不同性质的溶剂中的溶胀指数都优于现在普遍使用的固相载体;更为重要的是,这种载体本身具有的官能团的含量很高,是现在使用树脂的几倍乃至十几倍,所以该树脂具有很好的应用前景,为了给以后的工业化生产给予一定得理论指导,通过实验室的对悬浮交联过程和阴离子聚合过程的放大,初步摸索了放大实验的影响因素。四、通过上升聚合法制备尺寸均一的聚醋酸乙烯酯小球,其直径为1.8 mm;然后通过传统的醇解反应,我们把所得的聚醋酸乙烯酯小球成功地转化为聚乙烯醇小球,其醇解度达到85%,聚乙烯醇小球上的羟基含量为18 mmol/g;通过元素分析,CP/MAS 13C NMR和FT-IR表征,我们确定了所得聚醋酸乙烯酯及聚乙烯醇小球的结构,并且得出实验结果和理论值是相符合的。
叶小颖[3]（2009）在《BI-1对紫外光诱发飞廉悬浮细胞凋亡和黄酮合成积累的影响及其信号转导机制研究》文中指出制约药用植物细胞培养生产重要次生代谢产物技术的产业化应用的瓶颈主要有两点:一是药用植物细胞生长缓慢,生物量低;二是培养细胞的次生产物合成的产量很低。研究探讨药用植物细胞次生产物合成途径调控机制对解决植物培养细胞次生物质的低产问题具有重要理论和实际指导意义。次生产物是药用植物在长期进化中适应环境的产物,在环境胁迫条件下,药用植物会产生具有保护作用的次生产物来提高环境适应力,因此利用逆境胁迫来诱导次生代谢产物合成是提高植物次生代谢产物的一个重要方法。逆境胁迫对药用植物品质（次生物质合成积累）和产量有着双重影响,即逆境对产量和品质有双刃剑作用,而这种矛盾通过普通的栽培和管理措施是难以协调和解决的。BI-1基因是一个对细胞凋亡有广泛抑制作用的因子,可以抑制由Bax介导或非Bax介导的细胞凋亡过程。为了研究探讨BI-1基因对逆境诱发药用植物细胞凋亡和次生产物合成的影响,本文以本实验构建保存的转BI-1基因飞廉细胞（Est诱导型启动子）为材料,研究了BI-1基因表达对UV诱发飞廉细胞凋亡和次生产物合成的影响,并探讨了UV诱发飞廉细胞凋亡和次生产物合成的信号转导机理,为从分子水平上协调逆境影响中药材品质和产量的矛盾提供新的思路和策略。主要实验结果如下:（1）转BI-1基因飞廉悬浮细胞系的建立将固体培养的转BI-1基因飞廉细胞接种到MS培养液中,为获得稳定且最优生长和黄酮类次生产物含量较高的培养条件,对培养液组成成分、pH值、蔗糖浓度、培养温度、摇床转速和接种量等条件进行优化,得到了飞廉悬浮细胞最适的培养条件:培养液为MS+1×10-5 mol·L-1 NAA+2×10-6 mol·L-1 BA+3%蔗糖,pH为5.8,培养温度25℃,摇床转速110 rpm,接种量为3g/50mL medium。且飞廉细胞生长周期为14 d。在优化培养过程中,定期对飞廉悬浮细胞进行PCR验证及抗生素筛选,经过多次传代,获得分散性较好、生长较快且黄酮类次生产物含量较稳定的转BI-1基因飞廉悬浮细胞系。（2） UV胁迫诱发飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成UV胁迫处理的飞廉细胞经Sytox特异性核酸染色观察到细胞凋亡现象,且随着时间的延长,细胞死亡率逐渐增高,在UV胁迫后第36 h荧光下观察到染色质凝聚现象,第72 h观察到染色质基本成弥散状等形态学上典型的细胞凋亡特征现象,而对照组细胞在荧光下无成像。DNA琼脂糖凝胶电泳结果也表明,UV胁迫处理飞廉细胞后第48 h出现DNA片段化,表现为明显的DNA ladder现象,而对照组则为一条明显的主带。这些结果都表明UV胁迫诱发了飞廉细胞凋亡。对处于生长周期不同阶段的飞廉细胞进行UV胁迫处理,发现飞廉细胞生长对数期（第11d）为UV胁迫促进飞廉细胞黄酮类次生产物合成积累的最佳时期,第14 d收获的细胞鲜重达到对照的93.8%,黄酮类次生产物含量达到了对照的2.69倍,表明UV胁迫可以诱发飞廉细胞黄酮类次生产物的合成积累。（3） NO参与介导UV胁迫诱导飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成为了探讨UV胁迫诱导飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成的信号转导机理,本文测定了UV处理后飞廉细胞中NO的含量。数据显示,UV胁迫处理后10 h,飞廉细胞中NO含量开始出现增加,并在18 h出现第一次高峰,随后有所下降,在处理后第32 h出现第二次跃迁,NO含量在第38 h达到第二个高峰,且第二次进发的NO含量高于第一次,表明UV胁迫诱发飞廉细胞内的NO进发。通过添加NO淬灭剂cPITO发现,在NO被清除的同时UV胁迫诱导的飞廉细胞凋亡受到抑制,黄酮类次生产物合成亦受到一定程度的抑制。表明NO同时参与UV胁迫诱发的飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成调控途径。（4）BI-1基因表达对UV胁迫诱导飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成积累的影响Western blotting检测结果表明,添加20μmol·L-1雌二醇（Est）可以诱导转BI-1基因飞廉细胞中BI-1的稳定表达。实验结果显示Est诱导BI-1基因表达对正常培养条件下的转基因飞廉细胞无影响,与野生型飞廉细胞在细胞生长和黄酮类次生产物合成积累上也没有明显区别。而在UV胁迫前添加Est诱导BI-1基因表达,发现BI-1基因表达对UV胁迫诱发的细胞凋亡有明显的抑制作用,但对UV胁迫诱发的黄酮类次生产物合成和NO积累没有影响。表明NO可能依赖不同的信号转导途径分别参与UV胁迫诱导飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成。综上所述,本文实验结果表明:（1）UV处理可以分别诱发飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物的合成积累;（2）NO同时参与UV胁迫诱发飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成积累的信号转导过程;（3）NO是UV诱发飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成积累的共用信号分子,但是在NO的下游UV却可以通过两条不同的信号转导支路分别诱发飞廉细胞凋亡和黄酮类次生产物合成,而且在UV诱发细胞凋亡的信号转导支路中存在着BI-1基因的特异性作用位点。上述研究结果为利用BI-1基因对药用植物品质和产量进行分子调控提供了理论依据,相关研究目前仍在进行中。
周玉洁,程龙,陶文沂,周红[4]（2008）在《美丽镰刀菌与固定化东北红豆杉的共生培养》文中研究表明采用固定化培养法模拟东北红豆杉（Taxus cuspidate）和美丽镰刀菌（Fusarium mairei K178）的共生环境,对其相互作用进行初步研究以期提高各自紫杉醇产量。共培养条件为:海藻酸钠浓度2%（M/V）,T.cuspidate细胞包埋量0.15g/ml,CaCl2浓度4%（M/V）,凝胶直径为33.5mm,钙化0.5h,以40ml接种量接入装液量为70ml/250ml摇瓶的改良MS培养基,25℃、160r/min振荡黑暗培养,第9d接入10%（V/V）对数期的F.mairei,10d后收获。结果表明,F.mairei对T.cuspidate细胞的生长有强烈抑制作用,能诱导紫杉醇等次生代谢物向胞外分泌;F.mairei与T.cuspidate的相互作用对共生培养物的紫杉醇产量也有显着影响。
周玉洁[5]（2008）在《东北红豆杉与美丽镰刀菌的固定化法共生培养》文中认为紫杉醇是一种二萜类衍生化合物,最早从红豆杉属植物中分离出来。由于其抗癌机制独特,对多种恶性肿瘤疗效突出,一直备受人们的关注。近年来国内外利用红豆杉细胞培养法和植物内共生真菌发酵法产生紫杉醇成为研究热点,但实现工业化生产的关键问题难以突破,产量性状不能满足生产要求。内共生真菌长期与宿主协同进化并形成了互惠互利的共生关系,相关研究显示内共生菌能够参与植物活性成分的合成或者转化;红豆杉内共生真菌产生的诱导物能限制植物细胞生长,促进紫杉醇合成与分泌;植物产生的诱导物也可促进内共生真菌的紫杉醇合成与分泌。因此,模拟内共生真菌与宿主植物的共生环境可能有助于研究两者的关系、次生代谢产物的合成机制等。但内共生真菌与红豆杉植物细胞的离体培养无论是从环境条件（pH、溶氧、剪切力、培养基成分等）,还是生长代谢（生理状态、生长周期、代谢产物、代谢途径等）都存在巨大差异。本论文采用固定化培养法模拟东北红豆杉（Taxus cuspidate）和美丽镰刀菌（Fusarium mairei）的共生环境,在保持两类细胞生命活力的条件下对其相互作用进行初步研究,以期提高各自紫杉醇产量。主要研究方法和结果如下:1.固定化细胞选择和培养的探索:探索了F. mairei的三种海藻酸钙固定化法和两种聚乙烯醇固定化法;T. cuspidate细胞的海藻酸钙固定化法,通过比较T. cuspidate与F. mairei的固定化培养状况,选择一种细胞和一种方法进行固定化培养。并详细地研究了固定化条件包括培养基选择、海藻酸钠溶液浓度、CaCl2溶液浓度、细胞包埋密度、凝胶珠直径等多种因素对固定化细胞的活力与紫杉醇产量的影响。结果显示,F. mairei的固定化操作不具有实用性。T. cuspidate细胞采用最温和的海藻酸钙固定化法,海藻酸钠浓度在20 g/L时,T. cuspidate细胞包埋量在0.15～0.2 g/mL之间时,凝胶直径在3～4 mm时,细胞细胞生长较稳定,耗糖较快,酚类产量较低,且包埋的细胞没有渗漏。2.共生培养体系的优化:详细地研究了T. cuspidate与F. mairei的接种量、接种时间、培养时间等多种因素对共生培养体系的影响。并进行对照实验,排除植物细胞内紫杉醇残留、死细胞分泌物或者渗漏的细胞碎片、固定化实验材料等因素对实验结果的干扰。通过正交实验优化共培养体系的最佳实验条件为:海藻酸钠浓度2%（M/V）,T. cuspidate细胞包埋量0.15 g/mL,CaCl2浓度4%（M/V）,凝胶直径为3～3.5 mm,钙化0.5h,以40 mL接种量接入装液量均为70 mL/250 mL的共生培养基。25℃、黑暗、160 r/min震荡培养。植物细胞培养第9天接入10%（V/V）对数期的F. mairei培养物,继续培养10天后收获。结果表明,F. mairei对T. cuspidate细胞的生长有强烈抑制作用,能诱导紫杉醇等次生代谢物向胞外分泌;T. cuspidate细胞的分泌物对F. mairei的紫杉醇产量也有显着影响。3.选择合适的培养基与发酵条件,以期提高紫杉醇的产量。详细地研究了培养基成分（改良MS培养基主要营养元素、促细胞活力添加剂、促紫杉醇产量添加剂等、促产物释放添加剂等）对共培养体系中的传质效果、F. mairei的紫杉醇生产和菌体增殖、固定化T. cuspidate的细胞活力等的影响,以及摇瓶装液量、补加碳源对终产量的影响。结果显示,培养基中CA含量的升高有利于F. mairei菌体的增殖,鉴于紫杉醇积累和细胞生长之间的矛盾,二者最佳平衡点即MS培养基原有添加量;细胞生长素2,4-D、NAA和细胞分裂素6-BA对F. mairei的紫杉醇生产和菌体增殖几乎没有影响,细胞分裂素KT的浓度升高时对F. mairei的紫杉醇产量有抑制作用;在F. mairei培养第6天补加30 g/L蔗糖可以促进紫杉醇产量提高和代谢物释放。装液量的差异导致的溶氧差异也能显着影响紫杉醇产量。本实验改良MS培养基,提高原有矿物质元素KH2PO4、CaCl2、（NH4）2SO4、FeSO4- Na2·EDTA浓度均不利于F. mairei的紫杉醇生产;提高CaCl2、（NH4）2SO4、FeSO4-Na2·EDTA浓度对F. mairei的菌体增殖还有抑制作用,可能是pH偏酸性引起菌体代谢合成途径不同。不同浓度的H3BO3对F. mairei的紫杉醇生产和菌体增殖几乎没有影响,推测F. mairei采用PVA-H3BO3固定化法培养时细胞生长受到抑制的主要影响因素是PVA、固定化操作环节或是酸性pH。化学释放剂对F. mairei的紫杉醇生产和菌体增殖、对T. cuspidate细胞固定化培养中紫杉醇释放率的影响都很稳定,固定化培养T. cuspidate细胞的紫杉醇等代谢物还是F. mairei培养物促释放效果显着。
魏明[6]（2007）在《霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长和多糖合成的动力学研究》文中研究说明霍山石斛是我国珍贵的药用植物，产于安徽霍山及其邻近地区，石斛多糖具有抗肿瘤、增强人体免疫等功效。由于霍山石斛在自然环境下生长缓慢，加上人工过度采集，其自然资源已濒临灭绝。目前对霍山石斛的研究主要集中在组织培养方面，但试管苗的脱瓶移栽问题尚未解决。霍山石斛类原球茎是霍山石斛的体细胞胚胎，具有和植株同样的物质代谢和发育潜能。利用霍山石斛类原球茎悬浮培养生产活性多糖是解决霍山石斛资源短缺问题的有效途径之一。本文对霍山石斛类原球茎悬浮培养过程进行了系统的动力学分析，并构建了动力学模型；考察了植酸和多胺对霍山石斛类原球茎细胞生长和多糖合成的影响；采用二步培养法对霍山石斛类原球茎合成多糖进行了研究；在10 L气升式反应器中进行了初步扩大培养。不同培养条件下，霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长曲线呈现较为典型的S型，低浓度时，蔗糖是细胞生长的限制性因素，提高蔗糖浓度可以明显促进细胞生长，蔗糖浓度在30g／L时，类原球茎生物量达到最大；但蔗糖浓度超过30 g／L后对细胞生长具有抑制作用。硝酸盐浓度为30 mmol／L时，有利于细胞生长，高浓度时对细胞生长有抑制作用。磷酸盐是细胞生长的限制性因素，提高磷酸盐浓度可以促进细胞生长，缩短培养周期，当磷酸盐浓度为2.5mmol／L时，生物量达最大，为28.7g DW／L。不同培养过程中多糖总产量变化规律相似。在一定范围内，增加起始蔗糖浓度有利于多糖积累，但在过高蔗糖浓度下，多糖产量反而下降。硝酸盐浓度为30mmol／L时，有利于多糖积累。初始磷酸盐浓度对多糖的积累影响显着，当磷酸盐浓度为0.312 mmol／L时，多糖积累量最大为2.46g／L。多糖合成不仅与类原球茎细胞的生长密切相关，而且与细胞内还原糖浓度有关。霍山石斛类原球茎对培养基中蔗糖的利用采用先水解后吸收的方式，可以用带底物抑制的酶反应动力学方程来描述该过程。类原球茎对葡萄糖和果糖的吸收没有明显差别，细胞内还原糖的积累与培养基的组成有密切关系，各种培养条件下类原球茎对蔗糖的得率系数也因此不同。类原球茎对磷酸盐的吸收比较快，细胞内磷酸盐的积累水平与培养基初始磷酸盐浓度有关，细胞内磷酸盐的积累水平对类原球茎细胞的生长和多糖积累有重要影响。构建了霍山石斛类原球茎悬浮培养过程的桔构化动力学模型。模型中生物相被分为四个部分：细胞内还原糖、中间代谢产物，代谢产物多糖、细胞的呼吸损失。非生物相指细胞外部培养基，包括蔗糖和还原糖两部分。模型的模拟结果与实验测定值基本相符，能用于霍山石斛类原球茎的悬浮培养过程预测。在培养基中添加2.5g／L的植酸可以抑制过氧化物酶和多酚氧化酶的活性，提高细胞活力，促进细胞生长和多糖的合成，最终生物量为29.4g DW／L，多糖产量为2.06g／L。添加0.6mmol／L的腐胺和精氨能提高内源多胺的含量，促进霍山石斛类原球茎细胞的生长和多糖的合成，最终生物量为32.6g DW／L，多糖产量为2.20g／L。磷是霍山石斛类原球茎细胞生长和多糖积累的有效调控因素。可以在适合类原球茎增殖的蔗糖浓度下，调节磷酸盐浓度，使碳源流向多糖合成。利用二步法培养，第一步培养磷酸盐浓度为2.5 mmol／L，第二步培养磷酸盐浓度为0.312 mmol／L，结果多糖产量和多糖含量分别为5.22g／L和11.9％，明显高出其它方法。建立的二步法培养模型基本反映了在二步培养中霍山石斛类原球茎增殖和多糖积累的变化规律。进行了霍山石斛类原球茎悬浮培养的初步放大试验，通气量在0.5 L／min较适宜。发酵罐中获得的最大生物量是摇瓶的86.5％，多糖产量是摇瓶的145％。在反应器中，类原球茎细胞生长和多糖积累的动力学特性和摇瓶中相似，但发酵罐培养中各种基质消耗同摇瓶相比出现滞后现象，且利用率偏低。通过流加补料培养，生物量提高到44.7g DW／L，多糖产量提高到8.15g／L。
尹德明[7]（2006）在《固定化微环境对红豆杉细胞初生代谢和次生代谢的影响》文中指出用聚氨酯泡沫为载体固定化红豆杉细胞以构建微环境,通过测定分析细胞壁表面化学成分、膜脂肪酸组分、活性氧、金属离子和紫杉醇等生化指标,研究了微环境对红豆杉细胞初生代谢和次生代谢的影响。运用X光光电子能谱仪对东北红豆杉细胞壁表面化学成分进行了分析。结果表明固定化载体表面的细胞壁的N/C、N/P和多肽类化合物显着高于固定化细胞,而碳氢化合物和多糖物质则明显低于固定化细胞。固定化细胞壁表面的K/C、N/C和N/P呈下降趋势。采用双水相分离法、气相色谱技术以及外源H2O2添加等手段,分别考察了膜脂肪酸组分及活性氧的含量变化和紫杉醇合成的关系。结果发现固定化细胞的膜亚油酸和亚麻酸含量增多,而硬脂酸含量下降,膜脂肪酸组分趋向不饱和化和脂肪酸不饱和指数（IUFA）增高,固定化细胞的紫杉醇含量与IUFA变化有较好的同步性,而与硬脂酸含量呈负相关性。固定化细胞胞内H2O2及微环境溶液内H2O2和O2-。的含量在细胞生长晚期（20天后）显着地增加,添加H2O（215μM和20μM）能促进细胞的苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性和紫杉醇生物合成,但对膜脂过氧化产物（MDA）和膜通透性没有影响。运用电感耦合等离子发射光谱仪对位于固定化载体不同层面的细胞K+、Ca2+和Mg2+进行了测定,分析了固定化不同层细胞的K+、Ca2+和Mg2+含量分布和紫杉醇合成之间的关系。结果得出固定化内层细胞的离子含量变化规律为:Ca2+ >Mg2+>K+,中层和外层细胞的离子含量变化规律为:K+ >Ca2+ >Mg2+。固定化内层细胞的Ca2+和Mg2+含量显着地高于中层和外层细胞,而K+含量则明显低于中层和外层细胞,而且内层细胞的紫杉醇含量也显着高于中层和外层细胞。
门学虎,李彦锋,周林成[8]（2004）在《聚乙烯醇载体的制备及应用研究进展》文中研究表明介绍了PVA载体的制备及应用原理,综述了各类PVA载体的制备及其在生物医学工程、环境保护、生物化工等领域应用的研究进展.PVA载体所具有的亲水性及反应性特点将赋予其广泛的应用前景.
王素芳[9]（2004）在《植物细胞的固定化培养》文中研究表明植物细胞培养已成为生产医药、食品、化妆品等重要化合物的一条新途径.在提高次级代谢物产量的研究中,固定化培养逐步显示其优势.文章重点介绍了固定化培养的特点、固定化方法、固定化反应器和产物的释放四个方面的内容.
孙祺[10]（2004）在《微胶囊固定化东北红豆杉细胞生长代谢的研究》文中认为为了了解微囊固定化植物细胞的生长与代谢规律，为大规模固定化植物细胞生产奠定实验基础，本文以海藻酸-壳聚糖包埋东北红豆杉细胞（Taxuscuspidata），通过对照在不同胶囊包埋条件下与普通悬浮培养细胞的异同点，改变包埋量、包埋载体密度、换液时间等参数，观察了微囊化细胞生长与代谢情况，分析了微囊固定化细胞产生这些生长与代谢变化的主要影响因素，对胶囊包埋红豆杉细胞生长与代谢的影响形成一个整体的认识。得到如下结果： 用海藻酸-壳聚糖胶球包埋东北红豆杉细胞时，细胞受到最大影响在传质方面，细胞活力下降。海藻酸钠-壳聚糖液芯胶球和无壳聚糖层的海藻酸钠胶球作为改进包埋方法，有利于保持较高的细胞存活率和代谢能力，对糖类等营养物质的吸收较好。两者均使细胞产生一些应激反应，包括细胞膜通透性增大，胞外蛋白含量增加，培养液出现碱化等。而无论有无壳聚糖层包裹的固芯胶球均比液芯胶球更利于酚类等次生代谢产物的合成与积累。 细胞生长的停滞期换液不能明显改进细胞存活率以促进次生代谢产物的积累。换液后的细胞所出现的生理现象，包括细胞膜透性变化、蛋白质的吸收与代谢、酚积累等方面表现出与未换液相近似的规律。 选用不同海藻酸钠载体密度包埋细胞时，随着载体密度增大，培养液中的酚积累和电导率增长。20g/L-30g/L 是适中的载体密度，有利于保持包埋细胞较高的活力。细胞包埋的不同阶段，包埋量影响细胞存活率、营养消耗等的程度不同。高包埋量使细胞间相互刺激作用较大，有更多胞内离子向胞外释放。包埋量越高，其酚积累的峰值出现越晚。在细胞的停滞期，酚积累的量与包埋量正相关。 海藻酸钠胶球固定化细胞可以使其膜透性改变，胞内离子向外释放。这种刺激一方面是包埋在胶球表面的细胞受到其它胶球冲击、剪切等作用，另一方面是包埋在胶球内部的细胞受到包埋载体和其它细胞的相互作用。
二、双载体固定化中国红豆杉细胞的初步研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、双载体固定化中国红豆杉细胞的初步研究（论文提纲范文）
（1）固定化海南粗榧细胞培养体系的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 海南粗榧及其抗癌活性物质研究概况 |
| 1.1.1 海南粗榧资源概况 |
| 1.1.2 海南粗榧抗癌活性物质研究概况 |
| 1.1.3 高三尖杉酯碱与三尖杉酯碱的研究概况 |
| 1.1.4 三尖杉酯碱与高三尖杉酯碱化学结构及理化性质 |
| 1.1.5 高三尖杉酯碱与三尖杉酯碱的抗癌活性研究 |
| 1.1.6 高三尖杉酯碱与三尖杉酯碱的合成路径 |
| 1.1.7 海南粗榧开发利用现状 |
| 1.2 植物细胞固定化研究概况 |
| 1.2.1 植物细胞固定化方法 |
| 1.2.2 固定化植物细胞特点 |
| 1.2.3 固定化植物细胞的应用概况 |
| 1.3 海藻酸钙凝胶对植物细胞影响概述 |
| 1.3.1 海藻酸钙凝胶对细胞的诱导作用 |
| 1.3.2 海藻酸钙凝胶对细胞的保护作用 |
| 1.3.3 海藻酸钙对细胞膜透性的改变 |
| 1.3.4 氯化钙对植物细胞影响 |
| 1.4 本文研究的目的意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物细胞 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 培养基 |
| 2.2 固定化海南粗榧细胞培养方法 |
| 2.3 试验设计 |
| 2.3.1 探索植物细胞固定化条件对细胞生长及产物合成的影响,并最终确定固定化细胞培养生产周期 |
| 2.3.2 确定固定化粗榧细胞培养合成产物的周期后,研究海南粗榧细胞固定化培养优化条件 |
| 2.3.3 不同种龄对固定化细胞生长及产物合成的影响 |
| 2.4 试验分析方法 |
| 2.4.1 固定化海南粗榧细胞生长的测定 |
| 2.4.2 培养基中糖含量测定 |
| 2.4.3 培养基褐化值的测定 |
| 2.4.4 培养基中酚含量测定 |
| 2.4.5 固定化细胞活性的测定 |
| 2.4.6 固定化细胞中PAL酶活性测定 |
| 2.4.7 培养基中游离Ca~(2+)测定 |
| 2.4.8 凝胶球硬度测定 |
| 2.4.9 培养物中三尖杉酯碱及高三尖杉酯碱的提取与含量测定 |
| 2.4.10 统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 植物细胞固定化条件对细胞生长及产物合成的影响 |
| 3.1.1 固定化粗榧细胞培养过程中的细胞生长曲线 |
| 3.1.2 固定化海南粗榧细胞培养过程中细胞活力变化曲线 |
| 3.1.3 海南粗榧细胞固定化培养法对培养基总酚和细胞PAL酶变化的影响 |
| 3.1.4 固定化海南粗榧细胞培养最佳生产周期研究 |
| 3.2 固定化海南粗榧细胞培养条件的优化研究 |
| 3.2.1 海南粗榧细胞固定化培养最适海藻酸钠浓度研究 |
| 3.2.2 包埋过程中CaCl_2浓度对固定化海南粗榧细胞产三尖杉酯碱的影响 |
| 3.2.3 摇床转速对固定化海南粗榧细胞合成产物的影响 |
| 3.2.4 海南粗榧细胞固定化培养产三尖杉酯碱最佳接种量研究 |
| 3.2.5 海南粗榧细胞固定化培养包埋密度研究 |
| 3.2.6 固定化海南粗榧细胞培养重复利用研究 |
| 3.3 不同种龄海南粗榧细胞固定化培养过程中生长及产物合成情况 |
| 3.3.1 不同种龄细胞固定化培养获得产物研究 |
| 3.3.2 不同种龄细胞固定化培养过程中的细胞生长曲线、糖耗曲线以及细胞活力曲线 |
| 3.3.3 不同种龄细胞固定化培养过程中培养基褐化、总酚变化以及PAL酶活性变化情况 |
| 4 讨论 |
| 4.1 植物细胞固定化条件对细胞生长及产物合成的影响 |
| 4.2 固定化海南粗榧细胞培养优化条件的讨论 |
| 4.3 种龄对固定化海南粗榧细胞生长和三尖杉酯碱合成的影响 |
| 5 总结 |
| 5.1 植物细胞固定化条件对细胞生长及产物合成的影响 |
| 5.2 固定化海南粗榧细胞培养条件的优化研究 |
| 5.3 不同种龄海南粗榧细胞固定化培养过程中生长及产物合成情况 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）新型功能化聚乙烯醇的制备及性能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 聚乙烯醇概述 |
| 1.2 聚乙烯醇一些重要的基本性质 |
| 1.2.1 聚乙烯醇在水中的溶解性 |
| 1.2.2 表面活性 |
| 1.2.3 与其它水溶性高分子的互溶性 |
| 1.2.4 缩醛化反应 |
| 1.2.5 其它性质 |
| 1.3 聚乙烯醇的用途和应用 |
| 1.3.1 纤维加工 |
| 1.3.2 纸加工 |
| 1.3.3 粘合剂 |
| 1.3.4 乳化稳定剂 |
| 1.3.5 薄膜 |
| 1.3.6 成型物 |
| 1.4 聚乙烯醇官能化新产品的研究及在新领域中的应用研究进展 |
| 1.4.1、同无机纳米材料复合形成聚乙烯醇/无机纳米复合材料 |
| 1.4.2、聚乙烯醇作为生物载体的应用 |
| 1.4.3 聚乙烯醇作为固相合成载体及其应用 |
| 1.5 本学位论文的选题指导思想与研究意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 聚乙烯醇/二氧化硅纳米复合材料的制备及性能研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 原料和试剂 |
| 2.2.2 仪器及表征 |
| 2.2.3 纳米二氧化硅粒子的表面乙烯基化 |
| 2.2.4 改性纳米二氧化硅表面乙烯基量的测定 |
| 2.2.5 含有不同量的纳米二氧化硅的聚乙烯醇的制备及纯化 |
| 2.2.6 含有不同量的纳米二氧化硅的聚乙烯醇特性黏度的测定 |
| 2.2.7 含有不同量的纳米二氧化硅的聚乙烯醇醇解度的测定 |
| 2.2.8 含有不同量的纳米二氧化硅的聚乙烯醇膜的制备 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 乙烯基三乙氧基的投加量对修饰后纳米二氧化硅表面乙烯基含量的影响 |
| 2.3.2 定量红外在改性纳米二氧化硅过程中的应用 |
| 2.3.3 纳米二氧化硅及乙烯基化后纳米二氧化硅的XRD图 |
| 2.3.4 复合物聚乙烯醇/二氧化硅纳米材料的红外表征 |
| 2.3.5 纳米二氧化硅含量对PVA-SN复合物结构,特性黏度及醇解度的影响 |
| 2.3.6 原始纳米二氧化硅,乙烯基化后二氧化硅及复合物中二氧化硅的TEM图 |
| 2.3.7 纯的聚乙烯醇和聚乙烯醇/纳米二氧化硅复合物膜的表面形貌分析 |
| 2.3.8 纯的聚乙烯醇和聚乙烯醇/纳米二氧化硅复合物的热性能研究 |
| 2.3.9 纯的聚乙烯醇和聚乙烯醇/纳米二氧化硅复合物膜的机械性能研究 |
| 2.3.10 纯的聚乙烯醇和聚乙烯醇/纳米二氧化硅复合物膜的光透性的研究 |
| 2.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 聚乙烯醇/高岭土纳米复合材料的制备及性能研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 原料和试剂 |
| 3.2.2 仪器及表征 |
| 3.2.3 高岭土的热活化 |
| 3.2.4 高岭土DMSO前驱体的制备 |
| 3.2.5 醋酸乙烯酯插层高岭土单体的制备 |
| 3.2.6 聚乙烯醇/高岭土纳米复合材料的制备 |
| 3.2.7 X-射线的测定及插层率的计算 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 各种试样的红外光谱图 |
| 3.3.2 各种试样的XRD及插层率 |
| 3.3.3 各种试样的高岭土的TEM |
| 3.3.4 不同含量高岭土的复合物的热性能研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 新型聚乙烯醇接枝聚乙二醇载体的制备及性能研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 原料和试剂 |
| 4.2.2 仪器及表征 |
| 4.2.3 悬浮交联制备聚乙烯醇小球 |
| 4.2.4 阴离子聚合制备PVA-g-PEG树脂 |
| 4.2.5 PVA-g-PEG树脂环氧乙烷重复单元的计算和所得到的树脂的羟基值的理论计算 |
| 4.2.6 PVA小球及PVA-g-PEG树脂中真实羟基值的测定 |
| 4.2.7 PVA小球及PVA-g-PEG树脂的溶胀性能的测定 |
| 4.2.8 悬浮交联制备聚乙烯醇小球及阴离子聚合制备PVA-g-PEG树脂的放大实验 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 悬浮交联法制备聚乙烯醇小球过程中关键因素及影响小球尺寸的因素 |
| 4.3.2 阴离子聚合制备PVA-g-PEG小球过程中各因素的影响及所得树脂羟基含量的变化 |
| 4.3.3 PVA小球及PVA-g-PEG树脂的红外光谱研究 |
| 4.3.4 PVA小球及PVA-g-PEG树脂的NMR研究 |
| 4.3.5 PVA小球及PVA-g-PEG树脂的在不同溶剂中的溶胀性能的研究 |
| 4.3.6 PVA小球及PVA-g-PEG树脂的形貌研究 |
| 4.3.7 PVA小球及PVA-g-PEG树脂的热性能研究 |
| 4.3.8 悬浮交联法制备聚乙烯醇小球放大过程中的关键因素 |
| 4.3.9 阴离子聚合制备PVA-g-PEG树脂的放大实验结果 |
| 4.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 上升聚合法制备尺寸均一的聚乙烯醇小球 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 原料和试剂 |
| 5.2.2 仪器及表征 |
| 5.2.3 通过上升聚合法制备聚醋酸乙烯酯小球 |
| 5.2.4 聚醋酸乙烯酯小球醇解制备聚乙烯醇小球 |
| 5.2.5 PVAc小球及PVA小球中羟基值的测定 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 上升聚合制备聚醋酸乙烯酯实验条件的设计 |
| 5.3.2 单体溶液中各种组分及针头大小对上升聚合结果的影响 |
| 5.3.3 聚醋酸乙烯酯和聚乙烯醇小球的元素分析及聚乙烯醇小球的醇解度 |
| 5.3.4 聚醋酸乙烯酯和聚乙烯醇小球的CP/MAS ~(13)C NMR |
| 5.3.5 聚醋酸乙烯酯和聚乙烯醇小球的FT-IR |
| 5.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 结论与展望 |
| 致谢 |
| 附录 攻读博士期间的工作 |
（3）BI-1对紫外光诱发飞廉悬浮细胞凋亡和黄酮合成积累的影响及其信号转导机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 引言 |
| 1.1 植物细胞培养法生产天然产物的研究现状 |
| 1.2 植物细胞凋亡的研究现状 |
| 1.3 NO在植物体内的信号分子作用研究现状 |
| 1.4 本论文的研究思路和主要研究内容 |
| 第2章 转BI-1基因飞廉悬浮细胞培养条件的优化 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料、试剂和实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第3章 UV胁迫诱发飞廉悬浮细胞凋亡和对次生产物合成的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料、试剂和实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 参与UV胁迫诱发飞廉细胞死亡和次生产物合成的信号转导研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料、试剂和实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 BI-I基因的诱导表达对UV胁迫诱发飞廉细胞凋亡和次生产物合成的影响及其信号转导机理研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料、试剂和实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.5 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 部分试剂及培养基配制 |
| 附录B MS母液的配制 |
| 附录C 缩略词汇表 |
| 致谢 |
（4）美丽镰刀菌与固定化东北红豆杉的共生培养（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 T. cuspidate细胞悬浮培养 |
| 1.2.2 基础共培养实验 |
| 1.2.3 生长曲线的绘制 |
| 1.2.4 紫杉醇含量测定方法 |
| 1.2.5 分析方法 |
| 1.2.6 正交实验优化共培养条件 |
| 1.2.7 干扰因素排除实验 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 F.mairei和T. cuspidate细胞在MS培养基中的生长 |
| 2.2 共培养条件 |
| 2.2.1 T. cuspidate细胞固定化条件 |
| 2.2.2 共培养接种量的选择 |
| 2.2.3 共培养接种时间 依1.2.2节方法制备凝胶并培养, 每3d接入5% (V/V) F. mairei, 10d后收获。 |
| 2.3 共培养条件的优化 |
| 2.4 干扰因素排除实验 |
| 3 结果与讨论 |
（5）东北红豆杉与美丽镰刀菌的固定化法共生培养（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 紫杉醇概述 |
| 1.2 紫杉醇生产现状 |
| 1.2.1 化学合成及半合成 |
| 1.2.2 植物细胞离体培养法 |
| 1.2.3 微生物转化法 |
| 1.2.4 微生物发酵方法 |
| 1.2.5 内共生真菌与其宿主植物的共生关系 |
| 1.3 细胞固定化技术在两种细胞共同培养中的应用 |
| 1.3.1 植物细胞固定化技术的特点与应用 |
| 1.3.2 微生物细胞固定化技术的特点与应用 |
| 1.4 本论文的主要研究内容 |
| 1.4.1 固定化法共生培养需解决的问题 |
| 1.4.2 本论文的主要研究内容 |
| 第二章 细胞固定化培养的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 菌种和细胞株 |
| 2.2.2 培养基 |
| 2.2.3 药品与试剂 |
| 2.2.4 主要仪器 |
| 2.2.5 培养方法 |
| 2.2.6 紫杉醇提取方法 |
| 2.2.7 紫杉醇含量测定 |
| 2.2.8 胞外总酚含量的测定 |
| 2.2.9 pH 的测定 |
| 2.2.10 胶球体积的测定 |
| 2.2.11 可溶性蛋白质含量的测定 |
| 2.2.12 总糖的测定 |
| 2.2.13 生物量（DCW）的测定方法及生长曲线绘制 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 各标准曲线的绘制 |
| 2.3.2 F.mairei 在改良MS 培养基中的生长状况 |
| 2.3.3 利用海藻酸钙包埋法固定化F. mairei 细胞的方法 |
| 2.3.4 利用PVA－H3803 包埋法固定化F. mairei 细胞的方法 |
| 2.3.5 固定化T. cuspidate 细胞在改良MS 培养基中的生长状况 |
| 2.3.6 利用海藻酸钙包埋法固定化T. cuspidate 细胞的影响因素 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 共生培养条件优化的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 菌种和细胞株 |
| 3.2.2 培养基 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.2.4 主要仪器 |
| 3.2.5 实验方法 |
| 3.2.6 干扰因素排除实验设计 |
| 3.2.7 正交实验优化共培养条件 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 F. mairei 接种量对共培养的影响 |
| 3.3.2 固定化T. cuspidate 接种量对共培养物紫杉醇产量的影响 |
| 3.3.3 共培养接种时间的选择 |
| 3.3.4 正交试验优化共培养条件 |
| 3.3.5 干扰因素排除实验 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 共生培养基与发酵条件改良的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 菌种和细胞株 |
| 4.2.2 培养基 |
| 4.2.3 主要试剂 |
| 4.2.4 主要仪器 |
| 4.2.5 紫杉醇的提取及测定方法 |
| 4.2.6 其他分析方法 |
| 4.2.7 共培养基础实验 |
| 4.2.8 培养基配方的优化 |
| 4.2.9 发酵条件的优化 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 共生培养基成分的优化 |
| 4.3.2 共培养发酵条件的优化 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
（6）霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长和多糖合成的动力学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 药用植物细胞与器官大量培养的意义 |
| 1.1.1 药用植物细胞培养的意义 |
| 1.1.2 植物细胞培养的应用 |
| 1.1.2.1 利用植物细胞培养技术生产药用物质 |
| 1.1.2.2 植物细胞培养技术在中药资源保护和中药现代化中的作用 |
| 1.2 植物细胞培养技术的研究进展 |
| 1.2.1 大规模细胞悬浮培养技术 |
| 1.2.2 组织、器官培养技术 |
| 1.2.3 固定化培养技术 |
| 1.2.4 二步法培养技术 |
| 1.2.5 两相培养技术 |
| 1.2.6 反义技术 |
| 1.3 植物细胞培养过程的动力学研究进展 |
| 1.4 药用石斛的研究进展 |
| 1.4.1 石斛属植物化学成分研究进展 |
| 1.4.1.1 多糖类成分 |
| 1.4.1.2 菲类和联苄类成分 |
| 1.4.1.3 生物碱类成分 |
| 1.4.1.4 其它成分 |
| 1.4.2 石斛属植物药理活性研究 |
| 1.4.2.1 抗衰老作用和增强机体免疫作用 |
| 1.4.2.2 防治白内障作用 |
| 1.4.2.3 抗肿瘤作用 |
| 1.4.2.4 抗炎、抗诱变及抗氧化作用 |
| 1.4.2.5 对心血管系统作用 |
| 1.4.2.6 对消化系统作用 |
| 1.4.3 药用石斛的组织培养 |
| 1.5 研究意义和内容 |
| 参考文献 |
| 第二章 霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长、多糖合成和营养成分消耗的动力学分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 植物材料和培养基 |
| 1.2 设备与试剂 |
| 1.2.1 主要仪器与设备 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 1.3 类原球茎悬浮培养 |
| 1.4 类原球茎生长测定 |
| 1.5 类原球茎破碎 |
| 1.6 多糖提取及分析 |
| 1.7 培养基中及细胞内各种成分测定 |
| 1.7.1 蒽酮法测定蔗糖、果糖和总糖 |
| 1.7.2 葡萄糖测定 |
| 1.7.3 还原糖测定 |
| 1.7.4 硝酸根和铵根离子测定 |
| 1.7.5 磷酸根离子测定 |
| 1.8 实验数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 接种量的确定 |
| 2.2 霍山石斛类原球茎继代周期的确定 |
| 2.3 碳源种类对霍山石斛类原球茎增殖和多糖合成的影响 |
| 2.4 氮源种类对霍山石斛类原球茎增殖和多糖合成的影响 |
| 2.5 霍山石斛类原球茎悬浮培养过程中细胞含水量的变化 |
| 2.6 霍山石斛类原球茎悬浮培养过程中pH值的变化 |
| 2.7 培养过程中霍山石斛类原球茎细胞生长的动力学分析 |
| 2.7.1 不同起始蔗糖浓度对细胞生长的影响 |
| 2.7.2 不同起始硝酸盐浓度对细胞生长的影响 |
| 2.7.3 不同起始磷酸盐浓度对细胞生长的影响 |
| 2.7.4 培养过程中霍山石斛类原球茎的比生长速率 |
| 2.8 培养过程中多糖积累的动力学分析 |
| 2.8.1 不同起始蔗糖浓度对多糖积累的影响 |
| 2.8.2 不同起始硝酸盐浓度对多糖积累的影响 |
| 2.8.3 不同起始磷酸盐浓度对多糖积累的影响 |
| 2.9 霍山石斛类原球茎悬浮培养过程中细胞生长和多糖合成的关系 |
| 2.10 霍山石斛类原球茎悬浮培养过程中营养成分消耗的动力学分析 |
| 2.10.1 霍山石斛类原球茎悬浮培养过程中蔗糖消耗动力学分析 |
| 2.10.1.1 不同培养条件下糖的消耗 |
| 2.10.1.2 霍山石斛类原球茎悬浮培养过程中蔗糖水解速率 |
| 2.10.1.3 霍山石斛类原球茎悬浮培养过程中细胞内还原糖的变化规律 |
| 2.10.1.4 霍山石斛类原球茎和多糖对蔗糖的得率 |
| 2.10.2 培养过程中NO_3离子消耗动力学分析 |
| 2.10.2.1 不同培养条件下NO_3离子的消耗过程 |
| 2.10.2.2 细胞内NO_3和NH_4~+的积累规律 |
| 2.10.3 培养过程中磷酸盐消耗动力学分析 |
| 2.10.3.1 不同培养条件下磷酸盐的消耗过程 |
| 2.10.3.2 细胞内磷酸盐的积累规律 |
| 2.10.3.3 细胞内磷酸盐积累水平与类原球茎增殖和多糖积累的关系 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 霍山石斛类原球茎悬浮培养的结构化动力学模型 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 霍山石斛类原球茎和培养基 |
| 1.1.2 试剂和仪器 |
| 1.2 分析方法 |
| 1.3 实验数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 结构化动力学模型的建立 |
| 2.1.1 模型的组成结构分析 |
| 2.1.2 质量平衡方程 |
| 2.1.3 动力学方程的建立 |
| 2.1.3.1 非生物相各步反应过程 |
| 2.1.3.2 生物相各步反应过程 |
| 2.1.3.3 结构化模型方程的建立 |
| 2.1.3.4 动力学模型参数确定和优化 |
| 2.1.3.5 模型中初始值确定 |
| 2.2 结构化动力学模型的验证和应用 |
| 2.2.1 结构化动力学模型的模拟计算结果 |
| 2.2.2 结构化动力学模型的应用 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 植酸和多胺对霍山石斛类原球茎细胞生长和多糖合成的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 植物材料与培养基 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 类原球茎悬浮培养 |
| 1.4 类原球茎生长测定和多糖提取 |
| 1.5 分析方法 |
| 1.6 实验数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 添加植酸对霍山石斛类原球茎悬浮培养的影响 |
| 2.1.1 植酸对霍山石斛类原球茎细胞生长和多糖合成的影响 |
| 2.1.2 植酸对细胞内还原糖、可溶性蛋白质和丙二醛含量的影响 |
| 2.1.3 植酸对细胞中过氧化物酶和多酚氧化酶的活性影响 |
| 2.1.4 植酸对培养基中养分消耗的影响 |
| 2.2 多胺对霍山石斛类原球茎悬浮培养的影响 |
| 2.2.1 多胺对霍山石斛类原球茎增殖和多糖合成的影响 |
| 2.2.2 多胺抑制剂对霍山石斛类原球茎增殖和多糖合成的影响 |
| 2.2.3 霍山石斛类原球茎悬浮培养过程中内源多胺含量变化 |
| 2.2.4 多胺对碳源和氮源利用的影响 |
| 2.2.5 多胺对蔗糖酶和硝酸还原酶活性的影响 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 霍山石斛类原球茎二步培养合成多糖的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 霍山石斛类原球茎和培养基 |
| 1.1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.2 培养条件 |
| 1.3 分析方法 |
| 1.4 实验数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 补料时间对霍山石斛类原球茎生物量和多糖积累的影响 |
| 2.2 补料培养基中蔗糖浓度对类原球茎增殖和多糖积累的影响 |
| 2.3 补料培养基中磷酸盐浓度对类原球茎增殖和多糖积累的影响 |
| 2.4 二步培养的动力学模型建立 |
| 2.4.1 模型的条件假设 |
| 2.4.2 数学模型中参数的确定 |
| 2.4.3 模型求解 |
| 2.4.4 模型验证 |
| 2.4.5 类原球茎增殖和多糖积累的变化规律 |
| 2.4.6 模型的实用性考察 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 霍山石斛类原球茎的反应器扩大培养 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 霍山石斛类原球茎与培养基 |
| 1.2 发酵设备与药品 |
| 1.3 反应器培养方法 |
| 1.4 分析方法 |
| 1.5 实验数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 发酵罐初步放大试验结果 |
| 2.1.1 发酵罐培养过程中pH值变化 |
| 2.1.2 接种量对霍山石斛类原球茎增殖和多糖积累的影响 |
| 2.1.3 通气量对霍山石斛类原球茎增殖和多糖积累的影响 |
| 2.1.4 霍山石斛类原球茎增殖和多糖积累规律 |
| 2.1.5 培养基中营养成分消耗规律 |
| 2.1.6 补料过程中类原球茎增殖和多糖积累规律 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第七章 结论与展望 |
| 一 论文主要结论 |
| 二 本论文的创新点 |
| 三 展望 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
（7）固定化微环境对红豆杉细胞初生代谢和次生代谢的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 固定化微环境的定义 |
| 1.2 固定化微环境的种类 |
| 1.2.1 包埋法固定化微环境 |
| 1.2.2 吸附固定化微环境 |
| 1.2.3 其他固定化微环境 |
| 1.3 固定化微环境的理化性质和对细胞的影响机制 |
| 1.3.1 固定化微环境的物理和化学性质 |
| 1.3.2 固定化微环境对细胞的影响机制 |
| 1.3.3 固定化细胞的数学模型 |
| 1.4 促进固定化细胞目的产物释放的措施 |
| 1.4.1 培养条件变化 |
| 1.4.2 运用物理和化学手段增加膜通透性 |
| 1.4.3 两相培养法 |
| 1.5 固定化微环境细胞培养工程策略 |
| 1.5.1 明确某种植物细胞是否需要固定化微环境培养 |
| 1.5.2 获得外泌型（至少是部分的）高产细胞系 |
| 1.5.3 选择合适的固定化微环境 |
| 1.5.4 前体饲喂 |
| 1.5.5 运用多种手段促进细胞目的产物分泌 |
| 1.5.6 选择合理的生物反应过程和合适的生物反应器 |
| 1.6 本文研究目的及主要内容 |
| 第二章 固定化过程中红豆杉细胞壁表面化学成分含量的变化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试剂 |
| 2.2.2 细胞株系及培养 |
| 2.2.3 聚氨酯泡沫预处理及固定化微环境培养条件的建立 |
| 2.2.4 细胞生物量的测定 |
| 2.2.5 固定化细胞的释放 |
| 2.2.6 细胞的X 光光电子能谱仪（XPS）分析 |
| 2.2.7 环境扫描电子显微镜观察 |
| 2.2.8 实验设计 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 固定化过程细胞生物量的变化 |
| 2.3.2 细胞壁表面化学成分的 XPS 分析 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 微环境对红豆杉细胞膜 ATPase 活性及脂肪酸组分含量的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试剂 |
| 3.2.2 细胞株系及培养 |
| 3.2.3 细胞生物量的测定 |
| 3.2.4 培养液的提取 |
| 3.2.5 pH 的测定 |
| 3.2.6 电导率的测定 |
| 3.2.7 固定化细胞的释放 |
| 3.2.8 细胞膜的提取 |
| 3.2.9 H~+-ATPase 和Ca~(2+)-ATPase 活性的测定 |
| 3.2.10 膜脂肪酸提取 |
| 3.2.11 膜脂肪酸组分测定及不饱和指数（IUFA）的计算 |
| 3.2.12 可溶性蛋白质含量的测定 |
| 3.2.13 PAL 活性的测定 |
| 3.2.14 紫杉醇含量的测定 |
| 3.2.15 实验设计 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 微环境对细胞生长的影响 |
| 3.3.2 微环境内pH 的变化 |
| 3.3.3 微环境对电导率的影响 |
| 3.3.4 膜纯度的测定 |
| 3.3.5 微环境对膜 H~+-ATPase 和 Ca~(2+)-ATPase 活性的影响 |
| 3.3.6 微环境对膜脂肪酸组分的影响 |
| 3.3.7 微环境对可溶性蛋白质含量的影响 |
| 3.3.8 微环境对 PAL 活性的影响 |
| 3.3.9 微环境对紫杉醇合成的影响 |
| 3.3.10 膜脂肪酸组分含量与紫杉醇合成的动态变化关系 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 微环境对红豆杉细胞活性氧含量和紫杉醇合成的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试剂 |
| 4.2.2 细胞株系及培养 |
| 4.2.3 固定化细胞的释放 |
| 4.2.4 丙二醛（MDA）含量的测定 |
| 4.2.5 细胞膜通透性的测定 |
| 4.2.6 培养液的提取 |
| 4.2.7 H_2O_2含量的测定 |
| 4.2.8 O_2~(·-)含量的测定 |
| 4.2.9 PAL 活性测定 |
| 4.2.10 紫杉醇含量的测定 |
| 4.2.11 实验设计 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 微环境对细胞膜脂过氧化的影响 |
| 4.3.2 微环境对细胞膜通透性的影响 |
| 4.3.3 微环境对胞内 H_2O_2含量的变化 |
| 4.3.4 微环境对胞外 O_2~(·-)含量的变化 |
| 4.3.5 微环境对胞外 H_2O_2含量的变化 |
| 4.3.6 释放细胞胞内 H202含量的变化 |
| 4.3.7 添加 H_2O_2对细胞膜通透性和细胞生长的影响 |
| 4.3.8 添加 H_2O_2对细胞膜通透性和次生代谢的影响 |
| 4.3.9 活性氧含量变化与紫杉醇合成的关系 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 微环境对红豆杉细胞金属离子含量分布和紫杉醇合成的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试剂 |
| 5.2.2 细胞株系及培养 |
| 5.2.3 固定化载体的分层定义 |
| 5.2.4 固定化细胞的释放 |
| 5.2.5 细胞内 K~+、Mg~(2+)和 Ca~(2+)的提取 |
| 5.2.6 培养液的提取 |
| 5.2.7 K~+、Mg~(2+)和 Ca~(2+)的测定 |
| 5.2.8 紫杉醇含量的测定 |
| 5.2.9 实验设计 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 胞外和胞内 K~+含量的测定 |
| 5.3.2 胞外和胞内 Mg~(2+)含量的变化 |
| 5.3.3 胞外和胞内 Ca~(2+)含量的测定 |
| 5.3.4 固定化不同层面细胞胞内紫杉醇含量的变化 |
| 5.3.5 固定化不同层面细胞生物量的测定 |
| 5.3.6 胞内 K~+、Mg~(2+)和Ca~(2+)的含量和紫杉醇含量的变化关系 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 微环境内营养物质消耗和紫杉醇合成的动态关系 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 试剂 |
| 6.2.2 细胞株系及培养 |
| 6.2.3 细胞生物量的测定 |
| 6.2.4 固定化细胞的释放 |
| 6.2.5 培养液的提取 |
| 6.2.6 pH 的测定 |
| 6.2.7 电导率的测定 |
| 6.2.8 果糖含量的测定 |
| 6.2.9 蔗糖含量的测定 |
| 6.2.10 葡萄糖含量的测定 |
| 6.2.11 硝态氮含量的测定 |
| 6.2.12 可溶性磷含量的测定 |
| 6.2.13 紫杉醇的提取和含量测定 |
| 6.2.14 实验设计 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 微环境对南方红豆杉细胞生长的影响 |
| 6.3.2 微环境内pH 的变化 |
| 6.3.3 微环境内电导率的变化 |
| 6.3.4 微环境对胞外 NO_3~-浓度的影响 |
| 6.3.5 微环境内可溶性磷含量的变化 |
| 6.3.6 微环境对胞外蔗糖含量的影响 |
| 6.3.7 微环境对胞外果糖含量的影响 |
| 6.3.8 微环境对胞外葡萄糖含量的影响 |
| 6.3.9 微环境对紫杉醇含量的影响 |
| 6.3.10 微环境内营养物质消耗和紫杉醇合成的关系 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 微环境对红豆杉细胞抗氧化酶活性的时空影响 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验与方法 |
| 7.2.1 试剂 |
| 7.2.2 细胞株系及培养 |
| 7.2.3 固定化载体的分层定义 |
| 7.2.4 固定化细胞的释放 |
| 7.2.5 胞内酶的提取 |
| 7.2.6 超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定 |
| 7.2.7 过氧化氢酶（CAT）活性的测定 |
| 7.2.8 过氧化物酶（POD）活性的测定 |
| 7.2.9 抗坏血酸-过氧化物酶（APX）活性的测定 |
| 7.2.10 脂氧合酶（LOX）活性的测定 |
| 7.2.11 MDA 含量的测定 |
| 7.2.12 多酚氧化酶（PPO）活性的测定 |
| 7.2.13 PAL 活性的测定 |
| 7.2.14 实验设计 |
| 7.3 结果与讨论 |
| 7.3.1 微环境对超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响 |
| 7.3.2 微环境对过氧化氢酶（CAT）活性的效应 |
| 7.3.3 微环境对过氧化物酶（POD）活性的影响 |
| 7.3.4 微环境对抗坏血酸-过氧化物酶（APX）活性的影响 |
| 7.3.5 微环境对脂氧合酶（LOX）活性的影响 |
| 7.3.6 微环境对细胞MDA 含量的影响 |
| 7.3.7 微环境对多酚氧化酶（PPO）活性的效应 |
| 7.3.8 微环境对细胞PAL活性的效应 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 结论与展望 |
| 8.1 结论 |
| 8.2 展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况 |
| 缩写词与符号表 |
| 致谢 |
（9）植物细胞的固定化培养（论文提纲范文）
| 1 固定化培养的特点 |
| 1.1 更好的光合作用 |
| 1.2 促进或改变产物的释放 |
| 2 固定化方法 |
| 2.1 传统固定化方法 |
| 2.2 膜法 |
| 2.3 细胞自固定 |
| 3 固定化反应器 |
| 3.1 传统固定化反应器 |
| 3.2 膜固定化反应器 |
| 3.3 自固定化反应器 |
| 4 产物释放的促进 |
| 4.1 传统方法-化学法 |
| 4.2 pH扰动法 |
| 4.3 重组法 |
| 4.4 两相培养法 |
（10）微胶囊固定化东北红豆杉细胞生长代谢的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 微胶囊 |
| 1.1.1 微胶囊的发展及作用 |
| 1.1.2 微胶囊技术应用于细胞次生代谢产物生产 |
| 1.2 海藻酸钠-壳聚糖微胶囊 |
| 1.2.1 海藻酸与壳聚糖 |
| 1.2.2 海藻酸－壳聚糖微胶囊的制备 |
| 1.3 微胶囊与细胞生理 |
| 1.3.1 微囊化细胞的生长与繁殖 |
| 1.3.2 微囊化细胞的代谢与生产 |
| 1.3.3 包埋工艺对细胞生产与生长的影响 |
| 1.3.4 海藻酸-壳聚糖微胶囊包埋材料的特定作用 |
| 1.4 本文的研究目的及主要研究内容 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 预备实验 |
| 第三章 不同包埋方式对东北红豆杉细胞生理影响的比较 |
| 引言 |
| 3.1 胶球包埋材料对东北红豆杉细胞活性的影响 |
| 4.1.1 实验设计 |
| 4.1.2 结果与讨论 |
| 3.2 海藻酸钠－壳聚糖固芯和液芯胶球对细胞生理影响的比较 |
| 3.2.1 实验设计 |
| 3.2.2 结果与讨论 |
| 3.3 无壳聚糖膜的海藻酸钠胶球对细胞生理影响 |
| 3.3.1 实验设计 |
| 3.3.2 结果与讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 胶球制备的不同条件和培养过程对细胞生长代谢的影响 |
| 引言 |
| 4.1 载体浓度的影响 |
| 4.1.1 实验设计 |
| 4.1.2 结果与讨论 |
| 4.2 包埋量的生理影响 |
| 4.2.1 实验设计 |
| 4.2.2 结果与讨论 |
| 4.3 固定化换液时间的选择 |
| 4.3.1 实验设计 |
| 4.3.2 结果与讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 海藻酸钠胶球固定化促释现象研究 |
| 引言 |
| 5.1 培养液电导率变化比较分析 |
| 5.1.1 实验设计 |
| 5.1.2 结果与讨论 |
| 5.2 几种典型离子的变化分析 |
| 5.2.1 实验设计 |
| 5.2.2 结果与讨论 |
| 5.3 小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 本文主要结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、双载体固定化中国红豆杉细胞的初步研究（论文参考文献）
- [1]固定化海南粗榧细胞培养体系的研究[D]. 潘亚华. 海南大学, 2016(08)
- [2]新型功能化聚乙烯醇的制备及性能研究[D]. 贾鑫. 兰州大学, 2009(07)
- [3]BI-1对紫外光诱发飞廉悬浮细胞凋亡和黄酮合成积累的影响及其信号转导机制研究[D]. 叶小颖. 浙江工商大学, 2009(01)
- [4]美丽镰刀菌与固定化东北红豆杉的共生培养[J]. 周玉洁,程龙,陶文沂,周红. 中国生物工程杂志, 2008(08)
- [5]东北红豆杉与美丽镰刀菌的固定化法共生培养[D]. 周玉洁. 江南大学, 2008(04)
- [6]霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长和多糖合成的动力学研究[D]. 魏明. 合肥工业大学, 2007(04)
- [7]固定化微环境对红豆杉细胞初生代谢和次生代谢的影响[D]. 尹德明. 天津大学, 2006(02)
- [8]聚乙烯醇载体的制备及应用研究进展[J]. 门学虎,李彦锋,周林成. 甘肃科学学报, 2004(03)
- [9]植物细胞的固定化培养[J]. 王素芳. 浙江万里学院学报, 2004(02)
- [10]微胶囊固定化东北红豆杉细胞生长代谢的研究[D]. 孙祺. 天津大学, 2004(04)